Geruchsrezeptor AI1 Antikörper

Vorbereitungsprozess für Antikörper:

1. Materialien und Reagenzien

Extrahiertes Tier Ig

b. Frissors und Frissors

d) Versuchstiere Kaninchen

e. Andere Materialien und Reagenzien

2. Auswahl des Experiments.

3. Durchführung von Tierimmunversuchen.

Versuchen Sie Blutproben zu testen, um die Immuneffekte zu überprüfen.

Wenn die Immunisierung erfolgreich ist, töten Sie das Experiment und sammeln Sie das gesamte Serum.

6. Reinigen Sie Antikörper.

7. Identifizierung von Antikörpern. Rinderserum (sterile Herstellung)
Einzelheiten:

Englischer Name:Orai1

Englischer AliasKalziumfreies reaktiviertes Kalziumkanalprotein1; Calciumfreier reaktivierter Calciummodulator1; Kalziumfreißend aktiviertes Kalziumkanalprotein1; CRACM1; CRACM1; CRCM1; CRCM1_HUMAN; FLJ14466; Orai1; ORA Calcium Release aktivierter Calciummodulator 1; orai1; ORAT1; Proteinorai1; Proteinorai-1; TMEM142A; TMEM142A; Transmembranprotein 142A.

Kreuzreaktionen: Mensch, Maus, Ratte, Hund, Schwein, Kuh, Pferd, Kaninchen, Schafe

Markierungen: Unkonjugiert

Antikörperquellen: Kaninchen

Antikörper Typ: Polyklonale

Immunogen: KLHkonjugierte synthetische Peptide von menschlichem Orai1

Positionierung der Proteinzellen: Zellmembran

Reinigungsmethode:Affinitätsreinigt von ProteinA

UntertypFolgendes:IgG

Eigenschaften: Flüssigkeit

Konzentration: 1mg / ml

Lagerflüssigkeit0,01 MTBS (pH7,4) mit 1 % BSA, 0,03 % Proclin 300 und 50 % Glycerin.

Speicherbedingungen: Shippedat4 ℃. Lagern Sie bei -20°C. Vermeiden Sie wiedergefrierte / auftauende Zyklen.
Produkte des Unternehmens nur für wissenschaftliche Zwecke
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Betriebsschritte:

1. Entwachsen und Hydrieren. Die Paraffinscheiben in frischer Diphenilantierung 15 Minuten lang einweichen und dreimal wiederholen. Nach Entfernen der überschüssigen Flüssigkeit in wasserlosem Ethanol, 95% Ethanol, 90% Ethanol, 80% Ethanol und 70% Ethanol versetzt, jeweils 5 Minuten eingeweicht und 5 Minuten mit destilliertem Wasser (oder Leitungswasser) gespült. Spülen Sie die Scheiben 5 Minuten lang mit PBS-Puffer (Reagenz 1, Trockenpulver in 1 L deionisiertem Wasser auflösen) und wiederholen Sie dies dreimal.

Antigen Reparatur. Setzen Sie die Gewebeschneide nach dem Entwachsen in den Becher (oder in der Reparaturkosten) auf den Hochtemperatur-beständigen Kunststoffschneiderrag, fügen Sie die angemessene Menge an Reparaturflüssigkeit 1 x Natriumcitrat-Antigen-Reparaturflüssigkeit hinzu (Reagenz 2, 100 x Natriumcitrat-Antigen-Reparaturflüssigkeit mit deionischem Wasser in 1 x Natriumcitrat-Antigen-Reparaturflüssigkeit verdünnen), die Flüssigkeit muss in einer bestimmten Höhe über das Gewebeschneide eintauchen, legen Sie die Reparaturkosten in kochendem Wasser und kochen Sie die Folie nach 15 Minuten ab und kühlen Sie sie natürlich auf Raumtemperatur. Spülen Sie die Schnitte 5 Minuten lang mit PBS-Puffer und wiederholen Sie dies dreimal.

AchtungBei der Reparatur von Antigenen ist es wichtig, dass die Reparaturflüssigkeit sicherstellt, dass die Schnitte immer in der Flüssigkeit eingeweicht sind, allgemeine Bedingungen: Die Menge der Reparaturflüssigkeit beträgt etwa 800 mL / 1 Stück.
3. Endogene Peroxidase blockieren. Trocknen Sie die Gläser mit dem Absorptionspapier, kreisen Sie den Immunokompositionsstift um das Gewebe, tropfen Sie 50 μL endogene Peroxidase-Blocker (Reagenz 3) auf das Schnittgewebe, um die endogene Peroxidase zu blockieren, inkubieren Sie 30 Minuten bei Raumtemperatur und spülen Sie die Schnitte 5 Minuten lang mit PBS-Puffer und wiederholen Sie dies dreimal.

Serum geschlossen. Trocknen Sie die Gläser mit Absorptionspapier, tropfen Sie 50 μL normales Ziegenserum Arbeitsflüssigkeit (Reagenz 5), 37 ° C geschlossen für 20 Minuten, um nicht

Spezifische Färbung.

5. Widerstand gegen Inkubation. Verdünnen Sie ein Antigen in eine Arbeitsflüssigkeit mit Antikörper-Verdünnung (Reagenz 4), trocknen Sie die Flüssigkeit um das Glasgewebe mit Absorbierpapier, tropfen Sie die angemessene Menge an Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzu und legen Sie es in eine nasse Box, um über Nacht bei 4 ° C oder bei 37 ° C zu inkubieren, um 1 h-2 h zu inkubieren.

6. Wiederherstellung. Nehmen Sie die Probe nach 4 ° C über Nacht aus dem Kühlschrank und inkubieren Sie bei Raumtemperatur für 15 min auf Wiederherzung (Antikörper-Inkubation für 4 ° C über Nacht wählen Sie diesen Schritt, wie Raumtemperatur-Inkubation direkt zum nächsten Reinigungsschritt). Spülen Sie die Schnitte 5 Minuten lang mit PBS-Puffer und wiederholen Sie dies dreimal.

7. Zweite Inkubation. Absorptionspapier trocknen Scheiben nach 50 μL markiert Schaf Anti-Kaninchen IgG (Reagenz 6) tropfen, 37 ° C inkubieren für 20 Minuten mit PBS

PufferspülschnitteFünf Minuten und dreimal wiederholen.

8. Anti-Inkubation. Absorptionspapier trocknet die Schnitte nach 50 μL Moringa-markierte Ketoenase-Ovalin-Inkubation (Reagenz 7), 37 ° C-Inkubation für 20 Minuten, Spülen Sie die Schnitte für 5 Minuten mit PBS-Puffer und wiederholen Sie dreimal.

9. Farbgebung. Entfernen Sie den PBS-Puffer und trocknen Sie das Absorbierpapier; Zu jedem Scheibentropfen fügen Sie 50 μL frisch zubereitete DAB-Arbeitsflüssigkeit hinzu (Reagenz 8: Reagenz 9: Reagenz 1 = 1: 1: 18 Verhältnis), inkubieren Sie 3-5 min, beobachten Sie die Färbungsergebnisse unter einem optischen Mikroskop und zeigen Sie nie zu tief; Spülen Sie die Scheibe nach der Darstellung mit Leitungswasser, um die Darstellung zu beenden.

10. Wiederinfektion. Tropfen Sie eine angemessene Menge Sumucin-Flüssigkeit (Reagenz 10) zur Wiederinfizierung hinzu, inkubieren Sie 1-5 Minuten, spülen Sie 5 Minuten mit Leitungswasser und tropfen Sie die Differenzierung von Salzsäure-Alkohol hinzu

Flüssigkeitsdifferenzierung30 Sekunden, Wasser spülen.

11. Dehydrationsversiegelung. Legen Sie die Folien in 70% Ethanol, 80% Ethanol, 90% Ethanol, 95% Ethanol, wasserloses Ethanol, jede 5 Minuten einweichen, dann legen Sie die Folien in Dimethylen einweichen für 15 Minuten und wiederholen Sie dreimal. Die Folien werden etwas getrocknet und mit einem neutralen Klebstoff verschlossen.

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