Butylchol* Esterase-Inhibitor-Aktivität-Test-Kit

Butylchol*-Esterase-Inhibitor-Aktivität-Test-Kit-Anleitung

Sichtbare Spektrophotometrie

Artikelnummer:BC5980

Spezifikationen:50T/48S

Produktzusammensetzung: Bitte überprüfen Sie vor der Verwendung sorgfältig, ob das Volumen des Reagents mit dem Volumen in der Flasche übereinstimmt. Bei Fragen wenden Sie sich bitte unverzüglich an das Personal von Solebar.

Zubereitung der Lösung:

1. Reagenz 1: Nehmen Sie vor der Anwendung 1 Reagenz 1, fügen Sie1,8 mlDestillationswasser, vollständig gelöst, unvollständige Reagenzien-20℃Nach der Aufteilung speicherbar4Vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen (das Reagenz ist ein Gefriertrocknermittel, es kann ein Phänomen geben, das eine große oder sogar eine kleine Menge von Dosen zwischen verschiedenen Flaschen mit bloßem Auge beobachtet, das Phänomen beeinflusst nicht die Verwendung, die tatsächliche Qualität ist die gleiche).

Reagenz 4: 17 ml Reagenz 2 vor der Anwendung hinzugefügt, vollständig gelöst, unvollständiges Reagenz-20℃Aufteilbar speichern4Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren.

3. Reagenz V: 10 mmol / L klare Lösung von Levians. Nehmen Sie vor der Anwendung 15 μL 10 mmol / L Levianz, 985 hinzufügenμLDestillationswasser, hergestellt0.15mmol/L der klaren Lösung von Levens, die jetzt verfügbar ist (dieses Reagenz wird für positive Röhrenversuche verwendet, ausgewählt).

Produktbeschreibung:

Butyrylcholinesterase,BchE，EC3.1.1.8(auch bekannt als Plasma-Galle-Esterase, Pseudo-Galle-Esterase, ist eine Seidensäurehydrolyse, die nach der Synthese durch die Leber in den Blut gelangt und in fast allen Tiergeweben vorhanden ist. mit Acetylcholesterase (AchEim Vergleich,BchEEs kann effektiv größere Gallester, wie Butanylgol* und Benzoylgol*, hydrolysieren und die giftigen Wirkungen von Organophosphor-Pestiziden, Aminomethanester-Pestiziden und anderen Nervengiftstoffen beseitigen. Studien zeigen,BchEkann als wichtiges Ziel für die Behandlung der Alzheimer-Krankheit,BchEInhibitoren werden verwendet, um Symptome wie Gedächtnisverlust und kognitive Dysfunktion bei Alzheimer-Patienten zu verbessern.

BchE katalysiert Butylgall* durch Hydrolyse zur Produktion von Galle*, Galle* durch Wirkung von Dithiodinitrobenzonsäure (DTNB)5-Basis-NitrobenzonsäureTNB），BchEInhibitoren durch UnterdrückungBchEWirksamkeit, reduziert die Hydrolyse von Butylgall *.TNBin412nmAbsorptionsspitze, die durch Messung bestimmt werden können412nmVeränderungen der lokalen Absorption, Berechnung der Aktivität des BchE-Inhibitors.

Hinweis: Vor dem Experiment wird empfohlen, 2-3 Proben mit hohen erwarteten Unterschieden für das Vorexperiment auszuwählen.

Eigene Geräte und Zubehör:

Sichtbares Spektrophotometer, Waage, Ofen, Zerkleinerer/Absorber,30-50Augensieb, Ultraschallreiniger, Zentrifuge, Wasserwanne/Thermostatische Kühlkammer,1 mlGlasschalen, einstellbare Pipette, Eis und destilliertes Wasser.

Bedienungsschritte: Die spezifischen Bedienungsschritte finden Sie im Dokument "Produktprofil"

Hinweis:

Um die Genauigkeit und Stabilität der Experimentergebnisse zu gewährleisten, kontrollieren Sie bitte die Reaktionszeit und die Betriebszeit streng.

2. Probenabsorption A’_Messunggrößer als 1,5 oderΔA_MessungAnnähernΔA_LeerEs wird empfohlen, den Gewebeprobenverhältnis während der Probenbehandlungsschritte zu erhöhen oder die Pulverprobe zu einer höheren Konzentration der Lösung zu verarbeiten. WennΔA_MessungBei weniger als 0,01 kann die Probe mit Extraktflüssigkeit verdünnt und dann bestimmt werden.

3. Für den Vergleich der BchE-Hemmung durch verschiedene Reagenzien, Extrakte, Arzneimittel oder Gewebe muss eine homogene Mischung von Reagenzien, Extrakten, Arzneimitteln oder Gewebe in der gleichen Konzentration verglichen werden.

Experimentelle Beispiele:

1. Nehmen Sie 0,1005g Fruchtschaltprobe (getrocknet) und fügen Sie1 mlExtrahieren Sie die Flüssigkeit für die Ultraschallextraktion, entfernen Sie die Flüssigkeit nach der Zentrifuge, folgen Sie den Messschritten und verwenden Sie1 mlBerechnung der Glasmessung:ΔA_Leer=（A“_{Leere 1}-A_{Leere 1}）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_Messung=（A“_Messung-A_Messung）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（1.117-0.485）-（0.166-0.112）=0.578Berechnen Sie die Unterdrückungsrate:

BchE-Inhibitoren (%）=（1.113-0.578）÷1.113×100%=48.068%。

2. Nehmen Sie eine Probe von 0,1014g Tomatoschalt (getrocknet) und fügen Sie1 mlExtraktion durch Ultraschall, Entfernung und Verdünnung16Folgen Sie den Messschritten, mit1 mlBerechnung der Glasmessung:ΔA_Leer=（A“_{Leere 1}-A_{Leere 1}）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_Messung=（A“_Messung-A_Messung）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（0.706-0.149）-（0.166-0.112）=0.503Berechnen Sie die Unterdrückungsrate:

BchE-Inhibitoren (%）=（1.113-0.503）÷1.113×100%=54.807%。

3. Nehmen Sie eine klare Lösung von 50 μL 0,15 mmol / L Levans, folgen Sie den Messschritten und verwenden1 mlBerechnung der Glasmessung:ΔA_Leer=（A“_{Leere 1}-A_{Leere 1}）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（1.372-0.205）-（0.166-0.112）=1.113，ΔA_Messung=（A“_Messung-A_Messung）-（A“_{Leere 2}-A_{Leere 2}）=（0.838-0.171）-（0.166-0.112）=0.613Berechnen Sie die Unterdrückungsrate:

BchE-Inhibitoren (%）=（1.113-0.613）÷1.113×100%=44.924%。

Referenzen:

[1] Ellman GL, Courtney KD, Andres V Jr. et al. Eine neue und schnelle colorimetrische Bestimmung der Acetylcholinesterase-Aktivität [J]. Biochemische Pharmakologie, 1961, 7(2): 88-95.

[2] Noor Atatreh, Sara Al Rawashdah, Scheikha S Al Neyadi. Entdeckung neuer Butyrylcholinesterase-Inhibitoren durch strukturbasiertes virtuelles Screening [J]. Journal of Enzyme Inhibition and Medicinal Chemistry, 2019, 34(1): 1373-1379.

[3] Li Q, Chen Y, Xing S. et al. Hochwirksame und selektive Butyrylcholinesterase-Inhibitoren für kognitive Verbesserung und Neuroprotektion [J]. Journal of Medicinal Chemistry, 2021, 64(10): 6856-6876.

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