Alpha-Ketopentadioxiddehydrogenase-Aktivitätstest-Kit Spurmethode

α-Ketopentasedehydrogenase (α-KGDHAktivitätsprüfkit Anleitung
Spurmethode
Hinweis: Das Reagenz dieses Produkts hat sich geändert, beachten Sie bitte und befolgen Sie strikt die Anleitung.
Warennummer：BC0715
Spezifikation：100T/96S
Produktzusammensetzung: Bitte überprüfen Sie vor der Verwendung sorgfältig, ob das Volumen des Reagents mit dem Volumen in der Flasche übereinstimmt. Bei Fragen wenden Sie sich bitte unverzüglich an das Personal von Solebar.

Zubereitung der Lösung:

1. Reagenz 2: als flüchtiges Reagenz, so schnell wie möglich nach dem Gebrauch versiegelt, -20 ° C aufbewahrt;

2. Reagenz 5: Nehmen Sie vor der Anwendung 1 Reagenz 5, fügen Sie1ml Reagenz 3, vollständig gelöst, unvollständiges Reagenz2-8℃speichern4Woche;

3. Reagenz 6: Nehmen Sie vor der Anwendung 1 Reagenz 6, fügen Sie1.5ml Reagenz 3, vollständig gelöst, unvollständiges Reagenz-20°C Aufbewahrung4Wochen, vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren;

4. Reagenz 7: Nehmen Sie vor der Anwendung 1 Reagenz 7, fügen Sie1ml Reagenz 3, vollständig gelöst, unvollständiges Reagenz-20°C Aufbewahrung4Wochen, vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen (1 Pulver kann nach der Auflösung gemacht werden)100TUm die Nutzungsdauer zu verlängern, wird dieses Produkt1Pulver);

5. Reagenz 8: Nehmen Sie vor der Anwendung 1 Reagenz 8, fügen Sie0,4 mlDestillationswasser, vollständig gelöst, unvollständige Reagenzien-20℃Aufteilung speichern4Wochen, vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren;

6. Zubereitung der Arbeitsflüssigkeit: 8,05 vor der Anwendungml Reagenz 3,0.2 mLReagenzien 4, 1mLReagenz V, 1,25mLReagenz 6, 0,5mLReagenz 7(insgesamt)11mLEtwa.55T）Vollständig gemischt, jetzt verfügbar.

Produktbeschreibung:
α-KGDH（EC 1.2.4.2(weit verbreitet in Mitochondrien von Tieren, Pflanzenmikroben und Kulturzellen, ist eines der Schlüsselenzyme für die Regulierung des Tricarbonsäurezyklus, die Katalyseα-Keto-Pentanodioxid-Decarboxylierung zur Erzeugung von Amberyl*A。
α-KGDHKatalyseα-Ketopentasäure,NAD⁺Cov * A erzeugt Amber Cov *AKohlendioxid undNADH，NADHin340 nmCharakteristische Absorptionsspitzen, umNADHGenerationsrate anzeigenα-KGDHAktivität.

Hinweis: Vor dem Experiment wird empfohlen, 2-3 Proben mit hohen erwarteten Unterschieden für das Vorexperiment auszuwählen. Wenn der Absorptionswert der Probe nicht im Messbereich liegt, wird eine Verdünnung oder Erhöhung der Probenmenge empfohlen.
Eigene Geräte und Zubehör:
UV-Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Wasserbad/Thermostat, Tischzentrifuge, verstellbarer Pipette, Spurenquartzschale/96LöcherUVPlatten, Platten/Absorber, Eis und destilliertes Wasser.
Betriebsschritte:Die spezifischen Betriebsschritte finden Sie im Anhang "Produktinformationen"

1. Alle Reagenzien und Proben werden während der Messung auf Eis platziert, um Deformationen und Inaktivierungen zu vermeiden.

2. Die Temperatur der Reaktionsflüssigkeit muss 37 ° C bleiben oder25℃Nehmen Sie einen kleinen Becher mit einer bestimmten Menge.37℃oder25℃Destillen Sie Wasser und geben Sie diesen Becher in37℃oder25℃In der Badewanne. Beim Reaktionsprozess wird die Biserickschale zusammen mit der Reaktionsflüssigkeit in diesen Becher gelegt.

3. Es ist am besten, dass zwei Personen dieses Experiment gleichzeitig durchführen, eine Person vergleicht die Farbe und eine Person zählt, um die Genauigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten.

4. MessrohreΔAWert in0.01-0.25Zwischen, wenn die MessungΔAWert größer als0.25Die Probe muss verdünnt werden.

5. Da der Extrakt eine gewisse Proteinkonzentration enthält (ca. 1 mg/ml), muss der Proteingehalt des Extrakts selbst bei der Messung der Proteinkonzentration in der Probe subtrahiert werden.

Experimentelle Beispiele:

1. Nehmen Sie 0,1 g Gras für die ProbenbehandlungEs wird nach zweimaler Verdünnung aufgenommen.Befolgen Sie die Messschritte und messen Sie mit Spuren-QuarzschalenberechnenΔAMessung=A4-A3=0.3243-0.3115=0.0128，ΔALeer=A2-A1=0，Berechnung des Enzymlebens nach Probenmasse:

α-KGDHAktivität(U/g Masse)= 1488,5×(ΔA)Messung-ΔALeer÷W×2(Verdünnung mehrfach)=381.056 U/gQualität.

1. Nehmen Sie 0,1 g Mausleber für die Probenbehandlung,4 ℃ 11000g Zentrifuge10 MinutenNehmen Sie nachBefolgen Sie die Messschritte und messen Sie mit Spuren-QuarzschalenberechnenΔAMessung=A4-A3=1.2123-0.9623=0.2500，ΔALeer=A2-A1=0，Berechnung des Enzymlebens nach Probenmasse:

α-KGDHAktivität(U/g Masse)= 1488,5×(ΔA)Messung-ΔALeer÷W = 3721,25 U/gQualität.
Verwandte Publikationen:

1. Jianyun Yue, Changjian Du, Jing Ji et al. Hemmung von α-Ketoglutarat-Dehydrogenase-Aktivität beeinflusst das adventiöse Wurzelwachstum in Poppel über Änderungen in GABA-Shunt. Planta. Juli 2018; (IF3.06)

2. Xiao Li, Qi Zhao, Jianni Qi, et al. lncRNA Ftx fördert aerobe Glykolyse und Tumorprogression durch den PPARγ-Weg bei Hepatozellulärem Karzinom. Internationales Journal der Onkologie. Mai 2018; (IF3.571)

Referenzen:
Park L C H, Calingasan N Y, Sheu K F R, et al. Quantitative α-Ketoglutarat Dehydrogenase Aktivität Färbung in Gehirnabschnitten und in kultivierten Zellen [J]. Analytische Biochemie, 2000, 277(1): 86-93.
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