Aniamin-4-Hydroxylase (AH)Aktivitätstests-Kit-Anleitung

Spurmethode 100 Rohr/48 wie

Vor der offiziellen Prüfung notwendig 2-3 Eine Probe mit größeren erwarteten UnterschiedenBedeutung bestimmen:

ZytochromeP450 Ein Enzym ist eine Gruppe von Isologenen, die hauptsächlich in der Leber vorhanden sind und eine wichtige Rolle im Stoffwechsel von fremden Substanzen spielen, insbesondere Medikamenten undStoffwechsel von Giften.AH inP450 Das Enzymsystem entsprichtCYP2E1 Untertyp,CYP2E1 Nicht nur am Stoffwechsel der Medikamente beteiligt, sondern auch katalysiertDer Aktivierungsprozess von Prekarzinogen und Pretoxinen.

Bestimmungsprinzip:

AH nach der katalytischen Hydroxylierung von Aniamin 4-Aminophenole, weitere Umwandlung in Phenole-Der Komplex, in 630 nm Charakteristische Absorptionsspitzen; DurchgangÜbermessung 630 nmAbsorptionsrate erhöht, um zu berechnenAHAktivität.

Aniamin-4-Hydroxylase (AH) Aktivitätsmessung Kit

Zusammensetzung:

Reagenz 1: Pulver×1 Flasche,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 100 ml Destillationswasser, vollständig gelöst. Reagenz 3: Pulver×1Flasche,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 10mlDestillationswasser, vollständig gelöst. Reagenz 4: Pulver×1Flasche,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 5 mlDestillationswasser, vollständig gelöst.

Reagenz 6: Pulver×1 Flaschen (Korrosionsmittel),4℃Lichtschutz aufbewahren. Vor der Anmeldung 10ml Destillationswasser, vollständig gelöst. Reagenz 7: Pulver×1Flasche,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 10mlDestillationswasser ist vollständig gelöst.

Standardflüssigkeit: Flüssigkeit×1 Flasche,10 μmol / L，4℃Lichtschutz aufbewahren.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Eigene Geräte und Zubehör:

Gewöhnliche Zentrifugen, Übergeschwindigkeitszentrumpen, sichtbare Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Spurglas-Vergleichsschale/96 Bohrplatten, Doppeldampf und Eis.

Rohenzymflüssigkeitsextraktion:

1、Entfernen Sie Zellkerne, Mitochondrien und andere Makromolekulare:Vereinbarung 0.5g Organisation, Beitritt 1 ml Reagenz 1, voll auf Eis geschliffen,10 000g 4℃，Zentrifugieren 30 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit und übertragen Sie sie in ein Übergeschwindigkeitszentrumpfrohr.

2、Rohpartikel: 100 000g 4℃Zentrifugieren. 60 MinutenEntfernen Sie die Flüssigkeit.

3、Entfernung von Verunreinigungen wie Hämoglobin:Schritt zu Schritt 2 Niederschlag hinzugefügt 1 ml Reagenz 1, nach der Abdeckung vollständig schockierend gelöst,100 000g Zentrifugieren 30 MinutenVerlassen.

Reinige Flüssigkeit.

4、Endliche Partikel:Schritt zu Schritt 3 Zusatz von Reagenzien II 0,5 mlNach der Abdeckung vollständig schockierend gelöst, d. h. grobe Enzymflüssigkeit, zu messen.

Messvorgänge：

1. Spektrophotometer/Enzym-Vorwärmung 30 MinDie Wellenlänge einstellen 630 nmDestillationswasser Null.

2. Reagenz 3 in 37℃Vorwärmung im Bad 30 Minuten。

3. Reagenz 5 im Eisbad gekühlt 30 Minuten。

4. Standardrohr:取 0.5 ml EP Schlauch, beitreten 100 μl Standardflüssigkeit,100 μl Reagenz 6,100 μl Reagenz 7, nach der Mischung bei Raumtemperatur 30 Minuten，Absaugen 200 μlGlasvergleichsschale in Spuren/96Löcherplatte,630 nmMessung der Lichtabsorption, wieAStandardrohre.

5. Kontrollrohr:取 0.5 ml EP Schlauch, beitreten 50 μl Enzymflüssigkeit,100 μl Reagenz 3,50 μl Destillationswasser nach Mischung 37℃Wärmedämmung im Bad 30 Minuten；

Wieder beitreten 100 μl Reagenz 5, Eisbad nach Mischung 5 Minuten，11000rpm，4℃Zentrifugieren. 10 Minuten；取 100 μl Flüssigkeit, neue hinzufügen 0.5 mlEP Rohre; Wieder beitreten 100 μl Reagenz 6,100 μl Reagenz 7, nach der Mischung bei Raumtemperatur 30 MinutenAbsaugen. 200 μl Glasvergleichsschale in Spuren/96 LöcherBrett,630 nmMessung der Lichtabsorption, wie AKontrollrohr.

6. Messrohre:取 0.5 ml EP Schlauch, beitreten 50 μl Enzymflüssigkeit,100 μl Reagenz 3,50 μl Reagenz 4 nach Mischung 37℃Wärmedämmung im Bad 30 Minuten；

Wieder beitreten 100 μl Reagenz 5, Eisbad nach Mischung 5 Minuten，11000rpm，4℃Zentrifugieren. 10 Minuten；取 100 μl Flüssigkeit, neue hinzufügen 0.5 mlEP Rohre; Wieder beitreten 100 μl Reagenz 6,100 μl Reagenz 7, nach der Mischung bei Raumtemperatur 30 MinutenAbsaugen. 200 μl Glasvergleichsschale in Spuren/96 LöcherBrett,630 nmMessung der Lichtabsorption, wie AMessrohre.

AH Formel zur Berechnung der Aktivität：

a.Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wurde, ist wie folgt:

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

Definition der aktiven Einheit:37℃Katalysiert pro Milligramm Protein pro Minute 1nmol 4-Aminophenole sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AH Aktivität(nmol/min/mg) prot) =C Standardprodukte× V Standardprodukte×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre×Verdünnung Vielfach÷（Cpr × Vwie)÷T

=2×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre÷Cpr。

（2）Berechnung nach Probenqualität

Definition der aktiven Einheit:37℃Katalysiert pro Gramm Probe pro Minute 1nmol 4-Aminophenole sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AHAktivität(nmol/min/g) Schwer)=C Standardprodukte× V Standardprodukte×（A Messrohre -A Kontrollrohr）÷A Standardrohre×Verdünnung Vielfach÷(W×V) wie÷T

=2×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre÷W

CStandardprodukte:10 μmol / L；VStandardprodukte:100 μl = 1 × 10^-4LVerdünnungsmehrfach: VGegen General÷VOberflüssigkeit= 300 μl ÷ 100 μl = 3；Cpr: dickProteinkonzentration (mg/ml）Eine zusätzliche Prüfung ist erforderlich, empfehlen wir die Verwendung des Unternehmens. BCA Proteingehaltsmessung Kit;W Probenqualität;VBeispiel: das Volumen der Rohenzymflüssigkeit im Reaktionssystem hinzufügen, 50 μl = 0,05 ml； TKatalysische Reaktionszeit (Min），30 Minuten。

b.verwenden 96 Die Berechnungsformel für die Bohrplattenmessung lautet wie folgt:

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

Definition der aktiven Einheit:37℃Katalysiert pro Milligramm Protein pro Minute 1nmol 4-Aminophenole sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AH Aktivität(nmol/min/mg) prot) =C Standardprodukte× V Standardprodukte×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre×Verdünnung Vielfach÷（Cpr × Vwie)÷T

=2×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

Definition der aktiven Einheit:37℃Katalysiert pro Gramm Probe pro Minute 1nmol 4-Aminophenole sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AH Aktivität(nmol/min/g) Schwer) =C Standardprodukte× V Standardprodukte×（A Messrohre -A Kontrollrohr）÷A Standardrohre×Verdünnung Vielfach÷(W×V) wie÷T

=2×（A Messrohre -A Kontrollrohr)÷A Standardrohre÷W

C Standardprodukte:10 μmol / L；V Standardprodukte:100 μl = 1 × 10^-4LVerdünnungsmehrfach:V Gegen General÷VOberflüssigkeit= 300 μl ÷ 100 μl = 3；CprProteinkonzentration (mg/ml），Eine zusätzliche Messung ist erforderlich, empfehlen wir die Verwendung des Unternehmens BCA Proteingehaltsmessung Kit; W Probenqualität; VBeispiel: das Volumen der Rohenzymflüssigkeit im Reaktionssystem hinzufügen, 50 μl = 0,05 ml； TKatalysische Reaktionszeit (Min），30 Minuten。

Aniamin-4-Hydroxylase (AH) Aktivitätsmessung Kit