NLuc Fluorescenase Testkit

NLuc Fluorescenase ist ein gentechnisch modifiziertes kleines molekulares Enzym (19,1 kDa), das ein Bioluminescenz-Bericht-Gen-Protein mit höherer Leistung ist. Es ist etwa 150-mal heller als Leuchtfeuer (Photinus pyralis) oder Marine Renal Fluorescenase und erzeugt ein hochintensives, glänzendes Lichtsignal mit einem neuen Typ von Furimazine. Diese Leuchtreaktion ist nicht von ATP abhängig und erzielt gleichzeitig die höchste Detektionsempfindlichkeit durch die Unterdrückung des Leuchtsignals.
Das NLuc Reporter Gene Assay Kit bietet ein einfaches, einmal hinzugabendes Reagenz mit hoher Empfindlichkeit, das ein starkes Signal in Anwesenheit von NLuc-Fluorenzesen erzeugt.
Produktzusammensetzung:

1. Eigenes Material:
PBS； Mehrfache Waffen; weiße undurchsichtige / schwarze Zellkulturplatte; Chemische Leuchtmittel oder Enzyme-Marker.
2. Vorbereitung vor der Prüfung:
(1) NLuc-Nachweissubstrat (50 x) und NLuc-Nachweissubstratpuffer auf Raumtemperatur vorlegen.
(2) Abhängig von der tatsächlichen Verwendung wird eine angemessene Menge an NLuc-Detektionssubstrikt (50 x) mit NLuc-Detektionssubstriktpuffer im Verhältnis von 1:50 vermischt, um Raumtemperatur zu schützen. Zum Beispiel: Wenn 10 ml Reaktionsflüssigkeit erforderlich sind, müssen 0,2 ml Testsubstrat hinzugefügt werden.
Hinweis: Es wird empfohlen, die übrigen Reaktionsflüssigkeiten mit neuen Substraten nach dem Ende des Experiments nicht zu halten.
3. Betriebsweise:
(1) Entfernen Sie die Zellkulturplatte aus dem Zellkulturbaum und legen Sie sie 5-15 min auf Raumtemperatur zurück.
Hinweis: Verwenden Sie eine weiße undurchsichtige oder schwarze Zellkulturplatte, um Signalstörungen zwischen den Löchern zu reduzieren.
(2) Testlösung hinzufügen
Verwenden Sie mehrere Abwehrpistolen, um die Reaktionsflüssigkeit mit einem auf Raumtemperatur ausgewogenen Substrat in jedes Zellloch hinzuzufügen, das Probenvolumen mit dem gleichen Volumen wie die Zellkulturflüssigkeit zu sammeln und zu mischen. Zum Beispiel werden 96-Loch-Platten in der Regel 80-100 μL Kulturflüssigkeit hinzugefügt und entsprechend 80 μL-100 μL Testlösung hinzugefügt; 384-Loch-Platten werden in der Regel 20-30 μL Kultur und entsprechend 20-30 μL Testlösung hinzugefügt.
(3) Lichtentdeckung
Nach der Mischung wird die genetische Aktivität der NLuc Fluorescenase im Chemikalien- oder Enzymmarker nachgewiesen.
Hinweis: Um ein optimales Testergebnis zu erzielen, müssen Sie den Test innerhalb von 1 Stunde nach der Zugabe des Testreagenziums abschließen.
4. Analyse der Daten:
(1) Experimentale Konstruktion: Abhängig von den verschiedenen experimentellen Zwecken sollten in jeder Kultivplatte Kontrollgruppen, Experimentgruppen und leere Kontrollgruppen eingerichtet werden. Um die Genauigkeit des Experiments zu gewährleisten, sollte theoretisch jede Versuchsgruppe (einschließlich der Kontrollgruppe) den Messwert der Leuchtfeuerfluorense der leeren Kontrollgruppe subtrahieren.
Leere Kontrollgruppe:
Hintergrund F: Nicht transfizierte Zellen + Reaktionsflüssigkeit.
Hinweis: Die leere Kontrollgruppe muss die gleiche Probenmenge wie die Probenmenge enthalten, die gleiche Medium / Serum-Kombination wie die Probe mit dem gleichen Detektionsmittel.
Experimentelle Gruppe: Transfektierte Zellen werden durch eine experimentelle Verbindung behandelt (d. h. Experimentelle Gruppe F).
Kontrollgruppe: Transfektierte Zellen werden nicht behandelt, um die Ergebnisse zu standardisieren (d. h. Kontrollgruppe F).
2) Berechnungsergebnisse:
Versuchsgruppe = Versuchsgruppe F - Hintergrund F.
Kontrollgruppe = Kontrollgruppe F - Hintergrund F.
Expression Multiple = Versuchsgruppe / Kontrollgruppe.

-20 ° C aufbewahren, gültig für ein Jahr. NLuc-Untersuchungssubstrat (50 x) wird empfohlen, die Partition -80 ° C zu speichern.

1, die enzymatische Reaktion ist empfindlich für die Temperatur, müssen alle Reagenzien vor der Probenahme auf Raumtemperatur (20-25 ° C) ausgeglichen werden;
Bei der Prüfung müssen weiße oder schwarze 96-Loch-Platten verwendet werden. Wenn eine gewöhnliche transparente 96-Loch-Platte verwendet wird, entstehen gegenseitige Störungen zwischen benachbarten Löchern;
3. Prüfinstrumente: Chemische Leuchtmittel können alle geeignet sein, aber aufgrund der unterschiedlichen Einstellungen und Empfindlichkeiten der verschiedenen Instrumente werden die gemessenen Lichtsignalwerte auch unterschiedlich sein;
(4) Einrohrfluorescenzmesser-Messung, jede Probe nach der Mischung mit dem Testreagens bis zur Messung der Zeit sollte konsistent bleiben;
Zu Ihrer eigenen Sicherheit sollten Sie vor dem Experiment einen effektiven Schutz leisten.