TRzol (Total RNA Extraktionsreagens) (rot)

Die Produkte des Unternehmens sind ausschließlich zur Forschung bestimmt und dürfen nicht zur klinischen Diagnose verwendet werden!

TRzol-Reagenzien sind Reagenzien, die die gesamte RNA direkt aus Zellen oder Geweben extrahieren. Es behält die Integrität der RNA beim Zerbrechen und Auflösen von Zellen. Nach Zugabe von Chlorform wird die Probe in eine Wasserschicht und eine organische Schicht aufgeteilt. RNA befindet sich im Wasser. Nach der Sammlung der oben genannten Wasserprobenschicht kann die RNA durch Isopropanolabsetzung wiedergewonnen werden.

Ob menschliches, tierisches, pflanzliches oder bakterielles Gewebe, diese Methode hat eine bessere Isolierungswirkung für kleine und große Mengen an Gewebe und Zellen. Die einfache Bedienung des TRzol-Reagents ermöglicht die gleichzeitige Bearbeitung mehrerer Proben. Alle Operationen können innerhalb einer Stunde durchgeführt werden. Die von TRzol extrahierte GesamtRNA verhindert die Kontamination von DNA und Proteinen. Daher ist es möglich, RNA-Abdruckanalyse, Spot-Hybridisierung, Poly(A)+ Selektion, in vitro Transkription, RNA-Enzym-Schutzanalyse und molekulare Klonierung durchzuführen.

TRzol-Reagentien fördern die Abspaltung verschiedener RNA mit unterschiedlichen Molekulargewichten. Beispielsweise wurde RNA aus der Leber von Ratten extrahiert, die durch Ionasegel-Elektrophoresis und mit B-Bromid-Ingots gefärbt wurde, und viele nicht kontinuierliche Streifen mit hohem Molekulargewicht zwischen 7 kb und 15 kb (mRNA und hnRNA-Komponenten), zwei vorteilhafte Ribososomen von ~ 5 kb (28S) und ~ 2 kb (18S) und niedrige Molekulargewicht-RNA zwischen 0,1 und 0,3 kb (tRNA, 5S) zu erkennen. Wenn die extrahierte RNA mit TE verdünnt wurde, war ihr A 260 / A 280-Verhältnis ≥ 1,8.

Lagerung: TRzol kann 12 Monate lang bei Raumtemperatur stabil gelagert werden. Für optimale Ergebnisse empfehlen wir jedoch, sie bei 2-8 ° C zu bewahren.

Welche Reagenzien und Geräte sind für die PCR-Reaktion erforderlich?

Reagenzien:
Vorlage-DNA: Die PCR-Reaktion erfordert Vorlage-DNA, wie die Extraktion von DNA aus Zellen, Gewebe, Blut usw. Protor: Zwei Protore der PCR-Reaktion, die jeweils mit den beiden Enden der Vorlage-DNA gepaart werden, um die spezifischen Bereiche zu vergrößern, die erforderlich sind, können auch zu Protoren synthetisiert werden, die bei Prozessen wie dem TA-Klonen verwendet werden; dNTPs: In der PCR-Reaktion werden vier Arten von dNTPs benötigt, darunter Deoxyadenotid (dATP), Deoxythymotid (dCTP), Deoxybirdotid (dGTP) und Deoxycytosinsäure (dTTP), für biologische Prozesse wie Zellteilung, DNA-Synthese und die Verlängerung und Amplifikation der PCR-amplifizierten DNA-Ketten; Taq-DNA-Polymerase: Polymerase, die für die PCR-Reaktion erforderlich ist, wird in der Regel Taq-Polymerase verwendet, und es gibt einige andere Arten von Polymerasen wie PFU, Phusion usw., um die DNA-Kette zu vergrößern; PCR-Pufferlösung: Pufferwirkung auf die PCR-Reaktion, Regulierung des Reaktions-pH-Werts, SDS, kleine molekulare organische Verbindungen wie Formaldehyd, können die PCR-Reaktionsspezifizität verbessern und somit die Reaktionseffizienz verbessern; Enzymschnitt: PCR-Amplifikation beinhaltet häufig experimentelle Schritte wie Rekombination, Konstruktion und Sequenzierung, die häufig eine Enzymschnitt erfordern. MARK: Ein Molekulargewichtsstandard, das verwendet wird, um die Größe von DNA-Fragmenten zu bestimmen. DNA-Reinigungskit: zur Reinigung von PCR-Reaktionsprodukten;
Ausrüstung:
PCR-Gerät: zur Kontrolle der Reaktionstemperatur, um die strenge Kontrolle der verschiedenen Temperaturverbindungen bei der PCR-Reaktion zu gewährleisten; Elektrophorese: zur Isolierung von PCR-Amplifikationsprodukten; Nukleinsäureextraktor: Nukleinsäure wird vollständig automatisch aus Gewebeproben extrahiert. Diese Reagenzien und Geräte sind in der PCR-Molekularbiologietechnologie und können nur auf einer vollständig geordneten Basis PCR-Reaktionen durchführen und genaue Ergebnisse erzielen.

Grundlegende PCR-Experimente:

Eine Polymerase-Kettenreaktion besteht in der Regel aus 20 bis 35 Zyklen, die jeweils die folgenden drei Schritte umfassen:

Einer,Veränderung:

Mit einer hohen Temperatur (93-98 °C) wird die doppelkettige DNA isoliert. Eine hohe Temperatur unterbricht die Wasserstoffbindung, die die beiden DNA-Ketten verbindet. Vor dem ersten Zyklus wird in der Regel länger erhitzt, um sicherzustellen, dass die Schablone und das Vorbild getrennt sind und nur in Einzelkettenform vorhanden sind. Der Schritt dauert 1-2 Minuten und das PCR-Gerät führt die Temperatur in die Zyklusphase ein.

2. Brühen oder Verbinden, Multiplikation:

Nach der doppelkettigen Isolation der DNA ermöglicht die Senkung der Temperatur die Bindung des Primärs an die einkettige DNA. Die Temperatur in dieser Phase liegt in der Regel unter dem Primärschmelzpunkt von 5 ° C. Eine falsche Ausbrenntemperatur kann dazu führen, dass die Vorlage nicht oder falsch mit der Vorlage verbunden ist. Der Schritt dauert 1-2 Minuten.

3. Erweiterung:

Die DNA-Polymerase fängt an, komplementäre Ketten entlang der DNA-Kette durch die beim Abkühlen gebundenen Vorläufer zu synthetisieren. Die Temperatur in dieser Phase hängt von der DNA-Polymerase ab. Die Schrittzeit hängt von der Polymerase und der Länge der DNA-Fragmente ab, die synthetisiert werden müssen. Die herkömmliche Taq schätzt, dass die Synthese 1.000 bp/min dauert, die neuere Tbr (aus dem Thermophilen Thermus brockianus) etwa 40 Sekunden und die Fusionspolymerase, die von kommerziellen Unternehmen produziert wird, nur etwa 10-15 Sekunden dauert.

Optimierung der PCR-Reaktionsbedingungen:

Temperatur und Zeit der Veränderung:

Sicherstellung der DNA-Entkettung der Schablone ist der Schlüssel zum Erfolg der gesamten PCR-Amplifikation. Erwärmen Sie 90 ~ 95 ° C, 30 ~ 60s, dann komplexe DNA-Moleküle sind auch einkettig veränderbar. Eine zu hohe Temperatur oder eine zu lange Dauer kann die Aktivität des Taq-Enzyms und das dNTP-Molekül beeinträchtigen.

Temperatur und Zeit:

Die Spezifizität der PCR-Amplifikation hängt von der Bindung von Primären und Schablonen während des Reproduktionsprozesses ab. Je höher die Temperatur ist, desto spezifischer ist das Produkt. Je niedriger die Temperatur ist, desto weniger ist die Produktspezifizität. Es muss entsprechend dem Tm-Wert der Vorlage festgelegt werden.

Temperatur und Zeit verlängern:

In der Regel liegt Taq-Enzym bei einer optimalen Wirkungstemperatur zwischen 70 und 75 ° C. Wenn der Prototyp kleiner als 16 Nukleotide ist, ist eine zu hohe Verlängerungstemperatur ungünstig für die Bindung des Prototype mit der Schablone und kann langsam auf 70 ~ 75 ° C erwärmt werden. Die Verlängerungsreaktionszeit kann je nach der Länge des zu vergrößernden Fragments kleiner als 1 kb, 1 min ausreichen; Größer als 1 KB erfordert eine verlängerte Verlängerungszeit. Taq-Enzym kann die Zeit auf Basis von 1 kb / min erhöhen. Es ist hier zu beachten, dass eine zu lange Verlängerung eine nicht spezifische Verstärkung auftreten kann. Daher muss die richtige Verlängerungszeit festgelegt werden.

4. Anzahl der Zyklen:

Nachdem andere Parameter ausgewählt wurden, hängt die Anzahl der PCR-Zyklen hauptsächlich von der Konzentration der Vorlage-DNA ab. Theoretisch nach 20 bis 25 Zyklen kann die Akkumulation von PCR-Produkten den maximalen Wert erreichen, in der Praxis, da die Ausbeute der Reaktion pro Schritt nicht 100% erreichen kann, so dass unabhängig von der Schablonenkonzentration 20 bis 30 Zyklen eine vernünftige Anzahl von Zyklen sind. Je mehr Zyklen, desto mehr nicht-spezifische Verstärkung.

Produkte, die das Unternehmen verkauft:

TRzol(insgesamt die RNA Extraktionsmittel)( rot )	Pandemic2009H1N1 Grippevirus HA Gen Nukleinsäure Testkit	Coenzym I NAD(H) Gehalt Testbox (Farbvergleich)
TRzol(insgesamt die RNA Extraktionsmittel)( Farblos )	Saisonale Grippe-Virus H3N2 Subtyp HA Gen Nukleinsäure Testkit	NADKinase (NADKTestbox (Farbvergleich)
TRzol LS(Flüssigkeitsproben) die RNA Extraktionsmittel)	H7N9-Subtyp-Virus HA-Gen-Nukleinsäure-Testkit	Lactsäuredehydrogenase (LDH) Testbox (Farbvergleich)
RNArein Superrein insgesamt die RNA Schnelle Extraktion Kit (DNase I)	H7N9-Subtyp-Virus NA-Gen Nukleinsäure-Testkit	NAD-Apfelsat-Dehydrogenase (NADMDH) Testbox (Farbmodell)
EASYspin Vollblut die RNA Schnelle Extraktion Kit (DNase I)	Nukleensäure-Testkit für Grippeviren Typ B	NADP-Apfelsat-Dehydrogenase (NADPMDH) Testkasten (Farbvergleich)
EASYspin Organisation / Zellen die RNA Schnelle Extraktion Kit (DNase I)	Yamagata Nukleinsäure-Test-Kit für Influenza-Virus Typ B	Mitochondrialer Atemkettenkomplex I/NADH Coenzym Q-Reduktase-Testkasten (Farbvergleich)
EASYspin Pflanze die RNA Schnelle Extraktion Kit (DNase I)	Victoria Nukleinsäure-Test-Kit für Grippe-Virus B	NADH Oxidase (NOX) Testbox (Farbvergleich)
PLANTaid Pflanze die RNA Hilfsmittel	Nukleinsäure-Testkit für den Virusvariantstamm H7N9 (HPAI-H7)	Testbox für Citronsäuresynthase (CS) (Farbvergleich)
Virusgenome DNA und RNA Schnelle Extraktion Kit	Saisonale Grippe-Virus H1N1 Subtyp HA Gen Nukleinsäure Testkit	Ethanolgehaltsprüfbox (Farbvergleich)
RNAreine RNA Reiniger Reinigungskit	C-Grippe-Virus Nukleinsäure-Testkit	Ethanoldehydrogenase (ADHTestbox (Farbvergleich)
RNA Fixer Ohne flüssigen Stickstoff die RNA Probenlagerflüssigkeit	Eurasisches Vogelschweinegrippevirus (EA-H1N1)	Formaldehyderase (FDH) Testbox (Farbvergleich)
Das ist sicher. Effizient RNase Aktivierungsmittel	Influenza-Virus A / Influenza-Virus B Nukleensäure-Testkit	Testbox für Acetaldehydrogenase (ALDH)
RNAlange RNA Langzeitaufbewahrungsflüssigkeit	H7N9 Nukleinsäure-Testkits für den Subtyp Virus	Coenzym IINADP(H)Inhaltsprüfbox (Farbvergleich)
RNase weg Leistungsfähigkeit RNase Aktivierungsmittel	Saisonale Grippe-Virus H3N2 Nukleinsäure-Testkit	NADPase-Testkasten (Farbmodellierung)