Anmerkungen für die Verwendung von Zellph-Testkits (blaue Fluoreszenz) 1. Bitte zentrifizieren Sie vor dem Öffnen des Deckels das Reagenz des Spiraldeckels in der Spuren-Reagenzgeröhre kurz, um die Flüssigkeit auf der Innenwand des Deckels auf den Boden des Rohres zu sammeln, um das Flüssigkeitsverstreuen beim Öffnen des Deckels zu vermeiden. Vor der Verwendung wird das Produkt auf Raumtemperatur zurückgezogen und kurz zentrifugiert, damit die DMSO-Lösung auf den Rohrboden konzentriert wird. Die pH-Sonde ist eine DMSO-Lösung, die bei niedriger Wintertemperatur bei Raumtemperatur fest ist und sehr leicht an der Rohrwand und der Saugkopfwand haftet. Achten Sie darauf, dass die Auflösung erwärmt werden muss, und der Saugkopf muss auch in der Vorwärmkammer gelegt werden, sonst kann er leicht wieder in der Innenwand des Saugkopfs kondensieren, um Verluste zu verursachen.
Einführung des Zellph-Testkits
Lagertemperatur: 2-8 ° C Lichtschutz
Hinweise
1. Zell-pH-Test-Kit (blaue Fluoreszenz) kann nicht langfristig -20 ° C aufbewahrt werden. Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren.
Sonde A ist eine DMSO-Lösung, wenn die Wintertemperatur niedrig ist, ist es sehr leicht, an der Rohrwand und der Saugkopfwand zu haften. Achten Sie darauf, dass es notwendig ist, die Schmelze zu erwärmen, um in einen flüssigen Zustand zu verwandeln, um den Schlauchboden zu zentrifizieren und den Deckel zu öffnen.
Gültigkeitsdauer: 6 Monate
Prüfmethode: Flusszellometer / / Laserkofokus / Fluoreszenzmikroskop
Anwendbare Proben: Zellen
Produktanwendungen: Strömungszellometer / / Laserkofokus / Fluoreszenzmikroskop
Geräte vorbereitet
1. Stromzytometer oder Laserkofokus oder Fluoreszenzmikroskop
2. Zentrifuge
3. Pipette
4. Kühlschrank
5. Eisbox
Reagenzbereitung
1. PBS-Puffer 2. HBSS 3. (Optional) Nigericin-Natriumsalz (相关产品BB-94002)
Verbrauchsmaterialbereitung
1. Zentrifugerrohr
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe
Hinweise zur Verwendung von Lysosomenzellen-pH-Testkits (blaue Fluoreszenz)
1. Schraubendeckel Spuren Reagenz Rohr Reagenz vor dem Öffnen des Deckels bitte kurz zentrifugieren, sammeln Sie die Flüssigkeit auf der Innenwand des Deckels auf den Rohrboden, um zu vermeiden, dass die Flüssigkeit beim Öffnen des Deckels fällt. Vor der Verwendung wird das Produkt auf Raumtemperatur zurückgezogen und kurz zentrifugiert, damit die DMSO-Lösung auf den Rohrboden konzentriert wird.
Die pH-Sonde ist eine DMSO-Lösung, die bei niedriger Wintertemperatur bei Raumtemperatur fest ist und sehr leicht an der Rohrwand und der Saugkopfwand haftet. Achten Sie darauf, dass die Auflösung erwärmt werden muss, und der Saugkopf muss auch in der Vorwärmkammer gelegt werden, sonst kann er leicht wieder in der Innenwand des Saugkopfs kondensieren, um Verluste zu verursachen.
Das Zellph-Testkit erkennt den pH-Wert in einer Zelle mit einem pH-Indikator oder einer pH-Induktionssonde. Es gibt in der Regel folgende Methoden::
Fluoreszenzsonde:
Einige zelluläre pH-Kits verwenden fluoreszierend gekennzeichnete pH-Induktionssonden, die sich an Wasserstoffionen (H+) innerhalb der Zelle binden können. Die Fluoreszenz-Intensität der Sonde ändert sich je nach Änderung des pH-Wertes. Durch die Messung der Fluoreszenzveränderung kann der pH-Wert innerhalb der Zelle berechnet werden.
Zum Beispiel sind die häufig verwendeten Fluoreszenzsonden SNARF-1 und BCECF, die die Fluoreszenzintensität und die Emissionswellenlänge unter unterschiedlichen pH-Umgebungen ändern und mit Geräten wie einem Laserkonfokusmikroskop oder einem Fluoreszenzspektrophotometer analysiert werden.
pH-Indikatoren:
Eine weitere gängige Methode ist die Verwendung von pH-Indikatoren, die die Farbe bei unterschiedlichen pH-Werten ändern. Diese Methode wird in der Regel für die Beobachtung unter dem Mikroskop oder in Kombination mit einem Stromzytometer verwendet. Zum Beispiel können pH-Indikatoren wie Phenolrot im Zellkulturmedium unterschiedliche Farben aufweisen, wenn sich der pH ändert.
Durchflusszytologie (FACS):
Durch die Verwendung von Fluoreszenzsonde in Kombination mit Fluoreszenzsonde wird der pH-Wert einer einzelnen Zelle gemessen. Diese Methode ermöglicht einen hohen Durchsatz-pH-Test in einer Zellpopulation.
Potentialmethode:
Das Potenzialgesetz verwendet eine pH-Elektrode oder eine Ionenselektive Elektrode (ISE), um die Potenzialänderungen in einer Zelle direkt zu messen und den pH-Wert zu berechnen.
Häufig gestellte Fragen:
Q1: Welches Prinzip wird normalerweise bei der Zellph-Testung verwendet?
A1: Fluoreszenzsonde, die vor allem pH-empfindlich sind. Diese Sonden ändern sich bei unterschiedlichen Säure- und Alkalingraden in ihrer Fluoreszenz- oder Emissionswellenlänge und reflektieren so genau den pH-Wert in Organen wie Lysosomen oder Zytoplasma.
Q2: Warum muss der pH-Wert der Zelle getestet werden?
A2: Der intrazelluläre pH ist ein wichtiger physiologischer Parameter, der eine Vielzahl von Lebensaktivitäten beeinflusst, wie Enzymaktivität, Zellprogramm, Introspiration und Apoptose. pH-Anomalien sind eng mit pathologischen Prozessen wie Tumoren und neurodegenerativen Erkrankungen verbunden.
Q3: Welche Anwendungen finden häufige Zellph-Testkits statt?
A3: Wird weit verbreitet in der Untersuchung von Zell-Autophagie (Überwachung der Autophage-Versäuerung), Tumorzell-Stoffwechsel (Waborg-Effekt), pH-Veränderungen während der Rezeptor-vermittelten Introspiration und die Wirkung von Medikamenten auf die innerzellige Umgebung.
Q4: Was sind die wichtigsten Vorsichtspunkte bei der Erkennung des Zellph?
A4: Zu den Schlüsselpunkten gehören: Sicherstellung der Genauigkeit der Kalibrierkurven, Vermeidung des Sondenschlusses, Aufrechterhaltung der Stabilität der Kultivumgebung (z. B. CO₂-Konzentration) während des Testprozesses und Einrichtung angemessener positiver und negativer Kontrollgruppen, um die Zuverlässigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten.
Q5: Wie wähle ich die richtige Zellph-Probe aus?
A5: Eine spezifische Sonde muss auf der Grundlage des Zielorganes (z. B. Zytoplasma, Lyosome) und der Laser- und Filterkonfiguration der experimentellen Ausrüstung (z. B. Fluoreszenzmikroskop, Strömungszellometer) ausgewählt werden.