Carboxyesterase (CarE）Aktivitätstests-Kit-Anleitung

Spurmethode 100T/96S

Vor der offiziellen Prüfung notwendig 2-3 Eine Probe mit größeren erwarteten UnterschiedenBedeutung bestimmen:

SäugetiereCarEauch Lipodextrase genannt (AliesteraseWeit verbreitet in Geweben und Organen und gehört zur Familie der Silansäurehydrolysen.CarEKatalysiert die Hydrolyse von endogenen und exogenen Substanzen, die Esterbindungen, Aminbindungen und Sulfurbindungen enthalten, kann jedoch nicht die Hydrolyse von Acetyldanalkalien und deren Analogen katalysieren.CarE Bei der Beteiligung am Lipidtransport und dem Stoffwechsel und im Zusammenhang mit der Entgiftung und dem Stoffwechsel einer Vielzahl von Medikamenten, Umweltgiften und Krebserzeugern können Phosphororganische Pestizide binden undUnterdrückungCarEAktivität.

Bestimmungsprinzip:

CarE Essigsäure katalysieren-1-Naphthaler erzeugen Naphthaler, festen Korb Farbe; in 450 nm Lichtabsorption erhöhte Geschwindigkeit, BerechnungCarE Aktivität.

Carboxyesterase (CarE) Aktivitätsbestimmungskit

Zusammensetzung:

Reagenz 3: Pulver×2 Zweig, 4℃Speichern, vor Gebrauch 1 Reagenz 3, plus 0,6 ml wasserloses Ethanol vollständig gelöst; Reagenz 4: Pulver×2Zweig,-20℃Speichern, vor Gebrauch 1 Substanz 4, mit einer kleinen Menge Reagenz 2 gelöst;

Arbeitsflüssigkeitsformerierung: Vorbearbeitung 1 In Flasche Reagenz 2, das gelöste Reagenz 3 und Reagenz 4 zugegeben 1 Zweig, vollständig gelöst, filtriert,4℃Lichtschutz, verfügbar 1 Woche.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Eigene Geräte und Zubehör:

Sichtbares Spektrophotometer, Tischzentrifuge, verstellbare Pipette,1 ml Glas vergleicht Ceramic-Geschirr, Grinder, Eis und destilliertes Wasser.

Rohenzymflüssigkeitsextraktion:

Vorbereitung von Bakterien- und Zellproben

Sammeln Sie Bakterien oder Zellen in ein Zentrifugerrohr und entfernen Sie es nach der Zentrifuge; Nach jedem 200 Millionen Bakterien oder Zellen 400 μl Reagenz 1: Ultraschall zerstört Bakterien oder Zellen (Leistung 20% Ultraschall 3sIntervall. 10sWiederholung. 30 zweiten);12000g 4 ℃Zentrifugieren 30 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit zur Prüfung.

2Organisation: nach der Organisationsqualität (g(1) Volumen des Reagents(ml)für 1：5~10 Der Anteil (Empfohlen ungefähr 0.1g Organisation, Beitritt 1 ml a) ein Eisbad durchführen;12000g 4 ℃Zentrifugieren 30 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit zur Prüfung.

3Flüssigkeit: Direkte Messung

Messvorgänge:

1. Spektrophotometer/Enzym-Vorwärmung 30 MinutenDie Wellenlänge einstellen 450 nmDestillationswasser Null.

2. Reagenz 2 wird in 37℃Vorwärmung im Bad 30 Min。

3. Leere Rohre:Nehmen Sie Spuren von Glas/96 Bohrplatten, in der Reihenfolge hinzugefügt 5 μl Destillationswasser und 200 μl Reagenz 2, schnell vermischt, 450nm Testenfestgelegt 3 MinutenVeränderungen der inneren Absorptionswerte, 10sAbsorptionswert alsA1， 第 190sAbsorptionswert alsA2。△ALeeres RohrA2 bis A1

4. Messrohre:Nehmen Sie Spuren von Glas/96 Bohrplatten, in der Reihenfolge hinzugefügt 5 μl Flüssigkeit und 200 μl Reagenz 2, schnell vermischt, 450nm Testen

festgelegt 3 Minuten Veränderungen der inneren Absorptionswerte, 10s Absorptionswert alsA3， 第 190s Absorptionswert alsA4。△A Messrohre=A4-A3

Hinweis: Das leere Rohr muss nur einmal gemessen werden.

CarE Aktivitätsrechnungsformel:

a.Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wurde, ist wie folgt:

1In der OrganisationCarE Aktivität

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

CarE Definition der aktiven Einheit: promg Gewebeproteine in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/mg) prot)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General÷(Cpr×V) wie÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷Cpr

（2）Berechnen nach Probengewicht

CarE Definition der aktiven Einheit: prog Organisation in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/g) Schwer)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General×（V Gesamt÷V wie）÷W÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷W 2Bakterien oder Zellen.CarEAktivität

CarE Definition der aktiven Einheit: pro 1 Tausende von Bakterien oder Zellen 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als eineCarE Leben

Sexuelle Einheit.

CarE Enzymaktiv(U/10⁴ Zelle)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr) ×V Gegen General×（V Gesamt÷V wie)÷Zelldichte (10⁴ Zelle/ml）

÷T=13,67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr)÷Zelldichte (10⁴ Zelle/ml） 3In der FlüssigkeitCarEAktivität

CarE Definition der aktiven Einheit: pro ml Probe in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/ml) )= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General÷V wie÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr)

V Anti-Total: Gesamtvolumen des Reaktionssystems,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Gesamtvolumen: Gesamtvolumen der oberen Flüssigkeit,1 ml；V Probe: Fügen Sie das obere Flüssigkeitsvolumen hinzu(ml)，

0.005 ml；CprProteinkonzentration,mg/ml；WProbenqualität (g）；TReaktionszeit (Min），3 Minuten。

b.verwenden 96 Die Berechnungsformel für die Bohrplattenmessung lautet wie folgt:

1In der OrganisationCarE Aktivität

（3）Berechnung nach Proteinkonzentration

CarE Definition der aktiven Einheit: promg Gewebeproteine in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/mg) prot)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General÷(Cpr×V) wie÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷Cpr

（4）Berechnen nach Probengewicht

CarE Definition der aktiven Einheit: prog Organisation in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/g) Schwer)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr) ×V Gegen General×（V Gesamt÷V wie）÷W÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr÷W 2Bakterien oder Zellen.CarEAktivität

CarE Definition der aktiven Einheit: pro 1 Tausende von Bakterien oder Zellen 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als eineCarE Leben

Sexuelle Einheit.

CarE Enzymaktiv(U/10⁴ Zelle)= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General×（V Gesamt÷V wie)÷Zelldichte (10⁴ Zelle/ml）

÷T=13,67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr)÷Zelldichte (10⁴ Zelle/ml）

3. FlüssigkeitCarE Aktivität

CarE Definition der aktiven Einheit: pro ml Probe in 37℃Erhöhte katalytische Absorption pro Minute im Reaktionssystem 1 Definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

CarE Enzymaktiv(U/ml) )= (△A Messrohre-△A Leeres Rohr)× V Gegen General÷V wie÷T

=13.67×(△A Messrohre-△A Leeres Rohr)

V Anti-Total: Gesamtvolumen des Reaktionssystems,205μl = 2,05 × 10^-4L；V Gesamtvolumen: Gesamtvolumen der oberen Flüssigkeit,1 ml；V Probe: Fügen Sie das obere Flüssigkeitsvolumen hinzu(ml)，

0.005 ml；CprProteinkonzentration,mg/ml；WProbenqualität (g）；TReaktionszeit (Min），3 Minuten。

Carboxyesterase (CarE) Aktivitätsbestimmungskit