Universal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger

NoblaidUniversal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger

Universal T-Carrier Kolonie PCR Identifizierung Kit

Katalognummer:42015

Zusammensetzung, Lagerung und Stabilität:

Lagerung: -20 ° C aufbewahren.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Produktbeschreibung:

Koloniale PCR-Identifizierung ist die schnellste Methode, um zu bestimmen, ob es positive Klone (einschließlich der Insertion Fragmente) nach T-Träger-Klone-Verbindung. Allerdings sind die auf dem Markt erhältlichen Kolonial-PCR-Identifizierungskits mit spezifischen T-Träger-Primären wie T3, T7 oder SP6 und können nur zur Identifizierung eines bestimmten T-Träger-Verbindungs-positiven Klons verwendet werden. Wenn verschiedene T-Träger verwendet werden, müssen mehrere Identifizierungskits gleichzeitig gekauft werden, was die Nutzungskosten erheblich erhöht. Das Unternehmen verwendet ein generisches T-Trägerkolonie-PCR-Identifizierungskit, das von einem generischen T-Trägerprimer entwickelt wurde, und kann mit dem Kauf eines einzigen Kits für die Identifizierung aller gängigen T-Träger-Verbindungen auf dem Markt (einschließlich der pGEM-, pUC- und pBluescript-Serien) verwendet werden. Darüber hinaus ist die Entfernung von Kolonien-PCR-Identifizierungs-Kits mit T3, T7 oder SP6 als Vorläufer sehr kurz von der Insertionsstelle entfernt, so dass bei der Identifizierung der Insertion von ungefähr 100 bp oder kleineren Fragmenten die Größe des Vorläuferdiomerstreifens des negativen Klons und des positiven Klonvergrößerungsstreifens nahe und nicht unterscheidbar ist. Oft werden die Streifen des Primärdimers als positiv verstärkte Streifen angesehen, was zu falschen Positiven führt. Im Gegenteil verursacht es falsche Negativitäten. Der Abstand des allgemeinen T-Trägers-Primiers in diesem Kit ist mindestens 150 bps oder höher, wenn das Fragment nicht eingesetzt wird, und zusammen mit der Länge des eingesetzten Fragments kann klar unterschieden werden, ob das Band, das das Fragment verstärkt, oder das Band, das das Primierdimer verstärkt, eingesetzt wird. Vermeiden Sie falsch positiv oder falsch negativ, um die Genauigkeit erheblich zu verbessern.Wir haben ein tragbares PCR MasterMix-Vormischsystem entwickelt, das Sie ohne Hinzufügen verschiedener Zutaten direkt zu einer einzelnen Kolonie hinzufügen muss, die nach etwa einer Stunde PCR-Reaktion und Elektrophorese-Tests die Ergebnisse der rekombinierten Kolonieneidentifizierung erhalten kann.

Erwartete Erweiterungen:

Hinweis:

1. Bei der Identifizierung einer Kolonie neu zu organisieren, sollte vor der Auswahl einer einzelnen Kolonie zuerst markiert werden, um die Verwendung nach der Identifizierung zu erleichtern.

2. Bei der Auswahl einer Kolonie sollten Sie eine einzelne Kolonie auswählen und nicht zu viele Bakterien auswählen, um das PCR-Ergebnis nicht zu beeinflussen.

3. Wenn Sie das PCR-Verfahren einrichten, bestimmen Sie die Verlängerungszeit basierend auf der Größe des eingesetzten Fragments. Wenn die Größe des eingesetzten Fragments weniger als 1 kb ist, kann die Verlängerungszeit 30-45 Sekunden betragen, wenn der Fragment länger ist, können Sie die Verlängerungszeit in diesem Verhältnis erhöhen.

Betriebsschritte (25mlZum Beispiel können Kunden auch 20mlDas System):

1. 1 x Taq MasterMix-Reaktionslösung mit Vorläufer nach dem folgenden System zuordnen.

2.Nach der Nummerierung der Kolonie auf der über Nacht kultivierten Tablette, wählen Sie einen Teil der einzelnen Kolonie mit einem sterilisierten Pistolenkopf, um die oben genannte Reaktionsflüssigkeit hinzuzufügen, und mischen Sie die Kolonie vollständig in die Reaktionsflüssigkeit zu streuen.

Eine weitere negative Kontrolle ohne Kolonie kann eingestellt werden, um die Analyse der Ergebnisse zu erleichtern.

3.Die PCR-Röhre werden auf ein Thermocyclometer gelegt, um die Reaktion unter den folgenden Bedingungen zu beginnen, unter den folgenden empfohlenen Bedingungen:

94℃ 10 Minuten

94℃ 30 Sekunden

55℃ 30 Sekunden 30-33 Zyklen

72 ℃ 0,5-1 min

72℃ 5 Minuten

Hinweis: Ändern Sie die Verlängerungszeit entsprechend der Größe des eingefügten Segments. Die präventive Zeit wurde auf 10 Minuten verlängert, hauptsächlich um die Kolonie zu spalten und die DNA-Vorlage freizugeben.

Nach Beendigung der Reaktion 5-10ml Direkte elektrophoresische Prüfung.

Hinweis: Wenn Bakterien schwer zu klären oder Verunreinigungen poly falsch negativ, versuchen Sie die folgende Methode, die nach der Freisetzung der DNA durchgeführt wird.

1. Kolonien wählen 50ml dd Wasser (oder 10ml dd Wasser), schütteln.

2. Aktivieren Sie das Enzym in der Flüssigkeit für 99 Grad und 10 Minuten und freisetzen Sie die DNA.

3. 12.000 rpm Zentrifuge Entfernen Sie die Zellstücke in 1 Minute.

4. Entfernen Sie PCR, 25mDas PCR-System 5m(Anfang 50)ml dd Wasser) oder 1mStartseite (10)ml dd Wasser) Vorlage zu machen.

Universal T-Träger Kolonie PCR Identifizierung Kit T4 Prinzip Träger