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Produktkategorien
Shanghai Beibo Biotechnologie Co., Ltd.
Apoptose-Testkit Annexin V
VerhandlungsfähigAktualisieren am05/06
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Übersicht
Das Annexin V-APC-Apoptose-Testkit ist ein Ca2+-abhängiges Phospholipid-bindendes Protein mit einem Molekulargewicht von 35-36 kD, das sich an eine hohe PS-Affinitätsspezifizität binden kann, die während der Apoptose außerhalb der Membran fließt. Die PS-Extroversion tritt vor der Zerstörung des Zellkernes, der DNA-Fragmentierung und dem Auftreten von apoptotischen Proteinen auf, was die Bindung von Annexin V an PS zu einer frühen apoptotischen Phase macht. .....
Produktdetails
Annexin V sterbtPrüfkit Einführung
Lagertemperatur:2-8°C Lichtschutz
Annexin V sterbtTestkitsHinweise
Langfristig kann nicht bei -20 ° C gelagert werden.
Annexin V-APC vermeidet wiederholtes Gefrieren. Mehrfaches Einfrieren kann zu einem Ausfall führen.
3. Annexin V-APC-Farbflüssigkeit kann nach einer kleinen Aufteilung bei -20 ° C aufbewahrt werden, wenn sie langfristig aufbewahrt werden muss.
4. Verwenden Sie das Reagenz so schnell wie möglich nach dem Entfernen!
Annexin V-APC vermeidet wiederholtes Gefrieren. Mehrfaches Einfrieren kann zu einem Ausfall führen.
3. Annexin V-APC-Farbflüssigkeit kann nach einer kleinen Aufteilung bei -20 ° C aufbewahrt werden, wenn sie langfristig aufbewahrt werden muss.
4. Verwenden Sie das Reagenz so schnell wie möglich nach dem Entfernen!
Gültigkeitsdauer
1 Jahr
Prüfmethoden
1. Flusszellometer
2. Laserkonzentration
3. Fluoreszenzmikroskop
2. Laserkonzentration
3. Fluoreszenzmikroskop
Anwendbare Proben
1. Suspendierte Zellen
2. Wandzellen
2. Wandzellen
Produkteigenschaften
1. praktisch: Verfügbare Flusszellometer oder Fluoreszenzmikroskop Erkennung;
Schnell: Das Experiment kann innerhalb von 1 Stunde abgeschlossen werden.
Genaue: Kann genau zwischen lebenden Zellen, apoptotischen Zellen und nekrotischen Zellen unterscheiden und den Anteil der einzelnen Zellgruppen zählen.
Schnell: Das Experiment kann innerhalb von 1 Stunde abgeschlossen werden.
Genaue: Kann genau zwischen lebenden Zellen, apoptotischen Zellen und nekrotischen Zellen unterscheiden und den Anteil der einzelnen Zellgruppen zählen.
Produktanwendungen
1. Flusszellometer
2. Laserkonzentration
3. Fluoreszenzmikroskop
2. Laserkonzentration
3. Fluoreszenzmikroskop
Geräte vorbereitet
1. Stromzytometer oder Fluoreszenzmikroskop oder Laserkofokus
2. Zentrifuge
3. Pipette
4. Kühlschrank
5. Eisbox
2. Zentrifuge
3. Pipette
4. Kühlschrank
5. Eisbox
Reagenzbereitung
1. PBS-Puffer (pH 7,4, häufig im Labor verwendete 10 mM Phosphorsäure-Puffersalzlösung (1X))
HBSS (ausgewogene Salzlösung von Hank)
HBSS (ausgewogene Salzlösung von Hank)
Verbrauchsmaterialbereitung
1. Zentrifugerrohr
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe
4. Aluminiumfolie
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe
4. Aluminiumfolie
Annexin V sterbtTestkitsHinweise zur Verwendung
1. Schraubendeckel-Spuren-Reagenz-Rohr-Reagenz vor dem Öffnen des Deckels bitte kurz zentrifugieren, sammeln Sie die Flüssigkeit auf der Innenwand des Deckels auf den Rohrboden, um zu vermeiden, dass der Flüssigkeitsverlust beim Öffnen des Deckels zu einer nicht ausreichenden Dosis führt.
Die Zellbehandlung erfordert vorsichtige Handhabung, um künstliche Schäden an Zellen zu vermeiden. Die Zentrifugalkraft ist so klein wie möglich, ohne Zellen zu verlieren, und die Wiedersuspension der Zellen ist sanft zu handeln, um mehrmals wiederholte intensive Schläge zu vermeiden. Kein Wirbelschwiller.
3. Annexin V-FITC (etc.) und Propidiumjodid (etc.) sind lichtempfindliche Substanzen, achten Sie bitte auf Lichtschutz beim Betrieb und minimieren Sie die Zeit, in der sie dem Licht ausgesetzt sind. Bei Bedarf können Sie eine Eisbox mit Deckel oder Aluminiumfolie verwenden, um das Licht zu schützen. Nach der Markierung werden die Zellen in einer Lichtschutzumgebung gehalten. Eine kurze Exposition gegenüber Licht während der Pipettierung (< 30 Sekunden) ist akzeptabel.
Da die Apoptose ein schneller und dynamischer Prozess ist, wird die Analyse unmittelbar nach der Färbung durchgeführt.
Die Zellbehandlung erfordert vorsichtige Handhabung, um künstliche Schäden an Zellen zu vermeiden. Die Zentrifugalkraft ist so klein wie möglich, ohne Zellen zu verlieren, und die Wiedersuspension der Zellen ist sanft zu handeln, um mehrmals wiederholte intensive Schläge zu vermeiden. Kein Wirbelschwiller.
3. Annexin V-FITC (etc.) und Propidiumjodid (etc.) sind lichtempfindliche Substanzen, achten Sie bitte auf Lichtschutz beim Betrieb und minimieren Sie die Zeit, in der sie dem Licht ausgesetzt sind. Bei Bedarf können Sie eine Eisbox mit Deckel oder Aluminiumfolie verwenden, um das Licht zu schützen. Nach der Markierung werden die Zellen in einer Lichtschutzumgebung gehalten. Eine kurze Exposition gegenüber Licht während der Pipettierung (< 30 Sekunden) ist akzeptabel.
Da die Apoptose ein schneller und dynamischer Prozess ist, wird die Analyse unmittelbar nach der Färbung durchgeführt.
5. Mit Annexin V-FITC (etc.) Kit zur Erkennung von Apoptose muss auf lebende Zellen ausgerichtet werden. Fixieren Sie die Zellen nicht, die Fixierung kann das Ergebnis beeinträchtigen.
Verwendung
Probenfärbung:
1. Zentrifugal sammeln suspendierte Zellen. Zentrifuge 300 x g -500 x g Kraft, 2-8 ° C, Zentrifuge Zeit 5 Minuten, das Medium abzugeben.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS. (300 x g -400 x g, 2-8 ° C, Zentrifuge Zeit 5 Minuten, um Zellen zu sammeln).
Suspendieren Sie die Zellen mit 100 μl 1X Annexin V-Bindungsflüssigkeit in einer Konzentration von etwa 1-5 x 106 Zellen / ml.
4. Fügen Sie 5 µl Annexin V-APC-Färbung in die Zellsuspension hinzu und inkubieren Sie 5-15 Minuten unter Lichtschutzbedingungen bei 2-8 ° C nach vorsichtigem Vermischen.
5. Nach Zugabe von PI (oder 7-AAD) Färbungsflüssigkeit vorsichtig vermischen und 1-3 Minuten unter Lichtschutzbedingungen bei 2-8 ° C inkubieren. (Dieser Schritt wird ausgewählt, je nach den experimentellen Bedürfnissen kann auch nur eine APC-Single-Färbung gemacht werden.)
Fügen Sie 400 µl PBS oder 1X Annexin V-Bindungsmittel hinzu und mischen Sie vorsichtig.
7. Sofort mit einem Flow-Zytometer untersucht.
Flow-Zytometrie-Analyse:
Die behandelten Zellen können zu diesem Zeitpunkt auf einem Stromzytometer analysiert werden.
Folgen Sie der üblichen Fluss-Apoptose-Erkennung.
Annexin V-APC fluoresziert mit einer Wellenlänge von 652 m und emittiert mit einer Wellenlänge von 670 m; PI fluoresziert mit einer Wellenlänge von 535 m und emittiert mit einer Wellenlänge von 620 m.
Vor der Inboard-Prüfung ist es notwendig, eine Protokollprobe mit der zu testenden Zelle vorzubereiten, um die Fluoreszenzkompensation des Flow-Zytometers und den Bereich der Kreuztüren einzustellen:
(I) Zellen, die nicht mit GFP gekennzeichnet sind
Leere Röhre: negative Kontrollzellen, keine gefärbten Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Regelung der Spannung.
Mono-Färbung: offensichtlich apoptotische Zellen, nur mit Annexin V / APC-Färbung. zur Regelung der Entschädigung.
Mono-Färbung: Es gibt offensichtlich apoptotische Zellen, nur PI-Färbung hinzugefügt. Zur Regulierung der Kompensation
Testrohr: Behandlungszellen zu testen, plus Annexin V / APC, PI. Nach der Einstellung der Spannungskompensation mit leeren Rohren und Monosolarrohren erhalten Sie die erforderlichen Stromdaten.
Transfektion von GFP-Zellen
① Nicht transfizierte leere Röhre: Nicht transfizierte Zellen, negative Kontrollzellen, keine gefärbten Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Regelung der Spannung.
Transfektion von GFP-leeren Röhren: Transfektion von GFP-Kontrollzellen, ohne gefärbte Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Kompensation
Nicht transfizierte Monochromatogen: Nicht transfizierte und offensichtlich apoptotische Zellen, nur mit Annexin V / APC-Färbung. zur Regelung der Entschädigung.
Nicht transfizierte monochromatische Röhre: Nicht transfizierte und offensichtlich apoptotische Zellen, nur PI-Färbung. Zur Regulierung der Kompensation
Testrohr: Behandlungszellen zu testen, plus Annexin V / APC, PI. Nach der Einstellung der Spannungskompensation mit leeren Rohren und Monosolarrohren erhalten Sie die erforderlichen Stromdaten.
1. Zentrifugal sammeln suspendierte Zellen. Zentrifuge 300 x g -500 x g Kraft, 2-8 ° C, Zentrifuge Zeit 5 Minuten, das Medium abzugeben.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS. (300 x g -400 x g, 2-8 ° C, Zentrifuge Zeit 5 Minuten, um Zellen zu sammeln).
Suspendieren Sie die Zellen mit 100 μl 1X Annexin V-Bindungsflüssigkeit in einer Konzentration von etwa 1-5 x 106 Zellen / ml.
4. Fügen Sie 5 µl Annexin V-APC-Färbung in die Zellsuspension hinzu und inkubieren Sie 5-15 Minuten unter Lichtschutzbedingungen bei 2-8 ° C nach vorsichtigem Vermischen.
5. Nach Zugabe von PI (oder 7-AAD) Färbungsflüssigkeit vorsichtig vermischen und 1-3 Minuten unter Lichtschutzbedingungen bei 2-8 ° C inkubieren. (Dieser Schritt wird ausgewählt, je nach den experimentellen Bedürfnissen kann auch nur eine APC-Single-Färbung gemacht werden.)
Fügen Sie 400 µl PBS oder 1X Annexin V-Bindungsmittel hinzu und mischen Sie vorsichtig.
7. Sofort mit einem Flow-Zytometer untersucht.
Flow-Zytometrie-Analyse:
Die behandelten Zellen können zu diesem Zeitpunkt auf einem Stromzytometer analysiert werden.
Folgen Sie der üblichen Fluss-Apoptose-Erkennung.
Annexin V-APC fluoresziert mit einer Wellenlänge von 652 m und emittiert mit einer Wellenlänge von 670 m; PI fluoresziert mit einer Wellenlänge von 535 m und emittiert mit einer Wellenlänge von 620 m.
Vor der Inboard-Prüfung ist es notwendig, eine Protokollprobe mit der zu testenden Zelle vorzubereiten, um die Fluoreszenzkompensation des Flow-Zytometers und den Bereich der Kreuztüren einzustellen:
(I) Zellen, die nicht mit GFP gekennzeichnet sind
Leere Röhre: negative Kontrollzellen, keine gefärbten Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Regelung der Spannung.
Mono-Färbung: offensichtlich apoptotische Zellen, nur mit Annexin V / APC-Färbung. zur Regelung der Entschädigung.
Mono-Färbung: Es gibt offensichtlich apoptotische Zellen, nur PI-Färbung hinzugefügt. Zur Regulierung der Kompensation
Testrohr: Behandlungszellen zu testen, plus Annexin V / APC, PI. Nach der Einstellung der Spannungskompensation mit leeren Rohren und Monosolarrohren erhalten Sie die erforderlichen Stromdaten.
Transfektion von GFP-Zellen
① Nicht transfizierte leere Röhre: Nicht transfizierte Zellen, negative Kontrollzellen, keine gefärbten Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Regelung der Spannung.
Transfektion von GFP-leeren Röhren: Transfektion von GFP-Kontrollzellen, ohne gefärbte Zellen. Ohne Annexin V/APC, PI. Zur Kompensation
Nicht transfizierte Monochromatogen: Nicht transfizierte und offensichtlich apoptotische Zellen, nur mit Annexin V / APC-Färbung. zur Regelung der Entschädigung.
Nicht transfizierte monochromatische Röhre: Nicht transfizierte und offensichtlich apoptotische Zellen, nur PI-Färbung. Zur Regulierung der Kompensation
Testrohr: Behandlungszellen zu testen, plus Annexin V / APC, PI. Nach der Einstellung der Spannungskompensation mit leeren Rohren und Monosolarrohren erhalten Sie die erforderlichen Stromdaten.
Analyse der häufig gestellten Fragen
Im Laufe des Experiments war Annexin V nicht gefärbt oder eine geringe positive Rate. Mögliche Gründe sind:
1. Unrichtige Einstellung des Stromzytometers / Mikroskops zur Erkennung. Anpassen Sie die richtigen Instrumenteinstellungen.
2. Bestimmen, ob der Induktor im Experiment Apoptose verursachen kann. Dies kann ausgeschlossen werden, indem eine positive Medikamentkontrolle festgelegt wird, die genau die Apoptose induziert.
Die Zellen haben keine Apoptose gestartet. Bestimmen Sie erneut den Zeitpunkt für den Start der induzierten Apoptose (Zeitplan-Experiment).
4. Die Anzahl der Zellen ist gering. Erhöhung der Zellzahl.
5. Wandzellen verdauen nicht richtig. Die Bindung von Annexin V und PS erfordert Ca2+-Ionen. Die Bindungsflüssigkeit enthält Ca2+. Die Verdauung von EDTA kann die Färbung beeinflussen. Es wird empfohlen, ohne EDTA zu verwenden oder nach der Verdauung mit PBS zu waschen.
Die positive Rate war während des Experiments hoch. Mögliche Gründe sind:
1. Unrichtige Einstellung des Stromzytometers / Mikroskops zur Erkennung. Anpassen Sie die richtigen Instrumenteinstellungen.
Die Zellen selbst sind zu schlecht. Das Experiment stellte fest, dass der Anteil der Kontrollzellen, die nicht induzierte Apoptose hatten, nach der Färbung mit AnnexinV + / PI + doppelt positiv war, was möglicherweise darauf zurückzuführen war, dass die Zellen selbst zu schlecht waren. Es wird empfohlen, die Vitalität der Zellen mit Taipanblau zu berechnen, die von Taipanblau infizierten Zellen sollten größer als 95% sein. Bei niedriger Vitalität wird empfohlen, die Zellen wiederherzustellen, in der Regel müssen die gerade erholten Zellen nach mindestens drei Generationen durchgeführt werden.
1. Unrichtige Einstellung des Stromzytometers / Mikroskops zur Erkennung. Anpassen Sie die richtigen Instrumenteinstellungen.
2. Bestimmen, ob der Induktor im Experiment Apoptose verursachen kann. Dies kann ausgeschlossen werden, indem eine positive Medikamentkontrolle festgelegt wird, die genau die Apoptose induziert.
Die Zellen haben keine Apoptose gestartet. Bestimmen Sie erneut den Zeitpunkt für den Start der induzierten Apoptose (Zeitplan-Experiment).
4. Die Anzahl der Zellen ist gering. Erhöhung der Zellzahl.
5. Wandzellen verdauen nicht richtig. Die Bindung von Annexin V und PS erfordert Ca2+-Ionen. Die Bindungsflüssigkeit enthält Ca2+. Die Verdauung von EDTA kann die Färbung beeinflussen. Es wird empfohlen, ohne EDTA zu verwenden oder nach der Verdauung mit PBS zu waschen.
Die positive Rate war während des Experiments hoch. Mögliche Gründe sind:
1. Unrichtige Einstellung des Stromzytometers / Mikroskops zur Erkennung. Anpassen Sie die richtigen Instrumenteinstellungen.
Die Zellen selbst sind zu schlecht. Das Experiment stellte fest, dass der Anteil der Kontrollzellen, die nicht induzierte Apoptose hatten, nach der Färbung mit AnnexinV + / PI + doppelt positiv war, was möglicherweise darauf zurückzuführen war, dass die Zellen selbst zu schlecht waren. Es wird empfohlen, die Vitalität der Zellen mit Taipanblau zu berechnen, die von Taipanblau infizierten Zellen sollten größer als 95% sein. Bei niedriger Vitalität wird empfohlen, die Zellen wiederherzustellen, in der Regel müssen die gerade erholten Zellen nach mindestens drei Generationen durchgeführt werden.
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