Acetyldan-Alkalinesterase (AchE）Aktivitätstests-Kit-Anleitung

Spurmethode 100T/96S

Vor der offiziellen Prüfung notwendig 2-3 Eine Probe mit größeren erwarteten UnterschiedenBedeutung bestimmen:

AchE Es gehört zur Silansäurehydrolyse und ist weit verbreitet in einer Vielzahl von tierischen Geweben und Seren.AchE Katalysation von Acetyl-Dan-Alkali (Ach）Hydrolyse, inSie spielen eine wichtige Rolle bei der neurologischen Regulierung.

Bestimmungsprinzip:

AchEKatalyseAchHydrolyse zur Herstellung von Dan-Alkali, Dan-Alkali und Disulfo-Nitrobenzonsäure（DTNB）Erzeugung von Rollen 5-Basis-Nitrobenzonsäure（TNB）； TNBin 412nmAbsorptionsspitze, durch Messung 412 nmAbsorptionsrate erhöht, Berechnung AchEAktivität.

Testkit für die Aktivität von Acetyldan-alkalinesterase Serie P450

Zusammensetzung:

Reagenz 3: Pulver×1 Zweig,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 1.3 ml Reagenz 2, vollständig schockierend gelöst.Reagenz 4: Pulver×1 Zweig,4℃Speichern. Vor der Anmeldung 1.3 ml Reagenz 2, vollständig schockierend gelöst.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Eigene Geräte und Zubehör:

Sichtbares Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Spuren-Quarzschalen/96 Bohrplatten, Tieftemperaturzentrifugen, Wasserbad, verstellbare Pipette und destilliertes Wasser.

Grobes EnzymFlüssigkeitsextraktion：

1. Organisation: nach Organisationsqualität (g(1) Volumen des Reagents(ml)für 1：5~10Der Anteil (Empfohlen ungefähr 0.1gOrganisation, Beitritt 1 mlReagenziena) ein Eisbad durchführen,8000g 4 ℃Zentrifugieren 10 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit zur Prüfung.

2. Bakterien, Pilze: nach Zellzahl (10⁴ (a): Volumen des Reagents (ml）für 500~1000：1 Der Anteil (Vorschlag 500 Millionen Zellen plusEinen 1 ml Reagenz 1），Eisbad Ultraschall Zerbrechen Zellen (Leistung 300wUltraschall. 3 Sekunden, Intervall 7 Sekunden, Gesamtzeit 3 Minuten）und dann; 8000g， 4℃Zentrifugieren. 10 MinutenEntfernen und auf dem Eis testen.

3. Flüssigkeiten wie Serum: Direkte Messung.

Messvorgänge:

1. Spektrophotometer/Enzym-Vorwärmung 30 MinDie Wellenlänge einstellen 412 nmDestillationswasser Null.

2. Reagenz 2 wird in 37℃Vorwärmung im Bad 30 Minuten。

3. Nehmen Sie Spuren von Quarzschalen/96 Bohrplatten, in der Reihenfolge hinzugefügt 20 μlFlüssigkeit,160 μlReagenz 2,10μl Reagenz 3 und 10μlReagenz 4, schnell mischenGut, auf412nm Ortsbestimmung3 Minuten Veränderungen der inneren Absorptionswerte,10s Absorptionswert alsA1， 第190s Absorptionswert alsA2。△A MessrohreA2 bis A1。 AchEBerechnung der Aktivität:

a.Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wurde, ist wie folgt:

1. OrganisationAchE Aktivität

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

Definition der aktiven Einheit: pro Milligramm Protein pro Minute katalytisch produziert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/mg) prot)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷（Cpr × V wie）÷T

= 245×△A÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

Definition der Aktivitätseinheit: pro Gramm Gewebe pro Minute katalytisch erzeugt 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/g) Schwer)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷（W × V wie÷V Gesamt）÷T

=245×△A ÷ W

2. Bakterien, ZellenAchE Aktivität

Definition der aktiven Einheit: pro 10⁴ 1 Zelle pro Minute katalysiert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/10)⁴ Zelle)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷(Anzahl der Zellen)× V wie÷V Gesamt）÷T

=245×△A ÷Anzahl der Zellen

3. SerumAchE Aktivität

Definition der aktiven Einheit: pro ml Serum pro Minute katalytisch produziert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min) /ml)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹÷V wie÷T

=245×△A

ε：TNBMoor-Dämpfungskoeffizient,13.6×10³ L/mol/cm；d: Lichtdurchmesser,1 cm；VGegensumme: Gesamtvolumen des Reaktionssystems (L）， 200 μl = 2 × 10^-4L；V Probensumme: Extrahiertes Flüssigkeitsvolumen,1 ml；10⁶：1mol = 1 × 10⁶von μmol；CprProteinkonzentration (mg/ml）；V Probe: Fügen Sie das obere Flüssigkeitsvolumen hinzu (ml），0.02 ml；W Probenqualität;TReaktionszeit (Min），3 Minuten。

b.verwenden 96 Die Berechnungsformel für die Bohrplattenmessung lautet wie folgt:

1. OrganisationAchE Aktivität

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

Definition der aktiven Einheit: pro Milligramm Protein pro Minute katalytisch produziert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/mg) prot)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷（Cpr × V wie）÷T

= 490×△A÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

Definition der Aktivitätseinheit: pro Gramm Gewebe pro Minute katalytisch erzeugt 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/g) Schwer)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷（W × V wie÷V Gesamt）÷T

= 490×△A ÷ W

2. Bakterien, ZellenAchE Aktivität

Definition der aktiven Einheit: pro 10⁴ 1 Zelle pro Minute katalysiert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min/10)⁴ Zelle)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹)÷(Anzahl der Zellen)× V wie÷V Gesamt）÷T

=490×△A ÷Anzahl der Zellen

3. SerumAchE Aktivität

Definition der aktiven Einheit: pro ml Serum pro Minute katalytisch produziert 1nmol TNB Die Enzyme sind 1 eine lebende Enzymeinheit.

AchE Enzymaktiv(nmol/min) /ml)= (△A ÷e÷d×V Gegen General×10⁹÷V wie÷T

=490×△A

ε：TNB Moor-Dämpfungskoeffizient,13.6×10³ L/mol/cm；d：96 Lichtdurchmesser,0.5 cm；V Gegensumme: Gesamtvolumen des Reaktionssystems (L）， 200 μl = 2 × 10^-4L；VProbensumme: Extrahiertes Flüssigkeitsvolumen,1 ml；10⁶：1mol = 1 × 10⁶von μmol；CprProteinkonzentration (mg/ml）；VProbe: Fügen Sie das obere Flüssigkeitsvolumen hinzu (ml），0.02 ml；W Probenqualität;TReaktionszeit (Min），3 Minuten。

Testkit für die Aktivität von Acetyldan-alkalinesterase Serie P450