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Produktkategorien
Peking Lambolde Handel Co., Ltd.
Trizol Pal Nukleinsäureextraktor
VerhandlungsfähigAktualisieren am05/06
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Übersicht
Trizol Pal Nukleinsäureextraktor Chlorimittel zur RNA-Extraktion. Trizol pal kann in Kombination mit Trizol Reagent (Artikelnummer: R1000) verwendet werden und kann als Ersatz für Chlorform verwendet werden, um wiederholte Extraktionen aus dem Lysationssystem zur Entfernung von Proteinen durchzuführen, die weit verbreitet sind, um die GesamtRNA aus Proben wie tierischem Gewebe, pflanzlichem Material, verschiedenen Mikroben und Kulturzellen zu extrahieren. Die Probe wird in Trizol vollständig geklatzt, um gleichzeitig die RNA-Integrität zu maximieren.
Produktdetails
Trizol pal Chlorogene zur RNA-ExtraktionArtikelnummer: R1200
Lagerbedingungen: 0-30 ° C Lichtschutz
Trizol pal Chlorogene zur RNA-ExtraktionProduktbeschreibung:
Trizol PAL kann in Kombination mit Trizol Reagent (Artikelnummer R1000) als Ersatz für Chloroform verwendet werden, um wiederholte Extraktionen aus dem Lysator zur Entfernung von Proteinen durchzuführen, die weit verbreitet sind, um GesamtRNA aus Proben wie tierischem Gewebe, pflanzlichem Material, verschiedenen Mikroben und Kulturzellen zu extrahieren. Die Probe wird in Trizol vollständig geklatzt, um gleichzeitig die RNA-Integrität zu maximieren. Nach Zugabe der Trizol PAL-Zentrifuge wird die Lösung in drei Schichten aufgeteilt: die obere farblose Wasserphase, die mittlere Schicht und die untere rote organische Phase, wobei sich die RNA in der oberen Clear-Schicht verteilt. Nach der Sammlung der Oberschicht kann die gesamte RNA durch Isopropanolabsetzung zurückgewonnen werden. Die gesamte RNA-Integrität der Extraktion ist gut, frei von Protein- und DNA-Kontamination und kann für konventionelle Experimente in einer Vielzahl von Molekularbiologie wie RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、 Übersetzung usw.
Eigenes Reagenz
Trizol Reagent (Artikelnummer R1000), Isopropanol, 75% Ethanol, RNase-freies Wasser (für neu geöffnete oder extrahierte RNA)
NukleinsäureextraktorHinweis:
Um eine RNase-Kontamination zu verhindern, sollten folgende Aspekte beachtet werden:
Verwenden Sie RNase-freie Kunststoffe und Pistolenkopfe, um Kreuzkontamination zu vermeiden.
2) Glasgeräte sollten 4 h vor der Verwendung bei 180 ° C trocknen, und Kunststoffgeräte können 10 Minuten in 0,5 M NaOH eingeweicht werden und nach dem Spülen mit Wasser Chedi unter hohem Druck sterilisiert werden.
3) Die Lösung sollte RNase-freies Wasser verwenden.
4) Der Bediener trägt eine Einweg-Maske und Handschuhe und muss während des Experiments die Handschuhe auswechseln.
Die extrahierten Proben vermeiden wiederholtes Gefrierschmelzen, sonst beeinflussen die RNA-Extraktionsrate und -Qualität.
3. Bei der Verwendung dieses Produkts sollten Schutzgegenstände wie Handschuhe, Augenbekleidungen, Masken usw. getragen werden. Wenn Sie versehentlich die Augen berühren, sollten Sie sie sofort mit viel Wasser spülen und ins Krankenhaus behandeln. Bei der Verwendung fern von Feuer und Wärmequellen.
3, die RNA-Fällung in 75% Ethanol aufbewahrt wird, kann eine Woche bei 2-8 ° C und ein Jahr unter -20 ° C aufbewahrt werden.
Die Halbwertszeit der RNA ist relativ kurz und leicht abbaubar, es wird empfohlen, nachfolgende Experimente so schnell wie möglich nach der Extraktion durchzuführen, wie Reverse-Transkription in cDNA, Northern Blot usw.
Wenn nachgelagerte Experimente sehr empfindlich für DNA sind, wird empfohlen, die RNA mit DNase I zu verarbeiten, die keine RNase enthält.
Betriebsschritte:
1. Behandlung verschiedener Materialien.
1.1 Pflanzengewebe: Nehmen Sie frisches Pflanzengewebe vollständig in flüssigem Stickstoff oder schneiden Sie die Pflanzengruppe zhi schnell direkt in Trizol, fügen Sie 1 ml Trizol pro 30-50 mg Gewebe hinzu und mischen.
Hinweis: Das Probenvolumen sollte in der Regel nicht mehr als 10% des Trizol-Volumens betragen.
1.2 Tiergewebe: Nehmen Sie frisches oder gefrorenes Tiergewebe bei -70 ° C und schneiden Sie es so gut wie möglich, fügen Sie 1 ml Trizol pro 30-50 mg Gewebe hinzu, um es mit einem Homogenometer zu homogenisieren. Oder Trizol 1 ml nach dem Mahlen in flüssigem Stickstoff zu mischen.
Hinweis: Das Probenvolumen sollte in der Regel nicht mehr als 10% des Trizol-Volumens betragen.
1.3 Einschichtige Kulturzellen: Absorbieren Sie die Kulturflüssigkeit, fügen Sie eine angemessene Menge Trizol direkt in die Platte hinzu (1 ml Trizol pro 10 cm2 Fläche erforderlich) und blasen Sie wiederholt mit dem Probenahmer, um die Zelle zu spalten. Auch nach der Behandlung mit Pancreatic Baiase, die Zelllösung in eine RNase-freie Zentrifuge zu übertragen, 300 x g 5 min zu zentrifugieren, sammeln Sie die Zell-Fällung, sorgfältig alle Oberwasser zu absorbieren und Trizol 1 ml zu mischen.
Hinweis: 1) Die Anzahl der gesammelten Zellen sollte nicht mehr als 1 x 10 7.
2) Die TRNzol-Zunahme ist abhängig von der Plattenfläche bestimmt und nicht von der Zellzahl. Wenn Trizol nicht ausreichend zugegeben wird, kann es zu einer DNA-Kontamination in der extrahierten RNA führen.
3) Wenn Sie Zellen sammeln, müssen Sie die Zellkultur sauber entfernen, sonst wird es zu einer unvollständigen Spaltung führen, was zu einer verringerten RNA-Ausbeute führt.
1.4 Zellsuspension: Zentrifugal sammeln Zellen. 1 ml Trizol pro 5 x 10 6-1 x 10 7 Tier-, Pflanzen- und Hefe-Zellen oder pro 10 7 Bakterienzellen hinzugefügt.
Hinweis: 1) Wäschen Sie die Zellen nicht vor der Zugabe von Trizol, um den Abbau der RNA zu vermeiden.
2) Einige Hefe- und Bakterienzellen können eine Homogenometer- oder flüssigen Stickstoff-Schleifbehandlung erfordern.
1.5 Blutbehandlung: Nehmen Sie frisches Blut direkt, fügen Sie das 3-fache Volumen Trizol hinzu (empfohlen 0,25 ml Vollblut mit 0,75 ml Trizol) und mischen Sie vollständig.
1.6 Optionale Schritte: Proben mit hohem Gehalt an Protein, Fett, Polysaccharide oder extrazellulärer Substanz, wie Muskelgewebe, Fettgewebe oder Knollen von Pflanzen, können nach Homogenisierung bei 4 ° C bei 12.000 U/min (~ 13.400 x g) für 10 Minuten zentrifugiert werden, um die unlöslichen Substanzen zu entfernen, während die extrazelluläre Substanz, Polysaccharide und hohes Molekulargewicht an DNA gefällt werden, während die RNA im Oberserum vorhanden ist.
2, Trizol in die Probe hinzugefügt, um die Probe vollständig zerrissen zu lassen. Platzieren Sie bei Raumtemperatur für 5 Minuten, so dass der Nukleinsäurekomplex vollständig isoliert wird.
3, Trizol Pal in die oben genannte Lösung hinzufügen, 0,2 ml Trizol Pal pro 1 ml Trizol hinzufügen, den Schlauch abdecken, 15 Sekunden stark schwingen und 2-3 Minuten bei Raumtemperatur lassen.
4, 4 ° C 12.000 rpm Zentrifugieren für 15 Minuten, während die Probe in drei Schichten unterteilt ist: rote organische Phase, mittlere und obere farblose Wasserphase, wobei die RNA hauptsächlich in der Wasserphase ist, die Wasserphase (ca. 600 μL) in eine neue RNase-freie Zentrifugeröhre (eigene Vorbereitung) übertragen wird.
5. In die erhaltene Wasserphase-Lösung ein gleiches Volumen Isopropanol hinzufügen, umgekehrt vermischen und 10 Minuten bei Raumtemperatur platzieren.
6, 4 ℃ 12.000 rpm Zentrifugieren für 10 Minuten und auflegen.
7, 75% Ethanol (mit Wasser ohne RNase) hinzufügen, um die Niederlage zu waschen. Jede 1 ml Trizol wird mit 1 ml 75% Ethanol gewaschen.
8, 4 ° C 12.000 rpm Zentrifugieren für 3 Minuten, vorsichtig aufsaugen Sie das Oberwasser, achten Sie darauf, nicht aufsaugen Sie die RNA-Fällung.
Hinweis: Die verbleibende kleine Flüssigkeit kann kurzzeitig zentrifugiert werden und dann mit dem Pistolenkopf abgesaugt werden, achten Sie darauf, dass die Niederlage nicht abgesaugt wird.
2-3 Minuten bei Raumtemperatur lassen und trocknen. Fügen Sie 30-100 μL RNase-freies Wasser hinzu, lösen Sie die RNA vollständig auf und bewahren Sie die erhaltene RNA bei -70 ° C, um den Abbau zu verhindern.
Hinweis: Die Niederlage sollte nicht zu trocken sein, damit sie nicht schwer auflösbar ist.
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