Fluo-8 AM Waschfreies Zellkalciumflusstestekit

Fluo-8 AM Waschfreies ZellkalciumflusstestekitKomponenten und Spezifikationen sind wie folgt. Es wird empfohlen, Fluo-8 Zellen laden Reagenzien mit 96-Loch-Platte pro Loch 100 μL und 384-Loch-Platte pro Loch 25 μL. Die 96T, 960T und 9600T können Experimente mit 1, 10 und 100 96-Loch- oder 384-Loch-Platten durchführen.

1, entsprechend der experimentellen Notwendigkeit, Zellen in 96-Loch oder 384-Loch Boden transparente schwarze Zellkulturplatte zu impfen, Zellkulturmedium Serumkonzentration nicht mehr als 10%. Nach experimenteller Notwendigkeit 37 ° C 5% CO2Inkubation für eine gewisse Zeit.
Entfernen Sie den Fluo-8-Ladepuffer und das QF-Reagenz (10x), balancieren Sie es auf Raumtemperatur und mischen Sie es vollständig aus.
Entfernen Sie Fluo-8 AM, lösen Sie sich bei Raumtemperatur auf, sammeln Sie den Inhalt auf dem Grund des Rohres und legen Sie ihn auf Eis. Wenn Fluo-8 AM nicht einmal aufgebraucht wird, sollte es aufgeteilt werden und bei -20 ° C vor Licht gehalten werden, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.
4. Berechnen Sie die erforderliche Menge an Fluo-8-Zellalladungsreagens nach dem Volumen des jeweiligen Zusatzes und des in-poren-Mediums
Zubereitung von Fluo-8-Zell-Ladereagenzien: 10x QF-Reagentium durch 10x-Verdünnung in Fluo-8-Ladepuffer hinzufügen, zum Beispiel 1ml 10x QF-Reagentium in 9ml Fluo-8-Ladepuffer hinzufügen und vollständig vermischen. Fluo-8 AM ist 400X, 1X mit der oben aufgeführten Zubereitung von Fluo-8-Ladepuffer (mit 1x QF), das Fluo-8-Zellen-Ladereagens.
Bestimmte Zellen, wie CHO-Zellen, müssen Propanolshu (Probenecid, CAS: 57-66-9) in das Fluo-8-Zellladerragens hinzugefügt werden, um den Transport von Fluo-8 in die Zelle zu hemmen. Propanolshu wird von den Kunden selbst geliefert und die empfohlene Endkonzentration von Propanolshu für die Hinzufügung von Fluo-8-Zellladern beträgt 2,5 mm. Für verschiedene Zellen kann die optimale Konzentration optimiert werden müssen.
Propylene shu Herstellung:Zu einer 500 mM Rohflüssigkeit mit 1N NaOH zugesetzt mit Fluo-8-Zellladerragens, das zuvor mit 1X HBSS-Puffer auf 250 mM verdünnt wurde, mit einer Endkonzentration von 2,5 M. (HBSS-Puffer wird vom Kunden selbst zur Verfügung gestellt, als 20 mM HEPES-Puffer pH 7,4 + 1X Hank's Balanced Salt Solution, pH 7,4).
7, Standard-Methode-Erkennung: Zugabe und das Volumen des Fluo-8-Zell-Ladungs-Reagents in Zellkulturplatten-Löcher, wie z. B. 96-Löcher-Platten mit 100 μL Medium pro Löcher mit 100 μL Fluo-8-Zell-Ladungs-Reagents.
（Optionale Prüfmethoden:Ein Medium, das 10% FBS enthält, kann den Lesewert verringern und den Hintergrund erhöhen, kann das intraporische Medium entfernen, das Fluo-8-Zell-Ladereagens (Schritte 5 und 6 Zubereitung) und HBSS-Puffer in 1: 1 zu mischen und dieses Gemisch mit dem Äquivalent des 2-fachen Volumens des Primärmediums hinzufügen. Oder Zellkultur mit einem Medium mit niedriger Konzentration von FBS, die nach Schritt 7 Standard-Methode untersucht wird.)
1 Stunde bei 37°C inkubieren. Die spezifische Inkubationstemperatur (z. B. Raumtemperatur oder 37 ° C) und die Zeit (0,5 h-2 h oder länger) müssen entsprechend dem spezifischen Experiment optimiert werden.
9. Durchführung der intrazellulären Kalziumstromprüfung: entsprechend den experimentellen Bedürfnissen und der Prüfausrüstung, um die Prüfparameter einzustellen, fügen Sie die Testverbindung hinzu und prüfen Sie die Fluoreszenzintensität durch die unteren Lesungen. Zu den geeigneten Prüfgeräten gehören FlexStation, FLIPR (Molecular Devices) usw. FlexStation 3 liest die Fluoreszenz mit Ex/Em = 485/525 nm.

1. Verschiedene Partien werden nicht empfohlen zu mischen.
Nicht verifiziert, wird keine Änderung der Dosis des Testreagenziums empfohlen.