iTRAQ TMT (Isotopmarking Quantification)

Isotope Kennzeichnung Quantifizierung:

iTRAQ (isobaric Tags for Relative and Absolute Quantitation) &TMT (Tandem Mass Tags) In vitro-Polypeptid-Marking-Quantitationstechnik, entwickelt von AB Sciex und Thermo, verwendet mehrere Isotope-Reagentien zur Markierung von Protein-Polypeptid-N-Enden oder Lysin-Seitenkettengruppen, die mit Reagentien mit unterschiedlichem Molekulargewicht Proben aus verschiedenen Quellen markieren, um einen Proteomovergleich zwischen verschiedenen Proben zu ermöglichen.

Schritte des iTRAQ-Experiments:

1. Probenvorbereitung: Die Probe wird quantitativ berechnet, um die Proteinkonzentration der Probe zu berechnen;

2. Proteinreduktions-Alkylierung und Enzymolyse: jede Gruppe von Proben nimmt 100 μg gemäß den Anforderungen des iTRAQ-Kits und verarbeitet sie mit einer sequenzierten Panprotease-Lösung nach der Enzymolyse und sammelt die Enzymolyse-Segmente durch Ultrafilter-Zentrifuge;

3. iTRAQ-Markierung: ITRAQ-Reagenz auf Raumtemperatur ausgeglichen, mit 150 μL Isopropanol gelöst, das Enzymolytpeptid-Segment entnommen, das iTRAQ-Reagenz 2 h nach der Raumtemperatur-Reaktion hinzugefügt hat, die Wasser-Endreaktion hinzugefügt hat, verschiedene Probengruppen in gleicher Menge vermischt und die Probe im Vakuum gefriergetrocknet hat:

LC-MS-MS Analyse: Serienspektrometrie mit Thermos Q-Exactive Orbitrap.

5. Datenverarbeitung und Nachrichtenanalyse

Die Ergebnisse zeigen:

AlleBüroAnalyse von Cluster-Wärmekarten

* Statistische Analyse der Proteinanzahl von 0

Versuchszyklus und Lieferstandards

1. Versuchszeitraum: 4-6 Wochen

2. Lieferkriterien: Quantifizierungsergebnisse von Proteinen, Identifizierungsergebnisse, Rohdaten des Massenspektrums, Ergebnisse der lebendigen Analyse (G0-Analyse). KEGG Analyse usw.)

Bestätigungsbedürftige Informationen

1. Arten der Probe

Typ der Probe (Gewebe oder Zellen oder Blut)

Anzahl und Gruppierung der Proben

4. Analyse der Anforderungen

Referenzen

XuX, Zhu Q, Zhang R, et al. ITRAQ-basierte Proteomik-Analyse der akuten Lungenverletzung, die durch Oleinsäure in

Mäuse[J]. Zellphysiologie und Biochemie, 2017: 1949-1964.

QuZ, GaoF, LiL, et al. Label-Free Quatitative Proteomic Analysis of Differentially Expressed Membrane Proteins [2]

von Lungen Alveolar Makrophagen mit hochpathogenem Schweinereproduktivem und Atemwegssyndrom infiziert

Virus und seine abgeschwächte Stamm [J]. PROTEOMICS, 2017:1700101.

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