Polypeptidsynthese und Modifikationstechnik

Die Polypeptidsynthese ist eine Festphasensynthese-Reihenfolge, die in der Regel vom C-Ende (Carboxyl-Ende) zum N-Ende (Amino-Ende) synthetisiert wird. In der Vergangenheit wurde die Polypeptidsynthese in einer Lösung durchgeführt, die als flüssige Phasensynthese bezeichnet wurde. Seit der erfolgreichen Entwicklung der Polypeptidsynthese in fester Phase von Merrifield im Jahr 1963 hat sich die Methode ständig verbessert und* bis heute zu einer häufig verwendeten Technik in der Polypeptid- und Proteinsynthese entwickelt, die die Vorteile der klassischen Flüssigsynthese* demonstriert und dadurch die Schwierigkeiten der Produktreinigung in jedem Schritt erheblich erleichtert. Polypeptidsynthese ist im Allgemeinen in zwei Arten unterteilt: Festphasensynthese und Flüssigphasenpolypeptidsynthese.

Technische Prinzipien des Experiments:

Polypeptidsynthesizer mit fester Phase als Reaktionsprinzip, in einem geschlossenen explosionssicheren Glasreaktor, so dass Aminosäuren in der bekannten Reihenfolge (Sequenz, in der Regel vom C-End-Carboxyl-Ende zum N-End-Amino-Ende) ständig hinzugefügt, reagiert, synthetisiert und am Ende der Operation Polypeptidträger erhalten. Die Festphasensynthese erleichtert die Schwierigkeit der Produktreinigung in jedem Schritt erheblich. Um Nebenreaktionen zu verhindern, sind die Seitenketten der Aminosäuren, die an der Reaktion teilnehmen, geschützt. Das Carboxyl-Ende ist frei und muss vor der Reaktion aktiviert werden.

Experimentelle Betriebsprozesse:

1, Entschützung: Die Säulen und Monomere, die von Fmoc geschützt werden, müssen die Amino-Schutzgruppen mit einem alkalischen Lösungsmittel (Piperidin) entfernen.

Aktivierung und Vernetzung: Das Carboxyl der nächsten Aminosäure wird durch ein Aktivierungsmittel aktiviert. Aktivierte Monomere werden mit freien Aminoreaktionen zu Peptiden verknüpft

Schlüssel. In diesem Schritt wird die Reaktion mit einer großen Menge an Überkonzentrationsreagenzien abgeschlossen. Zyklus: Diese zweistufigen Reaktionen werden wiederholt, bis die Synthese abgeschlossen ist.

Waschen und Entschützen: Das Polypeptid wird von der Säule entfernt und seine Schutzgruppe wird durch ein Entschützungsmittel (TFA) gespült und entschützt.

Typ der Peptidenmodifikation:

C-End-Markierungstechnologie:

C-Terminalisierung (Amidation)

Aldehyde, Alkohole, pNA (P-Nitroanilide)

AMC、AFC、 Cysteamid, Ester und N-Alkylamide

2, N-End-Markierungstechnologie:

Acetylierung Acetyliert (Acetyliert), Palmytolyl, HYNIC, Biotin-Marker (Biotinyliert), Br-Acetylierung (Bromoacetyliert)

Chelationsreaktion (DOTA, DTPA konjugiert), Formaldehydierung (Formyliert), 14alkyl, 18alkyl (Myristoyliert), Bernstein-Acylierung, Palmitsäuerung, Apfelsäuerung, Fettsäuerung usw. (Succinyliert)

3, fluoreszierende Markierungsmodifikation:

C-End-Modifikationen: AFC, AMC, Dap(Dnp), Lys(Dye), pNA, Rh110

N端修饰: Bodipy-FL, Cy3, Cy5, Texas Red, 5-Tamra, 5-OdoacetamidofluoresceinRhodamin 110 und Rhodamin B Luciferin, EDANS

FAM, FITC, MCA, Rox, Sulforhodamin 101, 5-TAMRA

4. Kreislaufreaktion:

Zwischenring, Spezialring (N -> C oder Head to Tail)

2 Paare 2-Schwefelbindungen, 3 Paare 2-Schwefelbindungen (Disulfid (S-S-Bindungsbildung) Triulidbildung) Natürliche Produkte Aktive Peptide (Cyclic-natural Peptides)

5. Methylierungsmodifikation:

Seitenkettenmethylierung Lys(For),LysS(Me), Lys(Me)2, Lys(Me)3, Arg(Me)2 symmetrical, D-Tyr(Me),D-Tyr(Et)N Endmethylierung (N-Me Arg, N-Me-Asp, N-Me-Glu, N-Me-Leu, N-Me-Nle, N-Me-Nva, N-Me-Phe, N-Me-S N-

Me-Ser, N-Me-Trp, N-Me-Thr, N-Me-Val)

Mehrere spezielle Modifikationen:

各种偶联(BSA, KL H konjugierte Peptide für die Antikörperproduktion), Phosphacidierung (Phosphoserin, Phosphothreonin, Phosphotyrosin), Sulfurierung (Sulfated Tyrosin oder Serin), MAPS (MultipleAntigenic Peptide), Glykopeptide (Glycopeptides) PEG-Modifikation (PEGylation)

Experimentale Hinweise:

Kunden bieten:

Polypeptidsequenz, Menge, Reinheit und besondere Anforderungen

Gefriertrocknete Polypeptide können bei -20 Grad oder Raumtemperatur aufbewahrt werden

Die Lösung Peptide ist weit instabil als die Gefriertrocknenform, die Lösung sollte für neutralen PH (5-7) -20 Grad erhalten werden.

Um wiederholtes Einfrieren der Probe zu vermeiden,HaoAufteilung in kleine Stücke.

Lieferstandard:

Polypeptide, Daten.

Sonstiges:

Die meisten PeptideXuanDas Lösungsmittel ist ultrareines Pumpwasser, und verdünnte Z-Säure oder Ammoniak sind auch hilfreich bei der Lösung alkalischer oder saurer Polypeptide. Wenn nach Anwendung dieser Methoden noch nicht gelöste Polypeptide verwendet werden, wird empfohlen, sie mit DMF, Harnstoff, Guanidiniam, Chlorid und Acetoninle zu lösen.

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