Säure Phosphatase (AKP）Aktivitätstests-Kit-Anleitung

Spurmethode 100T/48S

Vor der offiziellen Prüfung notwendig 2-3 Eine Probe mit größeren erwarteten UnterschiedenBedeutung bestimmen:

AKP Katalysierte Phosphat-Monoester hydrolysiert anorganische Phosphorsäure unter sauren Bedingungen, die häufig in Makrophagen-Lylasen vorkommen.AKP Es wird häufig zur Hilfsdiagnostik von Prostatakrebs verwendet.

Bestimmungsprinzip:

In einer saueren Umgebung,AKP Katalyse der Hydrolyse von Nitrophenylphosphat 4-Nitro-BenPhenol, in405 nm Charakteristische Lichtabsorption; Durch Testsfestgelegt405 nmAbsorptionsrate erhöht, um zu berechnenAKPAktivität.

Säure Phosphatase (ACP) Aktivitätsbestimmungskit Esterase-Serie

Zusammensetzung:

Eigene Geräte und Zubehör:

enzymatische Messung,96 Bohrplatten, Tischzentrifugen, Wasserwannen, verstellbare Pipetten und destilliertes Wasser.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Rohenzymflüssigkeitsextraktion:

1. Organisation: nach Organisationsqualität (g(1) Volumen des Reagents(ml)für 1：5~10 Der Anteil (Empfohlen ungefähr 0.1g Organisation, Beitritt 1 ml Reagenziena) ein Eisbad durchführen,4℃、10000gZentrifugieren 10 MinutenEntnehmen Sie die Flüssigkeit zur Prüfung.

2. Bakterien oder Zellen: nach der Anzahl der Bakterien oder Zellen (10⁴ (a): Volumen des Reagents (ml）für 500~1000：1 Der Anteil (Vorschlag 500 zehntausendZellen beitreten 1 ml Reagenz I), Eisbad Ultraschall Zerbrechen Zellen (Leistung 300wUltraschall. 3 Sekunden, Intervall 7 Sekunden, Gesamtzeit 3 Min）；dann 10000g，4℃Zentrifugieren. 10 MinutenEntfernen und auf dem Eis testen.

3. Das Blut kann direkt oder nach entsprechender Verdünnung gemessen werden.

Messung:

1. Enzym-Vorwärmung 30 MinDie Wellenlänge einstellen 405 nm。

2. in EP Folgendes Reagenz in die Röhre hinzufügen

Mischen, saugen 200µL beitreten 96 in den Löchern,405 nm Messung der Absorptionswerte der einzelnen Röhre.ΔA = A Messrohre-A Kontrollrohr.

Hinweis: Jedes Messrohr muss ein Kontrollrohr sein.

AKP Berechnung der Aktivität:

Standardkurven y =7.3336x +0.0179；R² =0.9996；x Standardkonzentrationen (μmol/ml），y Für AbsorptionswerteΔA。

1. Im Blut.AKP Aktive Berechnung

Definition der aktiven Einheit:30℃Katalysiert pro Milliliter Blut pro Minute 1 μmol 4-Nitrophenol wird definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

AKP 活力(μmol/min/ml)=（ΔA-0,0179）÷7.3336 × V Gegen General÷T÷V wie

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）

2. in Gewebe, Bakterien oder Zellen AKP Aktive Berechnung

（1）Berechnung nach Proteinkonzentration

Definition der aktiven Einheit:30℃Katalysiert pro Milligramm Protein pro Minute 1 von μmol 4-Nitrophenol wird definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

AKP 活力(μmol/min/mg) prot)= (ΔA-0,0179)÷7,3336 ×V Gegen General÷T÷(V) wie× Cpr)

=0.4545 ×（ΔA-0,0179）÷Cpr

（2）Berechnung nach Probenqualität

Definition der aktiven Einheit:30℃Katalysiert pro Gramm Gewebe pro Minute 1 μ mol 4-Nitrophenol wird definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

AKP 活力 (μmol/min/g) Schwer=(ΔA-0,0179)÷7,3336 × V Gegen General÷T÷(W×V) wie÷V Gesamt)

= 0.4545 ×（ΔA-0.0179）÷W

（3）Berechnen nach der Anzahl der Bakterien oder Zellen

Definition der aktiven Einheit:30℃Mittel jedes 10⁴ Bakterien oder Zellen werden pro Minute katalysiert. 1 μ mol 4-Nitrophenol wird definiert als 1 eine lebende Enzymeinheit.

AKP 活力(μmol/min/10)⁴ Zelle)=(ΔA-0,0179)÷7,3336 × V Gegen General÷T÷(Anzahl der Zellen)× V wie÷V Gesamt）

=0.4545 ×（ΔA-0,0179）÷Anzahl der Zellen

VGegensumme: Gesamtvolumen des Reaktionssystems (ml），1 ml； W Probenqualität,g； V Probe: Fügen Sie das Probenvolumen in das Reaktionssystem ein（ml），

0,01 ml；V Probensumme: Extrahiertes Flüssigkeitsvolumen,1 ml；TReaktionszeit (Min），30 Min；500Anzahl der Zellen oder Bakterien,500 Tausende.

Hinweis:

AKP Unstabil, vor allem bei 37℃undpH-Wert größer als 7 Unter den Bedingungen des schnellen Verlusts der Vitalität, so dass die saure Phosphatase-Probe in der Regel am selben Tag vorbereitet werden muss;Serumproben pro ml Serum hinzugefügt 10 mgNatriumwassersitrat oder 5 mgNatriumwasserstoffsulfat machtpH-WertHinunter 6.5 Folgendes oder 5 mlBlutHinzufügen löschen 30%Essigsäurelösung 2～3 Tropfen, auf 4℃Speicherbar 1 Woche.

Säure Phosphatase (ACP) Aktivitätsbestimmungskit Esterase-Serie