TRAP Färbung Kit

2-8°C Lichtschutz

1. Die Gültigkeitsdauer ist die Gültigkeitsdauer, die unter den erforderlichen Bedingungen aufbewahrt wird, bevor die Kit nicht geöffnet wird.
2. Verwenden Sie das Reagenz so schnell wie möglich nach dem Entfernen!

3 Monate (Hinweis: Die Inkubationsflüssigkeit ist einmalig und gültig für eine Woche!)

Mikroskop

1. Paraffinschneiden
2. Gefrorene Schnitte
3. Zell-Lackierung, Reptilien
4. Blut usw.

1 optisches Mikroskop
2. Zylinder färben
3. Pipette
4. Sekunden
5. Eisbox

Reines Wasser

1. Folien tragen
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe

1. TRAP Inkubationsflüssigkeit leicht ausfallen, diese Methode ist geeignet, um die Haut zu perforieren Blut, nach dem Trocknen sollte rechtzeitig gefärbt werden;
2. Bei der Färbung der gefrorenen Schnitte sollte die Zeit, die die Schnitte bei Raumtemperatur ausgesetzt sind, reduziert werden.
Die Probe muss frisch sein und sofort nach der Entnahme bearbeitet werden, sonst beeinflusst sie die Aktivität des Enzyms.
Gewebe Fixierung muss in 4 ° C Kühlschrank durchgeführt werden, die Zeit sollte nicht mehr als 24 h, sonst wird die Enzymaktivität schwächer oder verschwinden.
5. Die Verwendung von Paraffinen wird in der Regel nicht empfohlen. Wenn Sie mit Paraffinen schneiden müssen, sollte die Temperatur nicht höher als 56 ° C sein, wenn das Gewebe in Paraffinen verpackt ist. Paraffin mit einem Schmelzpunkt von 52 bis 54 ° C sollte verwendet werden, um das Wachs einzutauchen, die Wachszeit ist kürzer, sonst wird die Enzymaktivität geschwächt oder verschwinden.
6. Paraffinscheiben müssen nicht befestigt werden.

(Hinweis: Die Inkubationsflüssigkeit ist einmalig und ist eine Woche lang gültig!)
Hinweis: Andere Arbeitsflüssigkeiten müssen vor der Verwendung frisch zusammengesetzt werden, sofort nach der Zusammensetzung verwendet werden, einmal nach der Verwendung, kann nicht platziert werden.

Färbung der Probe:
Blut und Knochenmark
1. Schub:
Nehmen Sie Vollblut oder Knochenmark 3ul oder so auf die Folie, halten Sie die Folie im Winkel von 30 ° mit der Folie, direkt vor den Bluttropfen, etwas nach hinten bewegen Sie den Kontakt mit den Bluttropfen, die Bluttropfen entlang der unteren Kante der Folie verteilen, und gleiten Sie gleichmäßig und glatt entlang der Folie-Ebene, bis die Bluttropfen die Folie ausbreiten. Nicht zu dünn, um nicht zu wenig Zellen zu haben, und nicht zu dick, um nicht zu überlappen.
2. Fixiert:
Lassen Sie die Beschichtung natürlich in der Luft trocknen und fixieren Sie sie für 2-3 Minuten in der Feststoff A in diesem Kit und waschen Sie sie für 30-60 Sekunden mit Wasser.
3. Inkubierung:
Nach dem Waschen noch nicht getrocknet in der Substratinkubationsflüssigkeit für 60 Minuten in Lichtschutz inkubieren. Die Färbung verschlechtert sich, wenn sie zu trocken ist.
4. Wiederinfektion:
Nach Inkubation nehmen Sie Wasser für 1 Minute und reinfektieren Sie, bevor die Folie nicht getrocknet ist. Sie können 1-2 Minuten mit Sumucin oder 2-3 Minuten mit Methylgrün wiederfärben, beide können entweder gewählt werden.

2. Zellen und Zellreppel
1. Fixiert:
Fügen Sie den Zellstrich oder das Zellreptil in die Fixierung A in diesem Kit für 2-3 Minuten und waschen Sie 30-60 Sekunden mit Wasser.
2. Inkubierung:
Nach dem Waschen noch nicht getrocknet in der Substratinkubationsflüssigkeit für 60 Minuten in Lichtschutz inkubieren. Die Färbung verschlechtert sich, wenn sie zu trocken ist.
3. Wiederinfektion:
Nach Inkubation nehmen Sie Wasser für 1 Minute und reinfektieren Sie, bevor die Folie nicht getrocknet ist. Sie können 1-2 Minuten mit Sumucin oder 2-3 Minuten mit Methylgrün wiederfärben, beide können entweder gewählt werden.

3. Gefrorene Schnitte
1. Zurückwärme:
Die gefrorenen Scheiben, die im Kühlschrank bei -20 ° C gelagert werden, auf den Scheibenhalter für 5-10 Minuten aufwärmen lassen. Sie können in einem 37 ° C Inkubationskasten zur Erwärmung platziert werden oder in einer kleinen Kiste, in der die Kiste in einem 37 ° C Wasserbad zur Erwärmung platziert wird.
2. Hydrierung:
Zurück in warmen Scheiben einweichen und 1-2 Minuten in Wasser einweichen.
3. Fixiert:
Lassen Sie die Scheiben natürlich in der Luft trocknen und fixieren Sie sie für 2-3 Minuten in der Fixierung in diesem Kit und waschen Sie sie für 30-60 Sekunden mit Wasser.
4. Inkubierung:
Nach dem Waschen noch nicht getrocknet in der Substratinkubationsflüssigkeit für 60 Minuten in Lichtschutz inkubieren. Die Färbung verschlechtert sich, wenn sie zu trocken ist.
5. Wiederinfektion:
Nach Inkubation nehmen Sie Wasser für 1 Minute und reinfektieren Sie, bevor die Folie nicht getrocknet ist. Sie können 1-2 Minuten mit Sumucin oder 2-3 Minuten mit Methylgrün wiederfärben, beide können entweder gewählt werden.

4. Paraffinschneiden
1. Entwachsen:
Entwachsen Sie in Dibenzen für 5-10 Minuten. Wieder 5-10 Minuten mit frischem Diphthylen-Entwachsen austauschen.
2. Einweichen:
Wasserloses Ethanol 5 Minuten einweichen. Verwenden Sie 90% bzw. 70% Ethanol für jeweils 2 Minuten.
3. Hydrierung:
2 Minuten in destilliertem Wasser einweichen.
4. Inkubierung:
Vor dem Trocknen in die Substratinkubationsflüssigkeit für 60 Minuten in Lichtschutz inkubieren. Die Färbung verschlechtert sich, wenn sie zu trocken ist.
5. Wiederinfektion:
Nach Inkubation nehmen Sie Wasser für 1 Minute und reinfektieren Sie, bevor die Folie nicht getrocknet ist. Sie können 1-2 Minuten mit Sumucin oder 2-3 Minuten mit Methylgrün wiederfärben, beide können entweder gewählt werden.

Ergebnisanalyse:
Positive Reaktionen sind hellrote oder dunkelrote Partikel, die im Zellplasma lokalisiert werden.

1 Zellinduktion gescheitert?
Die Qualität der Zytokinen ist wichtig, wenn Zelllinien oder primitive BMM-Zellen Knochenbrecher induzieren. Wenn die Induktion schlecht ist, können Sie die Anpassung der Induktionsbedingungen in Betracht ziehen, die RANKL-Konzentration zu erhöhen oder versuchen, M-CSF hinzuzufügen.

Wie erkennt man positive Zellen?
In der Regel nicht durch morphologische Veränderungen erklärt, RAW-Zellen sind sehr morphologisch sehr vielfältig, morphologische Veränderungen erklären das Problem nicht. Es wird allgemein angenommen, dass Multikern plus TRAP-positiv als Multikern-Knochenkrankzellen bezeichnet werden können.

1.Guiping Chen et al.
Bergapten unterdrückt RANKL-induzierte Osteoklastogenese und Ovariektomie-induzierte Osteoporose durch Suppression von NF-κB- und JNK-Signalwegen
Biochemische und biophysikalische Forschungskommunikationen 2019

2.Wen-Yong Fei et al.
Magnolol verhindert durch Ovariektomie induzierten Knochenverlust durch Unterdrückung der Osteoklastogenese durch Hemmung der Nuklearfaktor-κB- und mitogen-aktivierten Proteinkinasewege
Internationales Journal der Molekularen Medizin 2019