Molekuläre Wechselwirkungsexperimente: IP/CO-IP-Immunschüttung

1. Technische Einführung

IP (Immunoprecipitation) und Co-IP (Co-Immunoprecipitation) sind Kerntechnologien zur Untersuchung von Proteinfunktionen und Wechselwirkungen, die in den Bereichen Molekularbiologie und Zellbiologie weit verbreitet sind.

II. Technische Grundsätze

IP durch spezifische Antikörper und ZielproteineBinden, Antikörper verwenden, um Zielproteine (d. h. Antigene) zu isolieren, um die Expression eines bestimmten Proteins zu erkennenCO-IP ist auf IP-Basis, um die Wechselwirkungen zwischen den Proteinen zu validieren. Durch die Erfassung eines Proteins (Köderproteins) und die Erkennung des mit ihm gebundenen Wechselwirkungsproteins (Zielproteins),SomitSpezifische Anreicherung des untersuchten ZweckproteinsAnschließend untersuchen wir Proteine im Komplex, die mit bekannten Proteinen interagieren.

III. Anwendungsszenarien

• IP: Anreicherung von Proteinen mit niedriger Fülle zur Massenspektrometrie (IP-MS) zur Überprüfung der Antikörperspezifizität.

• Co-IP: Untersuchung von Transkriptionsfaktorenkomplexen, Kinase-Substrat-Wechselwirkungen und Validierung bekannter Wechselwirkungen oder Entdeckung neuer Wechselwirkungspartner (z. B. Signalwegskomplexe).

4. Technische Vorteile

• IP: Hochspezifisch, abhängig von der spezifischen Bindung von Antikörper-Antigen.

• Flexibilität: Der Träger kann entweder Magnetperlen (einfache Bedienung, Automatisierungskompatibilität) oder Agane (hohe Bindungskapazität) wählen.

• CoIP: In-vivo-Authentizität: Die Untersuchung der Protein-Wechselwirkungen im Körper im natürlichen Zustand kann auf realere Protein-Wechselwirkungen reagieren.

V. Typ der Probe

Frische Zellen (Klebstoffzellen / Suspensionszellen), Gefrierzellen, Gefriergewebe, Lysatproben.

6. Probenbedürfnisse

• Zellproben: ca. 5 x 10 ^ 6 Stück (es können 2 6 cm-Scheiben sein oder in einer Zentrifuge in Form von suspendierten Zellen oder 2 T25-Flaschen gelagert werden);

• Gefriertes Gewebe: ca. 40 mg; Lysatprobe: Proteinkonzentration nicht weniger als 2 mg / mg, Gesamtproteinmenge nicht weniger als 3 mg.

Probenvorbereitung & Transport

• Lebende Zellproben: in der näheren Entfernung können frische Proben zur Verfügung gestellt werden, werden frische Zellproben in Schalen / T25-Flaschen / Zentrifugerrohren kultiviert werden, die mit Express-Temperatur (spätestens am nächsten Tag) transportiert werden, die Stadt kann blinken oder persönlich geliefert werden, die Entfernung kann -80 ° C gefrorene Zelltrockneis transportiert werden;

• Gewebeprobe & Kläckenprobe: -80 ° C Gefriert Trockeneis Transport.

8. Die zur Verfügung gestellten Reagenzien

Detektion von IB-Antikörpern und IP-Antikörpern

9. Versuchszyklus

1-2 Wochen (ohne Massenspektrum)

10. Andere

Western Blot/Proteinspektrometrie