Molekulare Experimente Molekulare Wechselwirkungen: EMSA Gel Migration Blocking Experiment

1. Technische Einführung

EMSA-Technik, Gelmigration oder Elektrophoresis-Migrationsexperiment, zur Untersuchung der Wechselwirkungen von DNA/RNA-bindenden Proteinen und ihren zugehörigen DNA/RNA-bindenden Sequenzen;

II. Technische Grundsätze

Eine reinigte Protein- oder Zellrohnung wird mit einer markierten DNA- oder RNA-Sonde inkubiert und die Migration von DNA-Protein- oder RNA-Proteinkomplexen in einer nicht degenerativen Polyacrylamid-Gelelektrophorese ist langsamer als bei einer nicht gebundenen Sonde, wodurch aktivierte Protein-Transkriptions- oder Regulatoren, die an DNA oder RNA gebunden sind, erkannt werden.

III. Anwendungsszenarien

1. Regulationsforschung der Genexpression: Bestimmung der Bindungsstellen und Bindungseigenschaften der Transkriptionsfaktoren an die DNA und Untersuchung der Regulationsmechanismen der Genexpression.

Krankheitsmechanismusforschung: Analyse der anormalen Regulierung der Expression von krankheitsbezogenen und Erkundung der Entstehungsmechanismen der Krankheit.

3. Arzneimittelzielentdeckung: Screening und Identifizierung von krankheitsbezogenen DNA-bindenden Proteinen, um Ziele für die Forschung und Entwicklung von Arzneimitteln bereitzustellen.

Signalwegsforschung: Untersuchung der aktiven Veränderungen der DNA-Bindungsproteine im Signalweg und ihrer Auswirkungen auf die nachgelagerten Gene.

4. Technische Vorteile

Der experimentelle Betrieb ist relativ einfach und die Anforderungen an die experimentellen Bedingungen sind nicht anspruchsvoll.

Es kann eine Vielzahl von Nukleinsäuremolekulärgrößen und -strukturen sowie einen breiten Proteingrößenbereich erkennen und die Bindung verschiedener Proteine und verschiedener Nukleinsäuremolekule in einem einzigen Reaktionssystem erkennen.

3. Die Biotin-Markierungssonde ist stabil, sicher, genau und hoch affin.

V. Typ der Probe

Frische Zellen (Adhesive Zellen / Suspensionszellen), gefrorene Zellen, gefrorenes Gewebe, Nukleoproteinproben oder gereinigte Transkriptionsfaktoren, einige Experimente können auch rekombinierte Expression von Proteinen verwenden.

6. Probenbedürfnisse

Zellproben: ca. 1 x 10 ^ 7 Stück (kann 1 10cm-Scheibe oder in Form von suspendierten Zellen in einer Zentrifuge oder einer T75-Flasche gelagert werden);

Gefriertes Gewebe: ca. 400 mg;

Pflanzengewebe: ca. 2 g; Zytonuklein, Reinigungstranskriptionsfaktor, rekombinantes Expressionsprotein usw.: liefert mindestens 50 µl pro Membran in einer Konzentration von nicht weniger als 0,5 mg/ml.

Probenvorbereitung & Transport

Lebende Zellproben: die nähere Entfernung kann frische Zellproben in einer Platte / T75-Flasche / Zentrifugerrohr mit regulärer Temperatur Express (spätestens am nächsten Tag) transportiert werden, die Stadt kann blinken oder persönlich geliefert werden, die Entfernung kann -80 ° C gefrorene Zelltrockneis transportiert werden;

Gewebeproben & andere Flüssigkeitsproben: -80 ° C Gefriert Trockeneis Transport.

8. Die zur Verfügung gestellten Reagenzien

Binden Sie proteinspezifische Antikörper über 50 µl, Konzentrationen größer als 0,5 mg/ml.

9. Versuchszyklus

2-3 Wochen

10. Andere

Sondensequenzen Wenn keine Sondensequenzen vorhanden sind, geben Sie Informationen oder Literatur über DNA-Bindungsproteine an.