RNAsafe effektiver RNase-Aktivator

Die Produkte des Unternehmens sind ausschließlich zur Forschung bestimmt und dürfen nicht zur klinischen Diagnose verwendet werden!

Lagerbedingungen: -20 ° C für mehr als ein halbes Jahr aufbewahren.

Produktbeschreibung:

RNAsafe enthält mehrere spezielle Verbindungen, die die RNase deaktivieren und die RNase effektiv entfernen, die möglicherweise in verschiedenen Lösungen oder Reaktionspuffern vorhanden ist, um den Abbau der RNA zu verhindern. RNAsafe kann zur Herstellung von RNA-Suspensionen verwendet werden und kann in eine Vielzahl von RNA-Reaktionen hinzugefügt werden (z. B. in vitro Transkription, Reverse Transkription, RT-PCR, Sondenvorbereitung, Molekularhybridisierung, Nuclease Protection Assay usw.). Aktivieren Sie mögliche Spuren von Rnase-Kontamination, um die RNA-Stabilität zu erhalten und bessere Ergebnisse zu erzielen.

Eigenschaften:

1. Geeignet für eine Vielzahl von Puffern, einschließlich Tris- und MOPS-Puffersystemen, die nicht von DEPC behandelt werden können.

2. Sicherheit und einfache Entfernung von Spuren von RNase aus der Lösung.

Die behandelte Lösung kann jederzeit wiederverarbeitet werden (60 ° C 10-20 min), um jede mögliche nachfolgende RNase-Kontamination zu entfernen.

4. Beeinträchtigt nicht die Aktivität der Reverse Transkriptiase, RNA-Polymerase und hitzebeständige DNA-Polymerase, kann für Reverse- und in vitro-Transkriptionsreaktionen verwendet werden.

5. Keine Hochdrucksterilisierung nach der Behandlung erforderlich.

Verwendung:

1. Dieses Produkt ist eine 20-fache Konzentration und verdünnt 20-fache RNAsafe in der zu behandelnden allgemeinen Lösung oder Reaktionspuffer auf eine Endkonzentration von 1-fache Arbeitskonzentration. Zum Beispiel können 5 µl RNAsafe in 95 µl zu behandelnde Lösung hinzugefügt werden.

20 min bei 60°C verarbeiten, um die RNase zu deaktivieren. Die mit RNAsafe behandelte Lösung kann auf Raumtemperatur abgekühlt werden. Die behandelte Lösung kann erneut verarbeitet werden (60 ° C 10-20 min), um RNase-Kontaminationen zu entfernen, die während der Lagerung auftreten können. Die Lösung wird auf Raumtemperatur abgekühlt und mit temperaturempfindlichen Enzymen wie Reverse Transcriptase versehen.

PCRWelche Reagenzien und Geräte werden zur Reaktion verwendet?

Reagenzien:
VorlageDie DNA：PCRReaktion braucht VorlageDie DNAEntnommen aus Zellen, Gewebe und Blut.Die DNAwarten; Vorläufer:PCRDie Reaktion der beiden Vorläufer, jeweils mit der VorlageDie DNADas Paaren beider Enden erhöht die spezifischen Gebiete, die erforderlich sind, und die Vorläufer können auch synthetisiert werdenTAVorläufer, die beim Klonen verwendet werden;dNTPs：PCREs sind vier Reaktionen erforderlich.dNTPseinschließlich Deoxyadenoside (dATP(Deoxythymotid)dCTPDesoxy-Vogelpeptide (dGTP(Deoxycytosinsäure)dTTPzur Zellteilung,Die DNABiologische Prozesse wie die SynthesePCRErweiterte VorlagenDie DNAVerlängerung und Erweiterung der Kette;Taq DNAPolymerase:PCRReaktionsbedingte Polymerase, allgemeine VerwendungTaqPolymeren und andere Arten von Polymeren wiePFU、Phusionusw. zur VergrößerungDie DNAKetten;PCR-PufferLösung: JaPCRPuffert die Reaktion, reguliert die ReaktionpH-WertSulfidwasserstoffsalzSDSKleinmolekulare organische Verbindungen wie Formaldehyd können verstärkt werdenPCRReaktionsspezifizität, wodurch die Reaktionseffizienz verbessert wird; Enzymschneidsystem:PCRAmplifikation beinhaltet oft experimentelle Schritte wie Rekonstruktion, Konstruktion und Sequenzierung, die oft eine Enzymschnitt erfordern.Marke:Ein Molekulargewichtsstandard zur UnterscheidungDie DNAWerkzeuge der Stückgröße.Die DNAReinigungskit: zur ReinigungPCRReaktionsprodukte;
Ausrüstung:
PCRInstrument: zur Kontrolle der ReaktionstemperaturPCRStrenge Kontrolle der unterschiedlichen Temperaturen bei der Reaktion; Elektrophoresbecken: zur TrennungPCRErzeugnisse erweitern; Nukleinsäureextraktor: Nukleinsäure wird vollständig automatisch aus Gewebeproben extrahiert. Diese Reagenzien und Geräte sindPCRAlles in der molekularen Biologie ist nur auf einer geordneten Grundlage möglich.PCRReagieren und genaue Ergebnisse erzielen.

PCRRelevante grundlegende Experimente:

PCRDie allgemeine Polymerase-Kettenreaktion besteht aus20zu35Jeder Zyklus besteht aus folgenden3Ein Schritt:

1. Transgender:

Die hohe Temperatur (93-98℃Doppelkette machenDie DNATrennung. Die hohe Temperatur verbindet die beidenDie DNADie Wasserstoffbindung der Kette ist unterbrochen. Vor dem ersten Zyklus wird in der Regel länger erhitzt, um sicherzustellen, dass die Schablone und das Vorbild getrennt sind und nur in Einzelkettenform vorhanden sind. Die Zeit der Schritte1-2Eine Minute. Als nächstes.PCRDas Gerät steuert die Temperatur in die Zyklusphase.

II. Brennen oder Verbinden,Wiederholung:

inDie DNANach der Trennung der Doppelkette lässt sich die Temperatur senken, sodass die Vorläufer in eine Einzelkette verbunden werden könnenDie DNAAuf. Die Temperatur in dieser Phase ist in der Regel niedriger als der Primärschmelzpunkt.5℃. Eine falsche Ausbrenntemperatur kann dazu führen, dass die Vorlage nicht oder falsch mit der Vorlage kombiniert wird. Die Zeit der Schritte1-2Minuten.

3. Erweiterung:

Die DNADie Polymerase beginnt entlang des Bindungsprimers beim AbkühlenDie DNAKettensynthese komplementärer Ketten. Die Temperatur in dieser Phase hängt vonDie DNAPolymerase. Die Schrittzeit hängt von der Polymerase und der Notwendigkeit der Synthese ab.Die DNAStücklänge. traditionellTaqSchätzung der Synthese1000 bp / minNeuerTbr(Aus Thermophile Bakterien)Der Thermus brockianus(etwa40Zweitens benötigen kommerzielle Unternehmen nur etwa10-15Sekunden.

PCROptimierung der Reaktionsbedingungen:

1Temperatur und Zeit der Veränderung:

GarantievorlageDie DNADie Entkettung garantiert die gesamtePCRAusdehnung ist der Schlüssel zum Erfolg. erhitzen90~95°C, 30~60sKomplizierter.Die DNAMoleküle sind auch einkettig variabel. Zu hohe oder zu lange dauernde Temperaturen können korrigiert werdenTaqEnzymaktivität unddNTPMoleküle verursachen Schäden.

2Wiederholte Temperatur und Zeit:

PCRDie Vergrößerungsspezifizität hängt von der Kombination von Primären und Vorlagen während des Reproduktionsprozesses ab. Je höher die Temperatur ist, desto spezifischer ist das Produkt. Je niedriger die Temperatur ist, desto weniger ist die Produktspezifizität. Es muss auf Grundlage der VoraussetzungenTmWerte spezifisch festlegen.

3Temperatur und Zeit verlängern:

In der Regel gelegenTaqOptimale Temperatur des Enzyms70~75°CZwischen. Elemente kleiner als16Wenn ein Nukleotid, eine zu hohe Ausdehnungstemperatur ist nicht förderlich für die Bindung des Primärs und der Schablone, kann langsam erwärmt werden, um70~75°C. Erweiterte Reaktionszeit kann je nach Länge des zu vergrößernden Segments kleiner als1kb, 1minausreichend; größer als1kbDie Verlängerungszeit muss verlängert werden.TaqEnzyme basieren auf1kb/minZeit erhöhen. Es ist hier zu beachten, dass eine zu lange Verlängerung eine nicht spezifische Verstärkung auftreten kann. Daher muss die richtige Verlängerungszeit festgelegt werden.

4Anzahl der Zyklen:

Nach Auswahl der anderen ParameterPCRDie Anzahl der Zyklen hängt hauptsächlich von der Vorlage abDie DNAKonzentration. Theoretisch.20〜25Nach dem nächsten Zyklus,PCRDie Akkumulation des Produkts kann den maximalen Wert erreichen, die Ausbeute in der Praxis aufgrund der Reaktion pro Schritt nicht erreicht werden kann100%Unabhängig von der Konzentration der Schablone,20~30Eine vernünftigere Anzahl von Zyklen. Je mehr Zyklen, desto mehr nicht-spezifische Verstärkung.

Produkte, die das Unternehmen verkauft: