ZytochromeB5（Zytochrom B5）Inhaltsmessung Kit Buch sagen

Spurmethode 100T/96S

Vor der offiziellen Prüfung notwendig 2-3 Eine Probe mit größeren erwarteten UnterschiedenBedeutung bestimmen:

ZytochromeP450 Ein Enzym ist eine Gruppe von Isologenen, die hauptsächlich in der Leber vorhanden sind und eine wichtige Rolle im Stoffwechsel von fremden Substanzen spielen, insbesondere Medikamenten undStoffwechsel von Giften. Zytochrome P450 und ZytochromeB5 jaP450 Die Enzymsysteme der beiden Hemoglobin-Proteine, deren Verhältnis ändert sich mit P450 Metabolismus lebtSex ist eng verbunden.

Bestimmungsprinzip:

Oxidiertes Zytochrom B5 Nach der Wiederherstellung* 424 nm Der maximale Absorptionsspitze wird durch Messung 424 nm und 490 nm Der Unterschied der Absorptionswerte kann berechnet werdenAusgangZytochromeB5Inhalt.

Zytochrom-b5-Gehalt-Test-Kit Serie P450

Zusammensetzung:

Reagenz 1: Pulver×2 Flasche,4℃Speichern. Vor der Anwendung 100 ml Destillationswasser, vollständig gelöst.

Arbeitsflüssigkeitsformerierung:

Vorbehandlung, Einweg-Handschuhe tragen, vorsichtig öffnen Sie das Reagenz drei Flaschendeckel, fügen Sie Reagenz zwei 20 ml vollständig aufgelöst,4℃Lichtschutz kann gespeichert werden 1 Woche.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Eigene Geräte und Zubehör:

Gewöhnliche Zentrifuge, Überdrehzentrifuge, verstellbare Pipette, UV-Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Spurglas-Vergleichsschale/96 Bohrplatten, und Dampfdestilliertes Wasser.

Zytochrome in der Probe B5 Extrahieren：

1、Entfernen Sie Zellkerne, Mitochondrien und andere Makromolekulare:Vereinbarung 0.5g Organisation, Beitritt 1 ml Reagenz 1, voll auf Eis geschliffen,10 000g 4℃AbHerz 30 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit und geben Sie sie in ein Übergeschwindigkeitszentrumpfrohr.

2、Rohpartikel:100 000g，4℃Zentrifugieren 60 MinutenEntfernen Sie die Flüssigkeit.

3、Entfernung von Verunreinigungen wie Hämoglobin:Schritt zu Schritt 2 Niederschlag hinzugefügt 1 ml Reagenz 1, nach der Abdeckung vollständig schockierend gelöst,100 000g Zentrifugieren 30 MinutenVerlassen.Reinige Flüssigkeit.

4、Testflüssigkeit:Schritt zu Schritt 3 Zusatz von Reagenzien II 0,5 mlNach der Abdeckung vollständig schockierend gelöst, das heißt, die zu prüfende Flüssigkeit muss am selben Tag gemessen werden.

Zytochrome B5 Inhaltsmessung:

1. Spektrophotometer/Enzym-Vorwärmung 30 Min。

2. Arbeitsflüssigkeit in 25℃Vorwärmung im Bad 30 Min。

3. Leere Rohre:取 1 ml Glasscheiben, hinzugefügt 10 μl destilliertes Wasser,200 μl Arbeitsflüssigkeit, Raumtemperatur 2 Min，424 nm und 490 nm EinatmenLichtwert,424 nm Der Absorptionswert wird alsA Leeres Rohr 1，490 nm Der Absorptionswert wird alsA Leeres Rohr 2。△A Leeres Rohr=A Leeres Rohr 1-A LeerWeißes Rohr 2

4. Messrohre:取 1 ml Glasscheiben, hinzugefügt 10 μl zur Prüfung,200 μl Arbeitsflüssigkeit, Raumtemperatur 2 Min，424 nm und 490 nm EinatmenLichtwert,424 nm Der Absorptionswert wird alsA Messrohre 1，490 nm Der Absorptionswert wird alsA Messrohre 2。

△A Messrohre=A Messrohre 1-A Messrohre 2。

AchtungEs muss nur ein leeres Rohr gemacht werden.

Proben von Zytochrom B5 Inhaltsrechnungsformel:

a.Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wurde, ist wie folgt:

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

ZytochromeB5 Inhalt(nmol/mg) prot) = (△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷(ε×d) ×V Gegen General÷（Cpr × V wie）

=122.8×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

ZytochromeB5 Inhalt (Nmol/g schwer)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷(ε×d) ×V Gegen General×（V Gesamt÷V wie）÷W

=61.4×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷W

ε: Prototypische ZytochromeB5 Namor-Dämpfungskoeffizient,171×10^-6 L/nmol/cm；d: Scheibendurchmesser (cm），1 cm； V Anti-Total: Gesamtvolumen des Reaktionssystems,210 μl = 2,1 x 10^-4 L；CprProteinkonzentrationen (mg/mlzusätzliche Messungen erforderlich sind;VProbe: das zu messende Flüssigkeitsvolumen in das Reaktionssystem hinzufügen,10 μl = 0,01 ml；VProbensumme: Gesamtvolumen der zu prüfenden Flüssigkeit,0,5 ml；WProbenqualität (g）。

b.verwenden 96 Die Berechnungsformel für die Bohrplattenmessung lautet wie folgt:

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

ZytochromeB5 Inhalt(nmol/mg) prot) = (△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷(ε×d) ×V Gegen General÷（Cpr × V wie）

=245.6×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

ZytochromeB5 Inhalt (Nmol/g schwer)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷(ε×d) ×V Gegen General×（V Gesamt÷V wie）÷W

=122.8×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷W

ε: Prototypische ZytochromeB5 Namor-Dämpfungskoeffizient,171×10^-6 L/nmol/cm；d：96 Lochdurchmesser (cm），0,5 cm； V Anti-Total: Gesamtvolumen des Reaktionssystems,210 μl = 2,1 x 10^-4 L；CprProteinkonzentrationen (mg/mlzusätzliche Messungen erforderlich sind;VProbe: das zu messende Flüssigkeitsvolumen in das Reaktionssystem hinzufügen,10 μl = 0,01 ml；VProbensumme: Gesamtvolumen der zu prüfenden Flüssigkeit,0,5 ml；WProbenqualität (g）。

Zytochrom-b5-Gehalt-Test-Kit Serie P450