Effiziente Empfindungszellen-Vorbereitungskits

Effiziente Empfindungszellen-Vorbereitungskits

Katalognummer:30018

Zusammensetzung, Lagerung und Stabilität:

Kurzfristige Verwendung von 4 ° C, um Verschmutzung zu vermeiden. Langfristige Aufbewahrung - 20 ° C für ein Jahr.

Die Parameter des spezifischen Produkts hängen von den Parametern ab, die die Produktbeschreibung erhalten haben

Produktbeschreibung:

1. Effiziente Empfindungszellen-VorbereitungskitsEs wurde auf der Grundlage der herkömmlichen hocheffizienten Methode der Zubereitung von Gefühlszellen geeignet verbessert, ist einfach zu bedienen und hat eine hohe Transformationseffizienz.

2. Mit diesem Kit erreichen Sie eine Effizienz im Gefühlszustand von 10⁸CFU/μg Plasma. Für kleine Plasmapartikel ist die Effizienz etwas höher, während für große Plasmapartikel die Effizienz etwas niedriger ist. Die hocheffizienten empfindlichen Zustandszellen, die mit diesem Kit hergestellt werden, können nicht nur Plasmide umwandeln, sondern eignen sich auch hervorragend für die Umwandlung gewöhnlicher Verbindungsprodukte, insbesondere in Situationen, in denen eine hohe Transformationseffizienz erforderlich ist, wie z. B. Transformationsflache Verbindungen.

3. Mit diesem Kit ist die Bedienung einfach und es dauert nur etwa 60 Minuten, nachdem die Bakterien kultiviert sind, um eine hocheffiziente empfindliche Zelle vorzubereiten.

4. Dieses Kit ist für die meisten gängigen E. coli-Bakterien geeignet, darunter Top 10, DH5α, BL21 (DE3), JM109, TG1, HB101 und XL-1. Allerdings kann sich die Transformationseffizienz in verschiedenen Arten erheblich unterscheiden.

5. Dieses Kit kann mehrmals verwendet werden, um insgesamt 100 100 μl empfindliche Zellen herzustellen.

v Hinweis:

1. Alle Reagenzien, Verbrauchsmaterialien, Geräte und Geräte müssen sterilisiert werden.

2. Antibiotikafreie LB werden bei der Herstellung von sensiblen Zellen verwendet. Bei einer 37 ° C-Kultivierung nach einem Hitzeschock bei der Verwendung von sensiblen Bakterien muss antibiotikafreie LB verwendet werden, auch wenn das übertragene Plasmid resistent ist.

3. Wenn die Gefühlszellen vorbereitet sind, bitte schnell auf -70 ° C übertragen.

Betriebsschritte:(Bitte beachten Sie vor dem Experiment.)

1. Beschichtete Platten:

Um eine optimale Empfindungseffizienz zu erzielen, müssen Sie zuerst Glycerin oder andere Formen der konservierten Bakterien auf LB-Tabletten auftragen und über Nacht kultivieren.

2. Impfung:

Nehmen Sie eine LB-Platte mit frisch kultivierten Bakterien und die anschließenden Operationen werden in der Supernet-Platte durchgeführt. Tauchen Sie die Spitze der Pinzette in 70% Alkohol ein und brennen Sie sie leicht auf der Alkohollampe, damit die Spitze der Pinzette steril ist. Nehmen Sie mit einer Pinzette einen sterilen Kunststoffkopf oder Zahnstäcker, wählen Sie einen Monoklon aus der Tablette aus und geben Sie den mit Bakterien eingetauchten Kunststoffkopf oder Zahnstäcker in ein Bakterienkulturärohr mit 3 ml SOB oder LB (der Kunde sollte je nach Bakterien das geeignete Medium auswählen). Die oben genannten Operationen können auch mit Impfringen u.a. durchgeführt werden.

3. Erziehung:

37 ° C etwa 250 rpm Kultivierung über Nacht, in der Regel Kultivierungszeit in etwa 16 Stunden ist geeignet. Nicht länger als 18 Stunden.

4. Wiederimpfung:

Abhängig von der erforderlichen Menge an hocheffizienten empfindlichen Zellen, die zubereitet werden, werden mit frisch kultivierten Übernachtungsbakterien im Verhältnis von 1:500 kultiviert. Zum Beispiel nehmen Sie 100 µl frischer Übernachtungsbakterien in 50 ml SOB oder LB bei 37 ° C und kultivieren sie bei etwa 250 rpm.

5. Gefühlszellen vorbereiten:

ð Hinweis: Die Drehzahl der Zentrifuge und die Zentrifugezeit sind sehr wichtig für die Produktion von sensorischen Zellen, die optimale Drehzahl und die Zentrifugezeit für verschiedene Arten von Bakterien unterscheiden sich und sollten je nach Situation optimiert werden. Die beste Situation ist die richtige Drehzahl und Zentrifugezeit, damit Bakterien genau zentrifugieren können, aber nicht zu eng, sonst ist es schwierig, wieder aufzuspenden, nur stark zu schlagen, um wieder aufzuspenden, wird die Zelle schädigen und die Transformationseffizienz beeinflussen.

1) Wenn die kultivierte Bakterie OD600 etwa 0,5 erreicht hat, wird die kultivierte Bakterie in ein Eisbad gelegt und 15 Minuten gekühlt. Hinweis: Alle nachfolgenden Operationen müssen bei 4 Grad oder Eisbad durchgeführt werden.

2) 4 ° C (die Zentrifuge muss vorgekühlt werden) 3000-3500g Zentrifuge 5 Minuten, um Bakterien zu sammeln und die Oberfläche zu entfernen (versuchen Sie, die Oberfläche so sauber wie möglich zu entfernen, je weniger Reste desto besser).

3) Wenn die Menge der Bakterien vor der Zentrifugalfällung 50 ml beträgt, wird die Folgevorgang durchgeführt, wenn es sich um ein anderes Volumen handelt, wird die Folgevorgang nach proportionaler Umrechnung durchgeführt.

4) Mit 10 ml vorgekühlter, hochwirksamer Gefühlszustand-Vorbereitungslösung A muss die Bakterienabfällung sanft wieder suspendiert werden (um die Wiedersuspension zu erleichtern, kann zunächst eine kleine Menge an Lösung A hinzugefügt werden, dann die restliche Lösung A hinzugefügt werden), wenn die Wiedersuspension sehr sanft geblasen wird, sonst wird die Wirkung beeinflusst werden.

5) 15 Minuten Eisbad.

6) 4 ° C (die Zentrifuge muss vorgekühlt werden) 3000-3500g Zentrifuge 5-7 Minuten, um Bakterien zu sammeln und aufzuwerfen.

7) Zur Herstellung von Lösung B mit 2 ml vorgekühlter, effizienter Gefühlszustand suspendieren Sie die bakterielle Fällung vorsichtig wieder. Wenn Sie wieder aufhängen, müssen Sie sehr sanft sein, sonst beeinträchtigen Sie den Effekt.

8) 15 Minuten Eisbad.

9) Die Aufteilung auf dem Eisbad kann nach Bedarf in 50-200 µl / Röhre angemessen aufgeteilt werden.

10) Lagern Sie sofort unter Verwendung oder mit flüssigem Stickstoff oder Ethanol Trockeneisbad bei -70 ° C.