Nukleinsäureextraktor

TriZol GesamtRNA-Extraktionsreagens

Produktnummer:R1000

Lagerbedingungen:TriZol Total RNA ExtraktionsreagensEs kann 12 Monate lang bei Raumtemperatur stabil gelagert werden.Wir empfehlen die AufbewahrungIn einer Umgebung von 2-8°C.

Wichtige Hinweise:

Dieses Produkt enthält Phenole, die giftig und korrosiv sind. Wenn Sie in den Körper inhalieren, die Haut berühren, schlucken usw. können Vergiftungen, Verbrennungen und andere körperliche Verletzungen verursachen. Bei der Verwendung dieses Produkts sollten Sie Schutzgegenstände wie Handschuhe, Augenbekleidungen, Masken etc. tragen. Wenn Sie es nicht vorsichtig berühren, sollten Sie es sofort mit viel Wasser spülen und ins Krankenhaus behandeln.

Produktbeschreibung:

TriZol GesamtRNA-ExtraktionsreagensEs ist ein breitspektriges GesamtRNA-Extraktionsreagens. Der experimentelle Betrieb ist schnell und einfach, die Farben sind klar und leicht zu schichten. Dieses Reagenz ist vielfältig anwendbar und kann GesamtRNA aus Proben wie tierischem Gewebe, pflanzlichem Material, verschiedenen Mikroorganismen und Kulturzellen extrahieren. Diese Methode hat eine bessere Isolationswirkung bei kleinen Mengen an Gewebe (50-100 mg) und Zellen (5 x 106) sowie bei großen Mengen an Gewebe (≥1 g) und Zellen (> 107). Die Probe wird vollständig in TriZol Total RNA Extraktionsreagens geklatzt, um gleichzeitig die RNA-Integrität so gut wie möglich zu gewährleisten. Nach Zugabe der Chloroform-Zentrifuge wird die Lösung in drei Schichten aufgeteilt: die obere farblose Wasserphase, die mittlere Schicht und die untere rote organische Phase, in der sich die RNA in der oberen Klärschicht verteilt. Nach der Sammlung der Oberschicht kann die GesamtRNA durch Isopropanolabsetzung zurückgewonnen werden. Die gesamte RNA-Integrität der Extraktion ist gut, frei von Protein- und DNA-Verunreinigungen und kann für konventionelle Experimente in einer Vielzahl von Molekularbiologie verwendet werden, wie z.B. RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、 Übersetzung usw.

TriZol Total RNA Extraktionsreagens fördern die Analyse einer Vielzahl von RNA mit unterschiedlichen Molekulargewichten. Beispielsweise wurde durch die Elektrophoresis von RNA-Jongasegel aus der Leber von Ratten extrahiert und mit Ethidinbromid gefärbt, und viele nicht kontinuierliche Streifen mit hohem Molekulargewicht zwischen 7 kb und 15 kb (mRNA und hnRNA-Komponenten) mit zwei Vorteilsribosomen von ~ 5 kb (28S) und ~ 2 kb (18S) und niedrigem Molekulargewicht von RNA zwischen 0,1 und 0,3 kb (tRNA, 5S) gesehen. Wenn die extrahierte RNA mit TE verdünnt wurde, war ihr A260/A280-Verhältnis ≥1,8. Beachten Sie, wenn es sich um die gewöhnliche Gelelektrophoresis von Gonasose handelt, ist die Position von 28S bei etwa 2kb und 18S bei etwa 1kb, und die Gelposition in verschiedenen Konzentrationen variiert stark.

Hinweis:

1.Proben verwendenNach Homogenisierung des TriZol-GesamtRNA-Extraktionsreagens kann es länger als einen Monat bei -70 ° C gelagert werden, wenn es nicht unmittelbar vor der Zugabe von Chloroform erfolgt. Die RNA-Fällung in 75% Ethanol kann eine Woche bei 2-8 ° C und ein Jahr bei -20 ° C aufbewahrt werden. Die Halbwertszeit der RNA ist relativ kurz und leicht abbaubar, und es wird empfohlen, nachfolgende Experimente wie Reverse Transkription in cDNA, Northern Blot usw. so schnell wie möglich nach der Extraktion durchzuführen.

Wenn das Downstream-Experiment sehr empfindlich für DNA ist, wird empfohlen, die RNA mit RNase-freier DNase I zu verarbeiten.

3.Eigene Reagenzien: Chlorform, Isopropanol (Neu geöffnet oder extrahiertRNA-spezifisches), 75% Ethanol (mit DEPC behandeltes Wasser), RNase-freies oder DEPC behandeltes Wasser.

4. Das Unternehmen produziert TriZol Total RNA Extraktion Reagent von ausgezeichneter Qualität und kann das Trizol Reagent von Invitrogen ersetzen. Die Extraktionsqualität ist die gleiche wie im nachgelagerten Experiment *.

Schritte zur RNA-Extraktion: (Lesen Sie die Hinweise vor dem Experiment)

Hinweis:

verwendenTriZol Total RNA Extraktionsreagens tragen Handschuhe und Augenschutz bei der Extraktion von RNA. Vermeiden Sie Kontakt mit Haut und Kleidung. Der Betrieb wird in einem chemischen Ventilationsschrank abgeschlossen. Vermeiden Sie Atemwege. Ohne besondere Anweisungen sollte der gesamte Betrieb unter Raumtemperatur von 15 bis 30 ° C erfolgen.

1. Gleichmäßig

a. Pflanzengewebe:

Nehmen Sie frisches pflanzliches Gewebe in flüssigem Stickstoff ausreichend schleifen oder pflanzliches Gewebe direkt nach der ZerkleinerungTriZol GesamtRNA-ExtraktionsreagensIn einem schnellen Schleifen, fügen Sie 1 ml TriZol-GesamtRNA-Extraktionsreagens pro 50-100 mg Gewebe hinzu und mischen. Hinweis: Das Probenvolumen sollte in der Regel nicht mehr als 10% des Gesamtvolumens des TriZol-RNA-Extraktionsreagens überschreiten.

b. Tierorganisationen:

Frisch oder-70 ° C Gefrieren Tiergewebe möglichst schneiden, 1 ml TriZol GesamtRNA-Extraktionsreagens pro 30-100 mg Gewebe hinzufügen, Homogenizer zur Homogenisierung. Oder nach dem Mahlen in flüssigem Stickstoff mit 1 ml TriZol-GesamtRNA-Extraktionsreagens zu mischen. Hinweis: Das Probenvolumen sollte in der Regel nicht mehr als 10% des Gesamtvolumens des TriZol-RNA-Extraktionsreagens überschreiten.

c. Einzelschichtige Zellkultur:

Nach möglichst sauberer Entfernung der Restflüssigkeit direkt zum Durchmesser1 ml TriZol-GesamtRNA-Extraktionsreagens in eine 3,5 cm Platte zu überdecken und wiederholt blasen die spalteten Zellen. Die gewünschte TriZol-GesamtRNA-Extraktionsdosis (pro 10 cm2 plus 1 ml) wird anhand der Fläche der Platte und nicht anhand der Anzahl der Zellen bestimmt. Wenn die TriZol-GesamtRNA-Extraktionsdosis unzureichend ist, kann es zu einer Verunreinigung der DNA in der extrahierten RNA führen.

Hinweis:

Klebende Kulturzellen neigen dazu, nicht * aus der Kulturflasche (Schalen) zu fallen, was nicht bedeutet, dass sie nicht * geklitzt werden, zu diesem Zeitpunkt ist die Zellmembran tatsächlich * geöffnet und hat alle freigegebenRNA， Mach es weiter.

d. Zellsuspension:

Zentrifugal sammeln Sie Zellen. inDas TriZol Total RNA Extraktionsreagens wird wiederholt mit einer Pipette geschlagen, um die Zellen zu spalten. Alle 5 bis 10 x10⁶Tierische Zellen, Pflanzen oder Hefe Zellen oder 1 ml pro 1 x 107 Bakterien hinzugefügtTriZol GesamtRNA-ExtraktionsreagensDas Waschen der Zellen sollte vermieden werden, bevor das TriZol-Total-RNA-Extraktionsreagens hinzugefügt wird, da dies die Wahrscheinlichkeit der mRNA-Abbau erhöht. Das Brechen bestimmter Hefen und Bakterien kann den Einsatz eines Homogenizers erfordern.

F. Blut:

verwendenTriZol GesamtRNA-ExtraktionsreagensReagenz LS.

2.Die Homogenprobe wird nach starker Erschütterung unter Raumtemperatur platziert5 Minuten, um das Nukleosom* zu lösen.

3. Optionale Schritte:

inZentrifuge bei 4°C bei 12.000 U/min10 Minuten zentrifizieren und entfernen.

Wenn die Probe mehr Protein, Fett, Polyzucker oder Muskeln enthält, können die Knotenknoten der Pflanze zentrifugiert entfernt werden. Die Abfällung nach der Zentrifuge enthält Zellmembranen, Polysaccharide und ein hohes MolekulargewichtDNA， Es enthält RNA. Bei der Verarbeitung von Fettgewebeproben sollte die obere Schicht, in der eine große Menge an Fett entfernt werden. Nehmen Sie die geklärte homogene Lösung zum nächsten Schritt.

4.Jeder1 mlTriZol GesamtRNA-Extraktionsreagens0,2 ml Chlorform hinzufügen. Abdecken Sie den Schlauchdeckel fest, schütteln Sie ihn für 15 Sekunden und lassen Sie ihn für 2 bis 3 Minuten bei Raumtemperatur stehen.

5.inHochgeschwindigkeits-Gefrierzentrifuge bei 4°C bei 12.000 U/min für 10-15 Minuten. Die Mischung nach der Zentrifuge ist in drei Schichten unterteilt: die untere Schicht der roten Organophenolchloroform, die mittlere Schicht und die obere Schicht der farblosen Wasserprobe. RNA findet sich ohne Ausnahme in der Wasserschicht. Die Kapazität der Wasserprobenschicht beträgt etwa 50-60% der Gesamtkapazität des zugesetzten TriZol-RNA-Extraktionsreagens. (Die organische Schicht und die Zwischenschicht sind Proteine und DNA, wenn eine Extraktion erforderlich ist, wenden Sie sich bitte an uns, um die Extraktionsmethode zu beantragen.)

6.Die Wasserprobenschicht wird in ein sauberes Zentrifugerrohr übertragen und ein gleiches Volumen Isopropanol hinzugefügt. Umkehrt nach der Mischung auf Raumtemperatur platziert10 Minuten.

Die RNA-Fällung ist vor der Zentrifugation in der Regel nicht sichtbar, und nach der Zentrifugation entsteht eine gelförmige Fällung an der Röhrenseite und am Röhrenboden.

7.bei Raumtemperatur oder4°C 12.000 U/min Zentrifugieren für 10 Minuten und auflegen.

8.beitreten75% Ethanol Waschfällung. Jedes 1 ml TriZol-GesamtRNA-Extraktionsreagens wird mit 1 ml 75% Ethanol gewaschen.

9.bei Raumtemperatur oderZentrifugieren Sie bei 4 ° C bei 12.000 U/min für 3 Minuten und legen Sie die Reinigung auf, achten Sie darauf, dass die RNA-Fällung nicht verloren geht.

Hinweis: Die verbleibende kleine Flüssigkeit kann kurzzeitig zentrifugiert werden und dann mit dem Pistolenkopf abgesaugt werden, achten Sie darauf, dass die Niederlage nicht abgesaugt wird.

10.Raumtemperatur2-3 Minuten trocknen. Fügen Sie 30-100 μl RNase-freies Wasser hinzu, lösen Sie die RNA vollständig auf und bewahren Sie die erhaltene RNA bei -70 ° C, um den Abbau zu verhindern.

Hinweis: Die verbleibende kleine Flüssigkeit kann kurzzeitig zentrifugiert werden und dann mit dem Pistolenkopf abgesaugt werden, achten Sie darauf, dass die Niederlage nicht abgesaugt wird.