Pflanzensäuregehalt-Test-Kit Spurmethode

Pflanzensäuregehalt Test Kit Anleitung

Spurmethode

Warennummer:BC5845

Spezifikationen:100T/48S

Produktzusammensetzung: Bitte überprüfen Sie vor der Verwendung sorgfältig, ob das Volumen des Reagents mit dem Volumen in der Flasche übereinstimmt. Bei Fragen wenden Sie sich bitte unverzüglich an das Personal von Solebar.

Zubereitung der Lösung:

1, Reagenz 2: 4 ml Reagenz hinzufügen vor der Anwendung, vollständig gelöst; Aufbewahrung mit unvollständigen Reagenzien - 20 ° C4Wochen, vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren;

2, Reagenz 3: 2,36 mL destilliertes Wasser vor der Anwendung vollständig gelöst, dann den Pistolenkopf in die Flüssigkeitsoberfläche langsam hinzufügen0,64 mlKonzentrierte Schwefelsäure, vollständig gemischt; 2-8 ° C kann aufbewahrt werden4Woche;

3, Reagenz 4: 15 ml destilliertes Wasser vor der Anwendung, das vollständig gelöst ist, und dann den Pistolenkopf in die Flüssigkeitsoberfläche langsam hinzufügen15 μLKonzentrierte Schwefelsäure, vollständig gemischt; 2-8 ° C kann aufbewahrt werden4Woche;

4, Arbeitsflüssigkeit: vor der Anwendung nach der Probenvolumen nach dem Reagenz drei: Reagenz vier = 1 ml: 5 ml (insgesamt6 ml，40T)Verhältnisse gemischt, am selben Tag nach der Konfiguration;

5, Standard-Produkt: 1,08 ml Reagenz vor der Anwendung, eine vollständige Lösung, zu 10 μmol / ml Pflanzensäure Standard-Produkt, 2-8 ° C für 4 Wochen aufbewahren;

Zubereitung von 250 nmol / mL-Standardprodukten: 50 μL 10 μmol / mL-Pflanzensäure-Standardprodukt und 450 μL destilliertes Wasser vor der Anwendung zu 1 μmol / mL-Standardprodukt (dh 1000 nmol / mL) mischen; 250 μL 1000 nmol/ml Standardprodukt und750 μL destilliertes Wasser Mischung zu 250 nmol / mL Pflanzensäure Standardprodukt für die Standardröhrenmessung im folgenden Arbeitsblatt, jetzt verfügbar.

Produktbeschreibung:

Phytic Säure, auch bekannt als Musylol-Hexaphosphorsäure, Cyclohexaphosphorsäure, ist weit verbreitet in Eukaryozellen und spielt eine Schlüsselrolle in vielen zellulären Aktivitäten, wie: Aufrechterhaltung des anorganischen Phosphorstabilitätsstatus, Beteiligung an der Signalisierung von Pflanzenhormonen und Beteiligung als Hilfsfaktor von EnzymenDie DNAReparatur,die RNABearbeiten undmRNAExport. Pflanzensäure ist die primäre Phosphorquelle für die Keimung und das Wachstum von Pflanzen und ist weit verbreitet in pflanzlichen Lebensmitteln wie Getreide, Bohnen, Obst, Gemüse und Trockenfrüchten.

Unter bestimmten Umgebungsbedingungen kann Plantase Natriumplantat (Natrium-Musylol-Hexaphosphat-12) abbauen, um anorganisches Phosphor und Musylol-Derivate zu erzeugen, unter sauren Bedingungen reagiert anorganisches Phosphor und Ammoniummolibdanat, um blaue Molybdenblaue Substanz zu erzeugen, deren charakteristische Absorptionsspitze bei 700 nm sind, durch die Bestimmung des Gehalts an anorganischem Phosphor kann der Pflanzensäuregehalt berechnet werden.

Hinweis: Vor dem Experiment wird empfohlen, 2-3 Proben mit hohen erwarteten Unterschieden für das Vorexperiment auszuwählen.

Eigene Geräte und Zubehör:

Sichtbares Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Tieftemperaturzentrifuge, Wasserbad/Thermostat, Analysewage, Spurgelass/96Bohrplatte, verstellbare Pipette, Grinder/Absorber,Konzentrierte Schwefelsäure（>98%，AR）Eis und destilliertes Wasser.

Betriebsschritte:

Einer,Probenbehandlung(Die Probenmenge kann angemessen angepasst werden, die spezifischen Verhältnisse können in der Literatur verwiesen werden)

1. Frische Pflanzenproben: nach Masse (g): Volumen der Flüssigkeit extrahieren(ml)für1：5~10Verhältnis (empfohlen)0.1gSchließen Sie sich an1 mlExtraktflüssigkeit I) Zugabe der Extraktflüssigkeit I, nach vollständiger Homogenisierung, Normaltemperatur-Schütteln2 StundenUnd dann in4℃，10000gZentrifugieren10 Minuten， 取0,8 mlFlüssigkeit, dann langsam hinzufügen.0,15 mlExtrahieren Sie Flüssigkeit II, langsam blasen und mischen, bis keine Blasen erzeugen,4 ℃ 10000gZentrifugieren10 MinutenAnschließend zur Prüfung.

2. Trockenpulverpflanzenprobe: nach Masse (g): Volumen der Flüssigkeit extrahieren(ml)für1：5~20Verhältnis (empfohlen)0.05gSchließen Sie sich an1 mlExtraktflüssigkeit I) Zugabe der Extraktflüssigkeit I, nach vollständiger Homogenisierung, Normaltemperatur-Schütteln2 StundenUnd dann in4℃，10000gZentrifugieren10 Minuten， 取0,8 mlFlüssigkeit, dann langsam hinzufügen.0,15 mlExtrahieren Sie Flüssigkeit II, langsam blasen und mischen, bis keine Blasen erzeugen,4 ℃ 10000gZentrifugieren10 MinutenAnschließend zur Prüfung.

3. Flüssigkeitsprobe: Nehmen Sie 100 μL Flüssigkeit hinzufügen1 mlExtraktionsflüssigkeit 1, Normaltemperatur2 StundenUnd dann in4℃，10000gZentrifugieren10 Minuten， 取0,8 mlFlüssigkeit, dann langsam hinzufügen.0,15 mlExtrahieren Sie Flüssigkeit II, langsam blasen und mischen, bis keine Blasen erzeugen,4 ℃ 10000gZentrifugieren10 MinutenAnschließend zur Prüfung.

Hinweis:Extraktion 2Es muss langsam hinzugefügt werden, nach dem Zugang wird eine Menge Blasen erzeugt, empfohlen2mL EP-Röhre für den Betrieb.

II. Bestimmungsschritte

1. Sichtbare Spektrophotometer / Enzym-Marker Vorwärmung30 MinutenStellen Sie die Wellenlänge auf700 nmDas sichtbare Spektrophotometer destilliert Nullwasser.

2. Arbeitsblatt: (1,5 m LEP-Röhre mit folgenden Reagenzien)

Berechnung des Pflanzensäurengehalts

1. Berechnung nach Proteinkonzentration der Probe

Pflanzensäurengehalt (nmol/mg pro)=ΔA Messung× CZiel÷ΔA-Norm× Vwie÷(V)wie× Cpr) = 250×ΔA Messung÷ΔA-Norm÷Cpr

2. Berechnung nach Probenqualität

Pflanzensäurengehalt (nMol/g Masse)=ΔA Messung× CZiel÷ΔA-Norm× VOber+ VExtraktion 2÷ (W × V)Ober÷VExtraktion 1)

=296.875×ΔA Messung÷ΔA-Norm÷W

3. Berechnung nach Flüssigkeitsvolumen

Pflanzensäurengehalt (nMol/mL)=ΔA Messung× CZiel÷ΔA-Norm× VOber+ VExtraktion 2÷ [V]Flüssigkeit× VOber÷(V)Extraktion 1+ VFlüssigkeit)]

=3265.625×ΔA Messung÷ΔA-Norm

Norm C: Standardkonzentration, 250nmol/mL； V: Fügen Sie das Probenvolumen hinzu,0,12 mlV: das Volumen der Flüssigkeit bei der Extraktion,0,8 ml；VExtraktion II: das Volumen der Extraktion II hinzufügen,0,15 ml；VExtraktflüssigkeit 1: ein Volumen der zugefügten Extraktflüssigkeit,1 mlCpr: Proteinkonzentration der Probe,mg/mlV Flüssigkeit: Flüssigkeitsprobenvolumen,0,1 mlW: Probenqualität,g。

Hinweis:

1. Wenn∆A ist kleiner als0.010oder die Messung der Absorptionswerte des Rohres in der Nähe des leeren Rohres, die Probenvolumen erhöhen können, bevor die Messung durchgeführt wird; wenn∆A größer als1Es wird empfohlen, die Probe nach entsprechender Verdünnung mit reinem destilliertem Wasser zu messen. Beachten Sie, dass die Berechnungsformel synchronisiert wird.

2, wenn die Probe trüb ist, nachdem die Arbeitsflüssigkeit hinzugefügt wurde, wird empfohlen, die Probe mit destilliertem Wasser zu verdünnen, bevor sie bestimmt wird. Beachten Sie, dass die Berechnungsformel synchronisiert wird.

3. Die Extraktflüssigkeit enthält einen Proteinfallstoff, daher kann die Oberflüssigkeit nicht zur Bestimmung der Proteinkonzentration verwendet werden. Für die Bestimmung des Proteingehalts ist eine separate Probe erforderlich.

Experimentelle Beispiele:

1. Wägen Sie 0,1044g Zwiebelprobe, folgen Sie den Extraktionsschritten und den Messschritten,96Bohrplattenmessung Berechnung:ΔA Messung= einMessung-AVergleich=0.411-0.375=0.036，ΔA-Norm= einStandard-ALeer=0.811-0.096=0.715Berechnet nach Probenqualität:

Pflanzensäurengehalt (nMol/g Masse)=296.875×ΔA Messung÷ΔA-Norm÷W=143,18nMol/g Masse.

2. Wägen Sie 0,05 g Weizenmehl, folgen Sie den Extraktionsschritten und den Messschritten,96Bohrplattenmessung Berechnung:ΔA Messung= einMessung-AVergleich=0.331-0.188=0.143，ΔA-Norm= einStandard-ALeer=0.811-0.096=0.715Berechnet nach Probenqualität:

Pflanzensäurengehalt (nMol/g Masse)=296.875×ΔA Messung÷ΔA-Norm÷W=1187,5nMol/g Masse.

Referenzen:

[1] Senna R, Simonin V, Silva-Neto M A C, et al. Induktion der Säurephosphatase-Aktivität während der Keimung von Mais (Zea mays) Samen. [J]. Pflanzenphysiologie und Biochemie, 2006, 44(7-9):467-473.

[2] Iqbal T H, Lewis K O, Cooper B T. Phytase-Aktivität im Dünndarm von Menschen und Ratten [J]. Gut, 1994, 35(9):1233-1236.

[3] Azeke M A, Egielewa S J, Ihimire E. Auswirkungen der Keimung auf die Phytase-Aktivität, Phytat und den Gesamtphosphorgehalt von Reis (Oryza sativa), Mais (Zea mays), Hirse (Panicum miliaceum), Sorghum (Sorghum bicolor) und Weizen (Triticum aestivum) [J]. Journal für Lebensmittelwissenschaft und Technologie, 2011.

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