RNAfixer flüssiger Stickstoff RNA-Probenspeicher

Eigenschaften:

Aufbewahrungsbedingungen:

Bei Raumtemperatur (18-25 ° C) für mehr als 1 Jahr aufbewahren, wenn bei der Verwendung Fällungen oder Ausfälle gefunden werden, können 37 ° C Wasserbad hinzugefügt werdenNach thermischer Wiederlösung wird die Produktqualität nach der Wiederlösung nicht beeinflusst.
Produktbeschreibung:
RNAfixer ist eine flüssige, ungiftige Gewebespeicherflüssigkeit, die schnell in das Plasma frischer Gewebezellen eindringen kannIn situ stabilisiert und schützt die RNA in der Zelle im nicht gefrorenen Zustand. Unmittelbar nach dem Entfernen von Gewebeflächen eingetaucht RNAfixer Aufbewahrung beeinflusst nicht die Qualität und Quantität der zukünftigen Extraktion von RNA. RNAfixer eliminiert die Notwendigkeit der sofortigen Behandlung von RNA-ProbenOder unbequem, dass flüssiger Stickstoff aufbewahrt werden muss. Nach Eintauchen in den RNAfixer kann die RNA in frischen Gewebezellen intakt inLagern Sie einen Tag bei 37 ° C, eine Woche bei 25 ° C, einen Monat bei 4 ° C und langfristig bei -20 ° C oder -80 ° C.
RNA-Virenproben wie HCV und HIV können einen Monat lang bei 37 ° C gelagert werden.Geeignet für tierisches Gewebe (Herz, Leber, Nieren, Muskeln, Hoden, Gehirn, Milz usw.), Kulturzellen, RNA-Viren, FrüchteFliegen, Bakterien, weiße Blutkörperchen, einige Pflanzengewebe usw.
Eigenschaften:
Einfach zu bedienen: Gewebe in der richtigen Größe und tauchen Sie in den RNAfixer ein, damit die RNA nicht abbaut wird.
2. Kein flüssiger Stickstoff erforderlich: So ist die Aufbewahrung der Proben ohne flüssigen Stickstoff, Trockeneis oder -80 ° C-Kühlschrank erforderlich, insbesondere für klinische und FeldprobenSchnelle und massive Sammlung.
3. Bequemer Transport: Die verarbeiteten Proben können eine Woche bei 25 ° C gespeichert werden, wodurch das Versand und der Transport der Proben einfach und günstig und günstig istAkademische Zusammenarbeit und Austausch.
4. Mehrfaches Gefrierschmelzen: Proben, die mit einem RNAfixer behandelt wurden, können mehrmals gefriert werden, während verschiedene Behandlungen der Proben durchgeführt werden könnenohne die Qualität der endgültig extrahierten RNA zu beeinträchtigen.
Starke Vergleichbarkeit: Der RNAfixer kann Fehler bei der Verarbeitung von großen Proben reduzieren und die Vergleichbarkeit zwischen den verschiedenen Experimenten erhöhen, was besonders nützlich für die Analyse des Spektrums der Genexpression in großem Maßstab ist.
Gebrauchsanweisung:
Der RNAfixer wird nur für frisches Gewebe verwendet und das Gefrieren von Gewebe vor Einweichen in den RNAfixer ist verboten. Nur schnell neueFrisches Gewebe wächst, breit, hohe Seitendicke < 0,5 cm in RNAfixer eingetaucht werden kann (solange eine Seite dick ist)Nicht mehr als 0,5 cm, kann der RNAfixer schnell durchdringen, die Größe der anderen Seiten ist nicht wichtig). Frische GruppierungGewebe Einweichen In einem 5-fachen Volumen RNAfixer, wie angewiesen, bei der richtigen Temperatur aufbewahren.
1. Tiergewebe RNAfixer zerstört oder löst keine Gewebestruktur, daher eingetaucht in RNAfixer Penetration erreichenDas ausgewogene Gewebe kann aus dem RNAfixer entnommen werden, in kleinere Stücke geschnitten und dann wieder in den RNAfixer gelegt werden.Nächstes Mal weiter verwenden. Kleine Organe wie Mausleber, Nieren und Milz müssen nicht geschnitten werden und können vollständig in einem RNAfixer gelagert werden.
Empfohlene Mengen an RNAstore für verschiedene Gewebeproben:

Viele pflanzliche Gewebe können direkt in den RNAfixer eingetaucht werden, einige Pflanzen haben natürliche Penetrationsbarrieren wie SchlammDie Schutzschicht muss zuerst die Schlammschicht zerstören, um die Penetration des RNAfixers zu erleichtern.
3. nach dem Blasen der Gewebekulturzellen sammeln Sie die Zellen zentrifug, entfernen Sie sie und waschen Sie sie einmal mit einem Eisbad PBS-PufferEntfernen Sie die restlichen Kulturflüssigkeiten. Suspendieren Sie die Zellen in einer kleinen Menge PBS-Puffer. Fünf bis zehn Mal das Volumen RNAfixer hinzufügen, mischenAlle.
Weiße Blutkörperchen Für die Erhaltung der weißen Blutkörperchen im ganzen Blut müssen die weißen Blutkörperchen von den roten Blutkörperchen und dem Serum getrennt und nach Gruppen getrennt werden.Wenn sie wie Gewebezellen behandelt werden, können weiße Blutkörperchen effektiv im RNA-Fixer aufbewahrt werden. Nicht ganz Blut oder Plasma.Oder die RNA im Serum wird im RNAfixer aufbewahrt, da sie zu hoch an Proteinen sind, wenn sie mit dem RNAfixer gemischt werden.Leicht lösliche Abfälle bilden.
5. Bakterien
Bakterien können nicht im RNAfixer wachsen, aber der RNAfixer zerstört die Bakterien nicht und E. coli hält eineNach Monaten kann eine vollständige RNA vorgelegt werden.
Aufbewahrung der Proben im RNAfixer:
1. Lagerung bei -80 ° CProben langfristig aufbewahren. Legen Sie die Probe im RNA-Fixer über Nacht bei 4 ° C und holen Sie die Probe nach Möglichkeit heraus.Entfernen Sie die saubere RNAfixer Flüssigkeit und stellen Sie sie dann bei -80 ° C. Für Gewebekulturzellen ist die Entfernung nicht erforderlich.RNAfixer， Direkt bei -80 ° C gefriert, wird die Zelle nicht spalten. Die Probe kann bei Raumtemperatur schmelzen undEs kann auch wieder eingefroren werden, ohne die Integrität und die Produktion der RNA zu beeinträchtigen.
2. Lagerung bei -20 ° CDie Probe im RNAfixer über Nacht bei 4 ° C platziert und dann auf -20 ° C übertragen. Die Probe wird bei -20 ° C nicht gefriert.Gefriert, aber es kann einige Kristalle bilden, die die künftige RNA-Extraktion nicht beeinflussen. Proben können im Zimmer verwendet werdenSchmelzt warm und kann auch wieder eingefroren werden, ohne die Integrität und die Ertragung der RNA zu beeinträchtigen.
3. Lagern bei 4 ° CDie Probe kann einen Monat bei 4 ° C gelagert werden.
4. Lagern bei 25 ° CDie RNA, die bei 25 ° C gelagert wurde, bleibt während einer Woche intakt und die RNA, die zwei Wochen lang gelagert wurde, wurde leicht abgebaut.Es kann kaum für die nördliche Analyse verwendet werden, aber die Qualität ist ausreichend für die Nuclease-Schutz-Assay oder RT-PCR.
Lagerung bei 37°CDie RNA, die bei 37 ° C gelagert wurde, blieb 24 Stunden intakt und wurde nach 3 Tagen teilweise abgebaut.RNAfixer speichert die RNA-Extraktion von Proben:Entnehmen Sie die Probe aus dem RNAfixer, der RNAfixer kann direkt in den Becken gegossen werden und mit Leitungswasser gespült werden.Sonderbehandlungen.
1. Organisation
Die Probe wird mit einer sauberen Pinzette aus dem RNAfixer herausgezogen und die restlichen RNAfixer mit Wasserpapier etwas abgesaugt.Die RNA kann wie frisches Gewebe nach flüssigem Stickstoff geschliffen und anschließend nach dem Standardverfahren der Homogenisierung extrahiert werden.
2. Zellen
Es gibt zwei Optionen für Zellen, die im RNAfixer gespeichert werden. Nach dem Entfernen des RNAfixers wird die RNA extrahiert.Eine ist die Extraktion direkt aus einer Mischung aus Zellen und RNAfixer.
RNA nach Entfernen des RNAfixersZellen, die im RNAfixer gespeichert sind, werden weniger verletzlich und können hohe Zentrifugalgeschwindigkeiten standhalten, ohne zu spaltenLösung. Wir haben Erfahrung mit der erfolgreichen Sammlung von Zellen bei 5000g Zentrifuge, da jede Zellstärke unterschiedlich ist, kannFühren Sie zuerst einen Vorversuch mit unwichtigen Zellen durch, um sicherzustellen, dass die Zentrifuge die Zellen nicht mit der Geschwindigkeit zerstört, mit der sie verwendet wird. Eine andere Wahl.Wählen Sie eine Mischung aus einem verdünnten RNAfixer und Zellen mit PBS in einem gleichen Volumen vor der Zentrifugation, um die Dichte der Lösung zu reduzieren,So kann die Zelllösung absetzen.
2) Entfernen Sie den RNA-Fixer nicht, sondern extrahieren Sie die RNA direkt
Es ist auch möglich, das 10-fache Volumen eines Schrittes Extraktionsreagenzien (wie TRIpure, TRI-Reagenzien) direkt zu Zellen undRNAfixer Mischung und dann den normalen Schritten folgen.

PCRGrundlagen und Vorsichtspunkte?

I. Experimentelle Prinzipien

PCRKünstliche selektive Vergrößerung in vitro.Die DNAEine Methode, die dem Organismus ähneltDie DNAdie Kopie. Im biologischen KörperDie DNAKopieren braucht Vorlagen, Vorlagen,Die DNAPolymerase,Die DNADesylase,dNTPsund außerhalb des Körpers;PCRDie Reaktion erfordert ebenfalls ähnliche Komponenten, Vorlagen, Vorläufer,PCR-Puffer、TaqEnzyme,dNTPs. Wo die Vorläufer eine bestimmte Sequenz sind, die künstlich entworfen wurde, um eine Verstärkung an einer bestimmten Position zu erreichen;PCR-PufferBereitstellung einer Pufferumgebung für Reaktionen; Der Reaktionsprozess ist ähnlich wie im Organismus.Die DNADie Doppelkette öffnet sich, die Vorläufer verbinden die Vorlage und erweitern sich zu einer neuen Kette. Diese Prozesse erfolgen im Organismus.Die DNADie Entkettung der Helylase erfolgt während in vitro durch die Kontrolle der Reaktionstemperatur. Wie üblich94℃Transgender VorlagenDie DNAÖffnen Sie die doppelte Kette, binden Sie den Einführungsstoff an die Schablone bei der Ausbrenntemperatur und schließlich in72℃Abschließen Sie die Erweiterung und wiederholen Sie diesen Vorgang, um bestimmte Segmente zu erreichenDie DNAerhebliche Erweiterung. Erst am Beginn des dritten Zyklus entstehen und das ZielDie DNADer gleiche BereichDie DNAMoleküle, die das Ziel weiter zyklisch erzeugenDie DNADer Index verdoppelt sich.

Später in der Erweiterung,Aufgrund der Akkumulation von Produkten,Die ursprünglich exponentiell vergrößerte Reaktion in eine flache Kurve verwandeln,Das Produkt steigt nicht mehr mit der Zykluszahl,Dies nennt man Plattform-Effekt. Plattformdauer(Plateau)Dies führt dazu, dass die niedrigen Konzentrationen von nicht spezifischen Produkten, die ursprünglich durch Fehlversammlungen entstanden sind, weiterhin erheblich zu erhöhen und höhere Werte zu erreichen. Daher sollte die Anzahl der Zyklen angemessen angepasst werden, um die Reaktion vor der Plattformperiode zu beenden und das nicht spezifische Produkt zu reduzieren. Ankunftszeit der Plattform(Plateau)Die Anzahl der erforderlichen Zyklen hängt von der Kopie der Vorlage in der Probe ab.

II. Hauptbestandteile

1.Vorlagen können in verschiedenen Formen sein, hauptsächlich einschließlich GenomeDie DNA, PartikelDie DNAGenome, die Viren tragenDie DNA、PCRProdukte,cDNAWarten, aber nicht fürdie RNAFür verschiedene Typen von Vorlagen unterscheiden sich die Vorherstellungszeiten und die Anzahl der Vorlagen. Allgemein für große GenomeDie DNAPrädiktive Zeit10 MinutenGenug, Plasma.DNA2minGenome, die Viren tragenDie DNAPräventivität2 Minuten、PCRProduktpräventivität2 MinutenGanz gut.

AchtungcDNAFür eine KetteDie DNAAber immer noch möglich.PCRDie Schablone, nur wenn in der ersten Runde der Zyklus nur ein Vorläufer verbindet, synthetisiert eine andere Kette. Ab Beginn der zweiten Runde werden beide Vorläufer mit spezifischen Stellen kombiniert, wodurch eine regelmäßigePCRdie Gleise. Gleiches wie eine Kette.die RNAAber nicht möglich.PCRDie Erweiterung liegt in der RealisierungPCRDie Reaktion istDie DNAPolymerase, nur gezielt identifiziertDie DNAKetten.

2.In Bezug auf die Anzahl der Vorlagen ist im Allgemeinen25ulSystemDie DNAQualität für50100ngFür das GenomDie DNAAufgrund seiner komplexeren Struktur ist die Konzentration der Extraktion auch häufig größer, um zu verhindern, dass die Konzentration zu groß ist.PCRAuswirkungen haben, so dass die ExtraktionDie DNAGradientelle Verdünnung durchführen. Ansonsten kann eine zu hohe Konzentration zu einer unspezifischen Verstärkung führen. Für die Partikel undPCRDas Produkt muss aufgrund seiner einfachen Struktur und der in der Regel niedrigeren Extraktionskonzentration nicht verdünnt werden.

Produkte, die das Unternehmen verkauft:

PCRWas sollten Sie im Experiment beachten??

keinCTWerte

Testergebnisse nicht gefundenCtWertsituationen,Prüfen Sie, ob folgende Probleme auftreten:

1Nicht ausreichend Zyklen(Normalerweise nicht mehr als45Schleife,Nicht nur der Hintergrundwert,Auch die Quantität nicht erlaubt.);

2、PCRFehler bei Programmeinstellungen,Der Schritt zur Erkennung des Fluoreszenzsignals ist falsch. allgemeinSGGesetzliche Annahme72℃Sammlung bei Erweiterungvon TaqManDas Gesetz erfasst in der Regel das Signal am Ende oder bei der Verlängerung des Brennens,Eine zusätzliche Fluoreszenzaufnahme ausgewählt;

3Abbau von Proben oder Proben. DurchgängigSeiteElektrophoresis zur Erkennung der Abbau von Vorläufern und Sonden;

4Schablonenmenge kann sich abbauen oder nicht ausreichend(Nicht mehr500ng,Entsprechend der Kit-Anleitung),Proben mit unbekannten Konzentrationen sollten mit der höchsten Konzentration der Serienverdünnungsprobe beginnen;Wenn die Vorlage zerstört wird,Die Einführung von Verunreinigungen in die Probenbereitung und wiederholtes Gefrierschmelzen sind zu berücksichtigen.,Es wird empfohlen, die Vorlagenprobe in kleinen Mengen aufzuteilen,Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren;

5Ist die Startsonde geeignet?(Insbesondere die Vorläufer überqueren die Inneren.,Um sicherzustellen, dass das Genom vergrößert wirdDNA;Auf- und AbfahrtTmWert übersteigt4℃Dies wirkt sich auch auf die Erweiterung aus.)。

CTEs ist zu spät wert.

In relativer Quantitätund CtDer Wert wird in der Regel kontrolliert1525Besser zwischen.,Wenn in absoluter Menge,Proben für eine geringe Anzahl von Kopien,CtDer Wert steigt,Aber in der Regel nicht überschreiten.40Schleife,Ansonsten ist die Quantität ungenau.

daher,UrteilCtIst ein zu spät auftretender Wert ungewöhnlich,Es muss nach spezifischem Design und Zweck des Experiments durchgeführt werden.

1Die Effizienz der Erweiterung ist gering. Unsachgemäßes Verhältnis zwischen oder zwischen der Probe und der Probe,Optimierung erforderlich;Unvernünftiges Design der Probe oder Probe,Neugestaltung erforderlich;

2、PCRVerfahren nicht geeignet,Drei Schritte Reaktion,Oder optimale Abbrennung/Erweiterte Temperatur,Die Brenntemperatur kann angemessen gesenkt werden;Abfeuern/Kurze Verlängerungszeit(Es kann unter den empfohlenen Zeitbedingungen verlängert werden.10s);

3、MgCl2Ungerechte Konzentration,Erhöhung der Magnesiumkonzentration usw.PCRMangel an Abbau oder Probenahme verschiedener Reaktionskomponenten;

4、PCRDas Produkt ist zu lang.PCRProduktdesign übersteigt500bp;

5Inhibitoren in der Vorlage. Mit einer hochreinen VorlagePCRSchablonen zu erkennen oder zu verdünnen.