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Produktkategorien
Shanghai Beibo Biotechnologie Co., Ltd.
Gesamtproteinextraktion Kit Merkmale Hinweise
VerhandlungsfähigAktualisieren am05/06
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- Natur des Herstellers
- Hersteller
- Produktkategorie
- Ursprungsort
Übersicht
Die Gesamtproteinextraktion-Kit enthält eine Rezeptur, die effektiv die Zellmembranbestandteile löst, einschließlich der Zytoplasmamembran, der Nukleomembran und einer Vielzahl von Zellorganenmembranen. Diese Kit enthält eine Mischung aus Protease-Inhibitoren, die den Protease-Abbau des Proteins verhindert und eine hohe Reinheit des Proteins garantiert.
Produktdetails
Lagertemperatur2-8℃
Gesamtproteinextraktion KitHinweise
1. Protease-Inhibitoren können auch bei 2-8 ° C gelagert werden, bevor sie nicht geöffnet werden. Lagern bei -20 ° C nach dem Öffnen des Deckels.
2. Der Protease-Inhibitor ist in einem festen Zustand bei einer Tieftemperatur von 2-8 ° C und wird nach Entfernen aus dem Kühlschrank auf Raumtemperatur oder 37 ° C für eine kurze Zeit in einem Wasserbad wiederhergestellt, um in einen flüssigen Zustand umzugehen, nachdem er zum Schlauchboden zentrifugiert und dann geöffnet wird.
3. Verwenden Sie das Reagenz so schnell wie möglich nach dem Entfernen!
2. Der Protease-Inhibitor ist in einem festen Zustand bei einer Tieftemperatur von 2-8 ° C und wird nach Entfernen aus dem Kühlschrank auf Raumtemperatur oder 37 ° C für eine kurze Zeit in einem Wasserbad wiederhergestellt, um in einen flüssigen Zustand umzugehen, nachdem er zum Schlauchboden zentrifugiert und dann geöffnet wird.
3. Verwenden Sie das Reagenz so schnell wie möglich nach dem Entfernen!
Gültigkeitsdauer
ein Jahr
Prüfmethoden
WB, IP, Co-IP, ELISA, EMSA 等
Anwendbare Proben
Tierische Zellen/Gewebe
Gesamtproteinextraktion KitProdukteigenschaften
1. Einfach zu bedienen, das Extrahieren von Proteinen aus Zellen und Geweben muss nicht durch Schleifen, wiederholtes Gefrierschmelzen, Ultraschallbrechen und andere Vorbehandlungen durchgeführt werden.
2. Der Extraktionsprozess ist einfach und bequem, um die Zeit für die Proteinextraktion auf 30 Minuten - 1 Stunde zu verkürzen.
Enthält Proteinstabilisator, das extrahierte Protein ist stabil.
4. Bei der UV-Detektion der Proteinkonzentration ist die Hintergrundstörung gering.
5. Der Gesamtproteinextrakt enthält eine Vielzahl von Wirkstoffen, die das Zytoplasmaprotein, das Nukleoprotein und das Membranprotein vollständig freisetzen können und das freigegebene Protein verbinden können, um Niederlage zu verhindern.
6. Protease-Inhibitoren hemmen den Abbau von Proteinen und die Protease-Inhibitor-Rezeptur ist optimiert. Die Protease-Inhibitor-Mischung enthält sechs unabhängige Protease-Inhibitoren AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin und E-64, die jeweils eine oder mehrere Protease-Aktivitäten spezifisch hemmen können. Die optimierte Zusammensetzung der Mischung ermöglicht es, fast alle wichtigen Protease-Aktivitäten zu hemmen, einschließlich Protease, Semiprotease, Asparagin-Protease, Alamin-Aminopeptidase usw.
2. Der Extraktionsprozess ist einfach und bequem, um die Zeit für die Proteinextraktion auf 30 Minuten - 1 Stunde zu verkürzen.
Enthält Proteinstabilisator, das extrahierte Protein ist stabil.
4. Bei der UV-Detektion der Proteinkonzentration ist die Hintergrundstörung gering.
5. Der Gesamtproteinextrakt enthält eine Vielzahl von Wirkstoffen, die das Zytoplasmaprotein, das Nukleoprotein und das Membranprotein vollständig freisetzen können und das freigegebene Protein verbinden können, um Niederlage zu verhindern.
6. Protease-Inhibitoren hemmen den Abbau von Proteinen und die Protease-Inhibitor-Rezeptur ist optimiert. Die Protease-Inhibitor-Mischung enthält sechs unabhängige Protease-Inhibitoren AEBSF, Aprotinin, Leupeptin, Pepstatin A, Bestatin und E-64, die jeweils eine oder mehrere Protease-Aktivitäten spezifisch hemmen können. Die optimierte Zusammensetzung der Mischung ermöglicht es, fast alle wichtigen Protease-Aktivitäten zu hemmen, einschließlich Protease, Semiprotease, Asparagin-Protease, Alamin-Aminopeptidase usw.
Produktanwendungen
WB, IP, Co-IP, ELISA, EMSA 等
Geräte vorbereitet
1. Zentrifuge
2. Oszillator
3. Homogenizer / Homogenizer
4. Wirbelmischer
5. Pipette
6. Kühlschrank
7. Eisbox
2. Oszillator
3. Homogenizer / Homogenizer
4. Wirbelmischer
5. Pipette
6. Kühlschrank
7. Eisbox
Reagenzbereitung
1. PBS-Puffer
2. Protein-Quantifizierungskit
2. Protein-Quantifizierungskit
Verbrauchsmaterialbereitung
1. Zentrifugerrohr
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe
2. Kopfsaugen
3. Einweghandschuhe
Hinweise zur Verwendung
Bitte zentrifizieren Sie das Reagenz der Drehkappe vor dem Öffnen des Deckels kurz und werfen Sie die Flüssigkeit auf der Innenwand des Deckels auf den Rohrboden, um zu vermeiden, dass die Flüssigkeit beim Öffnen des Deckels ausfällt.
Der Protease-Inhibitor ist in einem festen Zustand bei 2-8 ° C und wird nach Entfernen aus dem Kühlschrank auf Raumtemperatur oder 37 ° C für kurze Zeit in einem Wasserbad zurückgekehrt und in einen flüssigen Zustand verwandelt, nachdem er zum Schlauchboden zentrifugiert und dann geöffnet wird.
Alle Reagenzien im Versuch müssen gekühlt werden. Alle Geräte müssen im Kühlschrank von -20 ° C gekühlt werden. Die Probe muss während des gesamten Prozesses bei niedriger Temperatur gehalten werden.
Wenn die Lösung während der Lagerung von Protease-Inhibitoren fällt, beeinflusst sie nicht die Verwendung und wird nach der Lösung normal verwendet.
Wenn die Kit nicht in kurzer Zeit ausgebraucht wird, kann die Protease-Inhibitor-Mischung nicht alle Extrakte auf einmal hinzugefügt werden.
Andere Protease-Inhibitoren können nach eigenen Experimenten hinzugefügt werden.
Downstream-Experimente, wenn eine spezifische Protease oder Phosphatase enzymatische Aktivität zu prüfen, kann die Extraktion ohne Protease-Inhibitoren oder Phosphatase-Inhibitoren hinzugefügt werden, achten Sie darauf, dass der Extraktionsprozess den Betrieb bei niedriger Temperatur hält und die Zentrifugezeit verkürzt.
Im Western Blot-Experiment können Beta-Actin, GAPDH und Tubulin verwendet werden.
Die Drehzahl der Zentrifuge hat zwei Darstellungen der relativen Zentrifugekraft (RCF, ×g) und der Drehzahl pro Minute (RPM, r / min), einige Zentrifugeeinstellungen haben einen Umdrehung pro Minute und einen Schalter für die Anzeige x g, aber einige Zentrifugen haben keine automatische Schaltfunktion. Die Umrechnung erfolgt unter Verwendung der folgenden Formel: g = r × 1,118 × 10-5 × rpm (r ist der effektive Zentrifugarradius, d.h. die Länge von der Zentrifugarchse bis zur zentralen Position des Zentrifugarsammelrohrbundes in cm) Zum Beispiel: Bei einer Drehzahl von 3000 U/min und einem effektiven Zentrifugarradius von 10 cm ist die relative Zentrifugarkraft (RCF, ×g) = 10 × 1,118 × 10-5 × 30002 = 1006,2 (×g).
Der Protease-Inhibitor ist in einem festen Zustand bei 2-8 ° C und wird nach Entfernen aus dem Kühlschrank auf Raumtemperatur oder 37 ° C für kurze Zeit in einem Wasserbad zurückgekehrt und in einen flüssigen Zustand verwandelt, nachdem er zum Schlauchboden zentrifugiert und dann geöffnet wird.
Alle Reagenzien im Versuch müssen gekühlt werden. Alle Geräte müssen im Kühlschrank von -20 ° C gekühlt werden. Die Probe muss während des gesamten Prozesses bei niedriger Temperatur gehalten werden.
Wenn die Lösung während der Lagerung von Protease-Inhibitoren fällt, beeinflusst sie nicht die Verwendung und wird nach der Lösung normal verwendet.
Wenn die Kit nicht in kurzer Zeit ausgebraucht wird, kann die Protease-Inhibitor-Mischung nicht alle Extrakte auf einmal hinzugefügt werden.
Andere Protease-Inhibitoren können nach eigenen Experimenten hinzugefügt werden.
Downstream-Experimente, wenn eine spezifische Protease oder Phosphatase enzymatische Aktivität zu prüfen, kann die Extraktion ohne Protease-Inhibitoren oder Phosphatase-Inhibitoren hinzugefügt werden, achten Sie darauf, dass der Extraktionsprozess den Betrieb bei niedriger Temperatur hält und die Zentrifugezeit verkürzt.
Im Western Blot-Experiment können Beta-Actin, GAPDH und Tubulin verwendet werden.
Die Drehzahl der Zentrifuge hat zwei Darstellungen der relativen Zentrifugekraft (RCF, ×g) und der Drehzahl pro Minute (RPM, r / min), einige Zentrifugeeinstellungen haben einen Umdrehung pro Minute und einen Schalter für die Anzeige x g, aber einige Zentrifugen haben keine automatische Schaltfunktion. Die Umrechnung erfolgt unter Verwendung der folgenden Formel: g = r × 1,118 × 10-5 × rpm (r ist der effektive Zentrifugarradius, d.h. die Länge von der Zentrifugarchse bis zur zentralen Position des Zentrifugarsammelrohrbundes in cm) Zum Beispiel: Bei einer Drehzahl von 3000 U/min und einem effektiven Zentrifugarradius von 10 cm ist die relative Zentrifugarkraft (RCF, ×g) = 10 × 1,118 × 10-5 × 30002 = 1006,2 (×g).
Gebrauchsanweisung
Gesamtproteinextraktion von Zellproben:
Suspendierte Zellproteinextraktion:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
Nehmen Sie 5 × 106 Zellen, zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 2500 × g Bedingungen für 5 Minuten, sorgfältig das Medium zu saugen, so trocken wie möglich zu saugen und die Zellen zu sammeln.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS und saugen Sie sie nach jedem Waschen so gut wie möglich ab.
4. Fügen Sie 500 μl kalten Gesamtproteinextrakt in jede 5 x 106 -1 x 107 Zellen (ca. 50 mg Zellen / 50 μl Zellfälligkeitsvolumen) hinzu, blasen Sie nach dem Mischen und schwingen Sie 20-30 Minuten bei 4 ° C, bis die Zellen vollständig auflösen, ohne offensichtliche Zellfälligkeiten.
5. Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 12.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
6. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr, um das gesamte Protein zu erhalten.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Zellproteinextraktion:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
2. Vorsichtig die Kulturflüssigkeit der Wandzellen aufnehmen.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS und saugen Sie PBS nach jedem Waschen so gut wie möglich.
4. Fügen Sie eine angemessene Menge an kaltem Gesamtproteinextrakt hinzu, schwingen Sie 15-30 Minuten, bis die Zelle vollständig geklatzt ist, kratzen Sie es mit einem Zellkratzer und atmen Sie die Lyse in ein anderes sauberes Zentrifugerrohr ein.
5. Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 12.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
6. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr und erhalten Sie das gesamte Protein.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Gesamtproteinextraktion von Gewebeproben:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
2. Nehmen Sie 50-100 mg Gewebeproben, waschen Sie sie mit PBS und schneiden Sie sie so weit wie möglich mit einem Messer, fügen Sie 500 μl Gesamtproteinextrakt hinzu und homogenisieren Sie sie mit einem Gewebehomologator / Homogator, bis keine offensichtlichen Feststoffe für das bloße Auge sichtbar sind.
3. Einatmen Sie das Gewebehomomorph in ein vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr und schwingen Sie 10-20 Minuten bei 4 ° C.
Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 10.000-14.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
5. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr, um das gesamte Protein zu erhalten.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Suspendierte Zellproteinextraktion:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
Nehmen Sie 5 × 106 Zellen, zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 2500 × g Bedingungen für 5 Minuten, sorgfältig das Medium zu saugen, so trocken wie möglich zu saugen und die Zellen zu sammeln.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS und saugen Sie sie nach jedem Waschen so gut wie möglich ab.
4. Fügen Sie 500 μl kalten Gesamtproteinextrakt in jede 5 x 106 -1 x 107 Zellen (ca. 50 mg Zellen / 50 μl Zellfälligkeitsvolumen) hinzu, blasen Sie nach dem Mischen und schwingen Sie 20-30 Minuten bei 4 ° C, bis die Zellen vollständig auflösen, ohne offensichtliche Zellfälligkeiten.
5. Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 12.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
6. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr, um das gesamte Protein zu erhalten.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Zellproteinextraktion:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
2. Vorsichtig die Kulturflüssigkeit der Wandzellen aufnehmen.
Waschen Sie die Zellen zweimal mit kaltem PBS und saugen Sie PBS nach jedem Waschen so gut wie möglich.
4. Fügen Sie eine angemessene Menge an kaltem Gesamtproteinextrakt hinzu, schwingen Sie 15-30 Minuten, bis die Zelle vollständig geklatzt ist, kratzen Sie es mit einem Zellkratzer und atmen Sie die Lyse in ein anderes sauberes Zentrifugerrohr ein.
5. Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 12.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
6. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr und erhalten Sie das gesamte Protein.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Gesamtproteinextraktion von Gewebeproben:
1. Extraktionsvorbereitung:
2 µl Protease-Inhibitor-Mischung und 2 µl Phosphatase-Inhibitor-Mischung für jede 500 µl kalte Gesamtproteinextrakt, vermischt auf dem nachfolgenden Eis zu versetzen.
2. Nehmen Sie 50-100 mg Gewebeproben, waschen Sie sie mit PBS und schneiden Sie sie so weit wie möglich mit einem Messer, fügen Sie 500 μl Gesamtproteinextrakt hinzu und homogenisieren Sie sie mit einem Gewebehomologator / Homogator, bis keine offensichtlichen Feststoffe für das bloße Auge sichtbar sind.
3. Einatmen Sie das Gewebehomomorph in ein vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr und schwingen Sie 10-20 Minuten bei 4 ° C.
Zentrifugieren Sie bei 4 ° C, 10.000-14.000 × g Bedingungen für 15 Minuten.
5. Einatmen Sie das Oberserum in ein anderes vorgekühltes sauberes Zentrifugerrohr, um das gesamte Protein zu erhalten.
Der oben genannte Proteinextrakt wird nach Quantifizierung in einem Kühlschrank von -80 ° C aufgeteilt, um als Ersatz oder direkt für nachgelagerte Experimente aufzubewahren.
Analyse der häufig gestellten Fragen
Niedrige Proteinkonzentration?
Einige Gewebeproben werden möglicherweise nicht geklatzt, was zu niedrigen Proteinkonzentrationen führt. Die Behandlungszeit des Reagents A kann nur angemessen verlängert werden. Unter kontinuierlichen Oszillationsbedingungen kann man auch ohne Oszillator in mehreren Minuten mit dem Saugkopf mischen.
Zellen spalten sich langsam ab?
Um die Aktivität des gewonnenen Proteins vollständig zu gewährleisten, verwendet die Extraktflüssigkeit eine Rezeptur für schützende Proteine, eine milde Spaltfähigkeit und ein breites Spektrum von nachgelagerten Anwendungen. Eine angemessene Verlängerung der Auflösungszeit.
Mit welcher Methode wird Protein quantifiziert?
Die BCA Methode wird empfohlen. Die Bradford-Methode ist nicht geeignet, da Reagenz A Komponenten enthält, die die Bradford-Methode stören, was zu quantitativen Ungenauigkeiten führt. Wenn eine Dialyse durchgeführt wurde oder das Puffersystem durch eine Entsalzungssäule ausgetauscht wurde, kann die Bradford-Methode verwendet werden.
4. Gibt es bei der Extraktion gelöse Abfälle?
In der Proteinextrakt Behandlungsprodukte manchmal eine kleine Menge transparenter Glie auftreten, ist ein normales Phänomen. Diese transparente Gela ist ein Komplex, der genomische DNA usw. enthält. Ohne den Nachweis eines spezifischen Proteins, das besonders eng an die DNA des Genoms gebunden ist, kann das Serum direkt zentrifugiert werden, um nachfolgende Experimente durchzuführen; Wenn es erforderlich ist, besonders enge Proteine zu erkennen und das Genom zu binden, kann es durch Ultraschall verarbeitet werden, 300 W / 10 Sekunden Intervall von 10 Sekunden, Ultraschall für 3 Minuten, anschließend Zentrifugal Entfernung des Reinigungsmittels für die Folgeexperimente. Bei der Erkennung einiger gängiger Transkriptionsfaktoren wie NF-kappaB, p53 usw. ist keine Ultraschallbehandlung erforderlich.
Ist das gewonnene Protein aktiv?
Dieses Kit enthält keine ionischen Entkalkungsmittelkomponenten, zerstört nicht die Struktur des Proteins, zerstört nicht die ursprüngliche Wechselwirkung zwischen den Proteinen, und das Protein behält seine natürliche Komposition und Aktivität.
Einige Gewebeproben werden möglicherweise nicht geklatzt, was zu niedrigen Proteinkonzentrationen führt. Die Behandlungszeit des Reagents A kann nur angemessen verlängert werden. Unter kontinuierlichen Oszillationsbedingungen kann man auch ohne Oszillator in mehreren Minuten mit dem Saugkopf mischen.
Zellen spalten sich langsam ab?
Um die Aktivität des gewonnenen Proteins vollständig zu gewährleisten, verwendet die Extraktflüssigkeit eine Rezeptur für schützende Proteine, eine milde Spaltfähigkeit und ein breites Spektrum von nachgelagerten Anwendungen. Eine angemessene Verlängerung der Auflösungszeit.
Mit welcher Methode wird Protein quantifiziert?
Die BCA Methode wird empfohlen. Die Bradford-Methode ist nicht geeignet, da Reagenz A Komponenten enthält, die die Bradford-Methode stören, was zu quantitativen Ungenauigkeiten führt. Wenn eine Dialyse durchgeführt wurde oder das Puffersystem durch eine Entsalzungssäule ausgetauscht wurde, kann die Bradford-Methode verwendet werden.
4. Gibt es bei der Extraktion gelöse Abfälle?
In der Proteinextrakt Behandlungsprodukte manchmal eine kleine Menge transparenter Glie auftreten, ist ein normales Phänomen. Diese transparente Gela ist ein Komplex, der genomische DNA usw. enthält. Ohne den Nachweis eines spezifischen Proteins, das besonders eng an die DNA des Genoms gebunden ist, kann das Serum direkt zentrifugiert werden, um nachfolgende Experimente durchzuführen; Wenn es erforderlich ist, besonders enge Proteine zu erkennen und das Genom zu binden, kann es durch Ultraschall verarbeitet werden, 300 W / 10 Sekunden Intervall von 10 Sekunden, Ultraschall für 3 Minuten, anschließend Zentrifugal Entfernung des Reinigungsmittels für die Folgeexperimente. Bei der Erkennung einiger gängiger Transkriptionsfaktoren wie NF-kappaB, p53 usw. ist keine Ultraschallbehandlung erforderlich.
Ist das gewonnene Protein aktiv?
Dieses Kit enthält keine ionischen Entkalkungsmittelkomponenten, zerstört nicht die Struktur des Proteins, zerstört nicht die ursprüngliche Wechselwirkung zwischen den Proteinen, und das Protein behält seine natürliche Komposition und Aktivität.
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