Humane mononukleäre Leukämie-Zelle THP-1

Humane mononukleäre Leukämie-Zelle THP-1

【THP1; O-THP-1; Tohoku Hospital Pediatrics-1】

l Zellendifizierung

STR-Zertifizierung bestanden

l Zellenquellen

Nationale Ressourcenbank

Zellhintergrund

Es wurde aus dem peripheren Blut eines 1-jährigen Jungen mit einer wiederkehrenden akuten mononukleären Leukämie (AML) im Jahr 1978 etabliert. Die Zelle kann Milchperlen und aktivierte rote Blutkörperchen, ohne Oberflächen und zytoplasmische Immunglobuline verschlingen. Mononukleäre Differenzierung kann mit Fombolol TPA induziert werden.

Hinweis: Die NRAS-Mutation wurde in PubMed = 9379676 fälschlicherweise als p.Gly12Ser angegeben.

l Zelleigenschaften

1) Quelle: Akute mononukleäre Leukämie, mononukleäre Zellen

2) Morphologie: Einkernzellen, suspendiert

3) Inhalt: > 1x106 Zellzahl

4) Spezifikationen: T25 Flasche oder 1ml Gefrierrohrverpackung

5) Verwendungszweck: ausschließlich für wissenschaftliche Zwecke

l Erziehungsbedingungen

1) RPMI-1640 (awcell-0002 empfohlen) Medium vorbereiten; Hochwertiges Rinderserum, 10%; 0,05 mM β-qiu-Ethanol (Zellkultur empfohlen: awcell-8211); Doppel, 1 Prozent.

2) Referenz-Übertragungsverhältnis: Kontrollieren Sie die Zelldichte bei 2-4 × 105 Zellen / ml bei der Übertragung und übertragen, wenn die Zellen auf 8-10 × 105 Zellen / ml wachsen.

3) Referenzflüssigkeitsaustauschfrequenz: Flüssigkeitsaustausch bei der Übertragung.

4) Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 Prozent. Temperatur: 37 Grad Celsius, die Feuchtigkeit im Ausbauraum beträgt 70% -80%.

5) Gefrierflüssigkeit: * Kulturflüssigkeit 95%, DMSO 5% (nach der Verwendung dieser Gefrierflüssigkeit, nach meiner Bibliothek Erfahrung Erholung Überlebensrate von ungefähr 50%, nach Erholung benötigt zusätzliche Kultur 7-10 Tage, um das Wachstum wiederherzustellen)

l Achtung

[Hinweis]:

Diese Zelle ist eine suspendierte Zelle, basierend auf der Kulturerfahrung und dem Feedback des Kunden ist die Verwendung der Halbtransmutationsmethode für den Zustand der Zelle günstig, daher empfiehlt unsere Bibliothek Ihnen die Halbtransmutationsmethode zur Übertragung zu verwenden.

1. Nachdem Sie die von uns gelieferten Zellen in einem 15ml-Zentrifugerrohr erhalten haben, sammeln Sie die Zellen nicht mittels Zentrifuge, Sie können zuerst zwei neue T25-Flaschen vorbereiten und die Zellen gleichmäßig in zwei neue T25-Flaschen mischen und das Medium auf 10ml hinzufügen. In eine 37 ° C-Kultivbox legen.

2. Wenn Sie die Zellen erhalten haben, die in einer T25-Kulturflasche geliefert werden, sammeln Sie die Zellen zuerst mittels Zentrifuge und fügen Sie die Zellen dann wieder in 12 ml des Mediums hinzu, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist * und blühen Sie gleichmäßig in zwei neue T25-Kulturflaschen.

Thp-1 suspendierte Zellen. Die Zelle bevorzugt eine milde Behandlung bei der Kultivierung, wobei die Zelle so wenig wie möglich zentrifugiert wird, um die Zelle zu schädigen. Wechseln Sie nicht das gesamte Medium beim Wechsel. Es wird empfohlen, dass Sie die Halbkulturmethode verwenden, um die Zellkultur hinzuzufügen, um die Zellen auf eine aufrechterhaltende Dichte zu verdünnen.

4. Die Zellen sind empfindlich für die Serumqualität, unsere Bibliothek empfiehlt Ihnen, importierte Marken von hochwertigem Serum zu kultivieren. FBS nicht deaktivieren, wenn die Zellen langsam wachsen, versuchen Sie eine andere FBS oder erhöhen Sie die FBS-Konzentration vorübergehend auf 20%

Die Zellkulturflüssigkeit muss Beta-Qiu-Ethanol (Zellkulturstufe) hinzugefügt werden, was, wenn nicht hinzugefügt, den Zellstand beeinflussen kann.

Beta-Qiu-Ethanol hat eine begrenzte Stabilität und kann nicht zur Langzeitlagerung im * Medium hinzugefügt werden, wobei bei jeder Übertragung oder Flüssigkeitszufuhr Beta-Mercatol hinzugefügt wird.

Beta-Qiu-Ethanol (2-Qiu-Ethanol) wird zu Lymphozyten oder anderen Zellkulturen hinzugefügt, da die Aminosäure Cystein in FBS, die im Kulturmedium verwendet werden, nicht nachgefragt ist, während Cystein viel ist. Einige Zellen (z. B. T-Zellen) können Cystein nicht in das Zytoplasma transportieren und müssen es in Cystein umwandeln. Beta-Qiu-Ethanol reduziert Cystein in eine Form, die von Zellen transportiert werden kann, und verwandelt es dann in Cystein, das für das Zellwachstum erforderlich ist. Beta-Qiu-Ethanol ist auch ein Reduktionsmittel, das viele giftige Stoffwechselprodukte abbaut, die von Zellen in einer Kultur produziert werden, um die Umgebung um die Zelle zu verbessern.

6. Die Zelle ist empfindlich für die Zelldichte, bei der Kultivierung und Übertragung achten Sie darauf, die Zelldichte in einem geeigneten Bereich zu halten (spezifisch siehe die Zellanleitung).

7. Die Erholungsrate der Zelle nach dem Einfrieren ist niedriger, bei der Einfrierung erhöhen Sie die Zellzahl nach Bedarf

8. In der Regel kann das Zellwachstum aufrechterhalten werden, indem ein * Medium zu den wachsenden Zellen hinzugefügt wird, die Zellen können alle sieben Tage zentrifugiert und in einem neu zugeordneten Medium wieder suspendiert werden, um den vollständigen Austausch der Zellen abzuschließen.

ATCC-Anweisungen zur Aufrechterhaltung der zellulären Vitalität durch Thp-1-Zellen

Gerät=modal

(Eine häufige Zellzahl ist die beste Methode, um Thp-1 zu überwachen.) Diese Zellen sollten alle 2 bis 3 Tage kultiviert werden, indem eine kleine Menge frisches Medium einfach in die Flasche hinzugefügt wird (so dass sie ein bedingtes Medium haben). Sie müssen die Zellen nicht jedes Mal zentrifizieren und neu generieren. Wenn sie in unserem Labor kultiviert werden, können die Zellen am zweiten Tag in der Regel in größere Flaschen mit mehr Medien vergrößert werden. Wenn die Zelldichte 8 x 10 von 5 lebenden Zellen / ml erreicht wird, ist eine Vermehrung erforderlich. Eine Zelldichte von mehr als 1 x 10 (6) lebenden Zellen / ml ist nicht zulässig.)

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. 0,25% (w / v) Panprotease-0,53 mM EDTA in der Flasche (T25 Flasche 1-2 mL, T75 Flasche 2-3 mL) hinzufügen, in einem 37 ° C-Schacht für 1-2 Minuten verdauen (schwer verdaubare Zellen können die Verdauungszeit angemessen verlängern), dann beobachten Sie unter dem Mikroskop die Verdauung der Zellen, wenn die meisten der Zellen sich runden und fallen, schnell wieder auf dem Arbeitstisch, ein paar leichte Klopfe auf die Flasche, um 3-4 ml des Mediums mit 10 S hinzuzufügen, um die Verdauung zu beenden.

3. nach sanftem Schlagen aussaugen, 3-5 min unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 ml Kulturflüssigkeit hinzufügen. Verteilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in eine neue T25-Flasche, fügen Sie 6-8 ml eines neuen * Mediums hinzu, das gemäß den Anforderungen der Anleitung konfiguriert ist, um das Wachstum der Zellen zu erhalten, und die nachfolgende Übertragung erfolgt im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 je nach den tatsächlichen Umständen.

3) Zellfrieren: Nach Erhalt der Zellen wird empfohlen, eine Reihe von Zellsamen für die nachfolgenden Experimente bei der Kultivierung der ersten 3 Generationen einzufrieren.

4) das Transportmedium (Irrigationsmedium) kann nicht mehr verwendet werden, um Zellen zu kultivieren, bitte ersetzen Sie es durch ein neu formuliertes * Medium nach den Bedingungen der Anleitung für die Zellkultur. Die erste Übertragung nach Empfang der Zellen empfiehlt eine T25-Kultivflasche 1: 2-Übertragung.

l Transportform

Tieftemperatur: (1) 1ml Gefrierrohr Verpackung Trockeneis Transport, nach Erhalt von -80 Grad im Kühlschrank aufbewahren über Nacht in flüssigen Stickstoff oder direkt Erholung, wenn Trockeneis gefunden wurde, flüchtig und sauber, Gefrierrohr Flaschendeckel abgefallen, gebrochen und Zellen verschmutzt, bitte kontaktieren Sie uns sofort.

Normale Temperatur: (2) T25-Flasche Erholung von überlebenden Zellen bei normaler Temperatur geliefert und nach Empfang nach der Behandlung der Zellen nach Empfang.

l Biologische Sicherheit

1. Alle Tierzellen werden als potenziell biologisch gefährlich angesehen und müssen in einem Biosicherheitsstand der zweiten Stufe betrieben werden, und bitte achten Sie darauf, dass alle Abfälle und Gefäße, die mit dieser Zelle in Berührung kommen, sterilisiert werden müssen, bevor sie entsorgt werden können.

Es wird empfohlen, immer Schutzhandschuhe, Kleidung und eine Schutzmaske zu tragen, wenn Sie gefrorene Zellen wiederherstellen. Hinweis: Ein Gefrierrohr, das in flüssigen Stickstoff eingetaucht ist, leckt und wird langsam mit flüssigem Stickstoff gefüllt. Wenn flüssiger Stickstoff in eine Gasphase umgewandelt wird, kann der Behälter explodieren oder seinen Deckel mit gefährlicher Kraft abblasen, wodurch fliegendes Schutt verursacht wird, das Menschen verletzt.