Maus Interleukin-1aELISA Kit

Maus Interleukin-1aELISA Kit

Hintergrund:

IL-1 gibt es zwei verschiedene molekulare Formen, eine IL-1α, die aus 159 Aminosäuren besteht; Eine andere, bekannt als IL-1β, enthält 153 Aminosäuren; Beide werden durch verschiedene Gene codiert. Das IL-1-Gen von Menschen und Mäusen befindet sich auf Chromosom 2 und enthält beide sieben Exotrone. Der IL-1-Vorläufer (ProIL-1) beträgt 31 kDa und bildet durch Proteinhydrolyse-Lyse ein reifes IL-1-Molekül. IL-1 hat eine hohe Homogenität in verschiedenen Gattungen. Im Hinblick auf die Aminosäurenebene sind IL-1α und IL-1β in verschiedenen Gattungen 60-70% und 75-78% homogen. Allerdings ist IL-1α in der gleichen Gattung nur zu 25% homogen mit IL-1β. IL-1α und IL-1β Molekulargewichte von etwa 17,5 kDa, Isopunkte von 5 und 7, Homogenität von 28%, IL-1α und IL-1β binden sich mit der gleichen Affinität an die gleichen.ZelloberflächeRezeptoren spielen die gleiche biologische Rolle.

Prüfprinzip：

Solarbio (Solarbio ®)Das ELISA-Kit verwendet eine enzymbundene Immunabsorptionsdetektionstechnik auf der Grundlage der Dual Antibody Clamping Methode. Anti-Maus-IL-1a monoklonale Antikörper Pakete auf enzymatische Marker; Hinzufügen eines gradient verdünnten Standards und einer vorverdünnten Probe jeweils, wird IL-1a in den Standards und der Probe von Mäusen vollständig an das Paket auf der Enzymmarker durch Antikörper gebunden werden; Nach dem Waschen der Platte wird ein biotinierter Anti-IL-1a-Antikörper von Mäusen hinzugefügt, der spezifisch an das von den Antikörpern gefangene Standardprodukt und die Maus-IL-1a-Probe in der Platte gebunden wird; Nach dem Waschen der Platte wird das Kettenschimmel-Homopin, das mit der Moringa-Peroxidase (HRP) gekennzeichnet ist, hinzugefügt, und das Biotin und das Kettenschimmel-Homopin werden eine hohe Intensität der nicht-kovalenten Bindung auftreten; Nach dem Waschen der Platte wird das Farbstoff-Substrat TMB hinzugefügt, wenn die Probe unterschiedliche Konzentrationen von Maus-IL-1a in dem Reaktionsloch vorhanden ist, wird HRP farbloses TMB in eine andere tiefe Licht (positiv korrelierend) blaue Substanz verwandeln, und das Reaktionsloch wird gelb nach der Zugabe der Terminationsflüssigkeit; Bei λmax = 450 Messung der Absorptionsfähigkeit (OD) der Reaktionslochprobe bei nm (OD = 450 nm), wobei die IL-1a-Konzentration von Mäusen in der Probe in direktem Verhältnis zu der OD ist, kann die Konzentration von IL-1a von Mäusen in der Probe durch Zeichnung einer Standardkurve und einer Vierparameteranpassungssoftware berechnet werden.

Grundsatzdiagramm:

Hinweis:※※※

• Die Kits sollten während der Gültigkeitsdauer verwendet werden, bitte verwenden Sie keine abgelaufenen Reagenzien.
• Wenn die Kit nicht verwendet wird, sollte sie in einem Kühlschrank von 2-8 ° C aufbewahrt werden, die wiedergelösten, aber nicht verbrauchten Standardprodukte, bitte wegwerfen.
• Zurücksetzen Sie die Kit vor der Verwendung bei Raumtemperatur 30 min， Die verschiedenen Zutaten und die hergestellten Proben in der Kit werden vollständig vermischt.
• Standardprodukte und Proben werden während des Tests empfohlen, eine Komplexporenprüfung durchzuführen, wobei die Reihenfolge der Zugabe von Reagentien beibehalten wird*.
• Um eine Kreuzkontamination zu vermeiden, verwenden Sie im Test ein einmaliges Prüfrohr, einen Pistolenkopf, eine Dichtungsfilm (※und saubere Plastikbehälter. .
• Konzentrierte biotinierte Antikörper und konzentrierte Enzymverbindungen haben ein geringeres Volumen, so dass Spuren von Flüssigkeiten während des Transports an die Rohrwande und die Flasche beflecken werden

Abdecken, vor dem Gebrauch zentrifugieren (5-10 S), so dass die Flüssigkeit auf der Rohrwand auf dem Rohrbund konzentriert wird, und beim Entnehmen mit dem Pipetten vorsichtig mehrmals geblasen werden.

• Verwenden Sie bitte keine Tests aus anderen Quellen, außer wenn die konzentrierte Waschflüssigkeit und die Endflüssigkeit in der Kit allgemein verwendet werden können.

Ersetzen Sie eine einzelne Komponente in diesem Kit.

• Um sicherzustellen, dass die Ergebnisse genau sind, müssen Standardkurven bei jedem Test durchgeführt werden.

Sicherheitshinweise:Die Endflüssigkeit in der Kit ist eine saure Lösung, bitte tragen Sie Handschuhe bei der Verwendung und achten Sie auf den Schutz; Vermeiden Sie auch den Kontakt des Reagents mit Haut und Augen während des Betriebs, wenn Sie es nicht vorsichtig berühren, waschen Sie es mit viel Wasser; Bei der Prüfung von Blutproben und anderen körperlichen Flüssigkeitsproben sollten Sie die Verwaltungsvorschriften des nationalen Biolaboratoriums für Sicherheitsschutz einhalten.

Kit Zusammensetzung und Lagerung：

Eigene experimentelle Ausrüstung (nicht verfügbar, kann bestellt werden)

• Enzymmetrie (Hauptwellenlänge 450 nm, Referenzwellenlänge 630 nm)
• Hochpräzise Pipette und Einwegsaugkopf: 0,5-10,2-20,20-200,200-1000 μl
• Spülmaschine oder Flaschenwaschmaschine
• 37℃Inkubationskasten
• Doppeldampfwasser, deionisiertes Wasser, Zylinder usw.
• Polypropylen-Versuchsrohr für Verdünnung

Sampling und Lagerung:

• Zellkultur:

Verschieben Sie das Zellkulturmedium in sterile Zentrifugerrohre, 1000 x g bei 4 ° C für 10 min zu zentrifugieren, und teilen Sie dann die gleiche Menge an Oberwasser in kleinen EP-Röhren und speichern Sie es bei -20 ° C (Detektion kann innerhalb von 24 Stunden in 2-8 ° C Lagerung gelegt werden), um wiederholte Gefrierschmelzung zu vermeiden.

• Serumproben:

Nach der natürlichen Gerinnung von Blut bei Raumtemperatur 20 min, 1000 x g unter 4 ℃ 10 min zentrifugieren, dann die gleiche Menge an Oberwasser in kleinen EP-Röhren verteilen und bei -20 ℃ aufbewahren (die Detektion kann innerhalb von 24 Stunden bei 2-8 ℃ gelagert werden), wenn es Niederlage gibt, zentrifugieren Sie bitte erneut, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

• Plasmaproben:

Sammeln Sie das Vollblut in eine Röhre mit Antikoagulanten, wählen Sie EDTA, Natriumcitrat oder Hepatin als Antikoagulant gemäß den praktischen Anforderungen der Probe aus, mischen Sie 20 min, zentrifugieren Sie 1000 x g bei 4 ° C für 10 min und teilen Sie dann die Äquivalentmenge des oberen Serums in kleine EP-Röhre und bewahren Sie sie bei -20 ° C (die Detektion kann innerhalb von 24 Stunden bei 2-8 ° C gelagert werden), um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

※Hinweis:Serum-Plasma-Proben vermeiden Sie die Verwendung von hemolytischen, hyperlipidischen Proben, um das Testergebnis zu vermeiden; Wenn die Zielkonzentration in der Probe höher als der Standardwert ist, testen Sie die Probe nach einer geeigneten Verdünnung mit einem Vielfachen, und es wird empfohlen, vor dem formellen Experiment ein Vorexperiment durchzuführen, um das Verdünnungsvermögen zu bestimmen.

Reagenzbereitung：

• Reagenz-Erhärmung: Zuerst 30 min vor dem Experiment das Kit, die zu testende Probe bei Raumtemperatur platziert, konzentrierte Waschflüssigkeit, wenn die Kristallisation auftaucht, bitte in ein 37 ° C warmes Bad, bis die Kristallisation vollständig gelöst ist.
• Zubereitung der Waschflüssigkeit: Berechnen Sie das verwendete Volumen der verdünnten Waschflüssigkeit im Voraus, verdünnen Sie dann die 20-fache konzentrierte Waschflüssigkeit in die 2-fache Anwendungslösung mit Doppeldampf- oder Deionisierungswasser und legen Sie die ungenutzte konzentrierte Waschflüssigkeit in einen 4 ° C-Kühlschrank auf.

3. Standard-Gradient-Verdünnung: Standard-Produkt / Probe-Verdünnung (SR1) 1 ml Gefriertrocknen Standard-Produkt hinzufügen, lassen Sie 15 Minuten, bis es * gelöst ist, leicht vermischen (Konzentration von 2000 pg / ml), und verdünnen Sie dann in den folgenden Konzentrationen: 2000, 1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg / ml. Die nicht aufgelösten Standardflüssigkeiten (2000 pg/ml) sollten entworfen oder nach Bedarf nach einer Dosis aufgeteilt werden und in einem Kühlschrank von -20 bis -80 °C gelagert werden, wie in der folgenden Abbildung angegeben.

4. Biotinisierte Antikörper-Arbeitsflüssigkeit: Berechnen Sie die erforderliche Menge des Tests im Voraus, verdünnen Sie die 100fache Antikörper-Konzentration mit der Detektionsverdünnung (SR2) in die 2fache Anwendungsarbeitsflüssigkeit (vor der Verdünnung vollständig vermischt), fügen Sie sie bitte innerhalb von 30 Minuten in das Reaktionsloch hinzu.

Biotinisierte Antikörper Arbeitsflüssigkeit spezifischVerdünnungsmethodenFolgendes:

5. Enzymverbindung Arbeitsflüssigkeit: Zubereitung nach der erforderlichen Dosierung für jeden Test, mit der Enzymverbindung-Verdünnung (SR3) verdünnen Sie die konzentrierte Enzymverbindung 100 mal in die 2-fache Anwendung Arbeitsflüssigkeit (vor der Verdünnung Zentrifuge), verwenden Sie bitte innerhalb von 30 Minuten.

Enzymverbindungen Arbeitsflüssigkeit spezifischVerdünnungsmethodenFolgendes:

6. Waschmethode:

• Automatisches Waschen der Platte: Entfernen Sie die Flüssigkeit im Enzym-Markierungsloch, trocknen Sie auf dickem Absorptionspapier, injizieren Sie die Waschflüssigkeit mit 300 ul / Loch, spritzen und absaugen Sie das Intervall von 30 Sekunden, waschen Sie die Platte 5 Mal.
• Handwäsche: Entfernen Sie die Flüssigkeit im Enzym-Markierungsloch, trocknen Sie es auf dickem Absorptionspapier, fügen Sie 300 ul / Loch mit der Waschflasche hinzu, reinigen Sie die Flüssigkeit im Enzym-Markierungsloch nach 30 Sekunden, trocknen Sie es auf dickem Absorptionspapier und waschen Sie die Platte 5 Mal.

Testschritte:

Ergebnis Urteil：

1. Messung des OD-Wertes mit einem 450 nm Wellenlängenmeter. Wählen Sie eine doppelte Wellenlängendetektion mit einer Referenzwellenlänge von 630 nm aus. Wenn eine doppelte Wellenlängendetektion nicht möglich ist, subtrahieren Sie die OD-Messung von 630 nm mit einer OD-Messung von 450 nm.

Berechnen Sie den durchschnittlichen OD-Wert von Standardprodukten und Proben: Der OD-Wert von jedem Standardprodukt und Probe sollte den OD-Wert von Nullen abziehen

3. Die Standardkonzentration als horizontale Koordinate, der Absorptionswert OD als longitudinale Koordinate, die Zeichnung der Standardkurve mit der Software, der IL-1a-Gehalt in der Probe kann durch den entsprechenden OD-Wert von der Standardkurve die entsprechende Konzentration umwandeln.

4. Wenn der OD-Wert der Probe höher als die obere Grenze der Standardkurve ist, sollte nach entsprechender Verdünnung erneut getestet werden und die Konzentration bei der Berechnung mit dem Verdünnungsvermöglichten multipliziert werden.

Charakterisierung der Parameter：

1. Daten und Standardkurven

Diese Abbildung dient nur zur Referenz und der IL-1A-Gehalt der Maus sollte auf der Grundlage der Standardkurve berechnet werden, die auf den aktuellen Testkriterien gezogen wurde.

2. Empfindlichkeit:

Niedrige detektierbare IL-1a-Konzentrationen bei Mäusen bis zu 15 pg/ml,

Der Durchschnittswert von 20 Null-Standardkonzentrationen OD plus zwei Standardabweichungen berechnet die entsprechende nachweisbare Konzentration.

3. Besonderheit:

Nicht reagiert auf IL-1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 9, 10, 12, 13 von Mäusen, IL-1 von Rattenβwarten auf Reaktion

4. Wiederholbarkeit:

Variationskoeffizient zwischen Platten < 10%

5. Recyclingquote:

Fügen Sie 3 verschiedene Konzentrationen von IL-1a in ausgewählten gesunden Maus Plasma, Zellkultur Serum, um die Recycling-Rate zu berechnen.

6. Lineare Verdünnung：

Hohe Konzentrationen von Maus IL-1a in ausgewählten 4 Portionen gesundes Maus Plasma und Zellkultur Oberserum, verdünnt im Standard-Kurvendynamikbereich, Linearität zu bewerten.

Referenzen：

1. Greenfeder, S.A. et al. (1995) J. Biol. Chemie.270:13575.

2. Wesche, H. et al. (1997) J. Biol. Chemie.272:7727.

3. Sims, J.E. et al. (1994) Clin. Immun. Immunopathol.72:9.

4. Sims, J. E. et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Wissenschaft. Vereinigte Staaten90:6155.

5. Colotta, F. und A. Mantovani (1994) Trends Pharmacol. Wissenschaft.14:138.

6. Svenson, M. et al. (1993) Zytokin5:427.

7. Giri, J.G. et al. (1994) J. Immunol.153:5802.

Häufige Fragen und Lösungen：

Maus Interleukin-1aELISA KitBestellanweisung:

Die meisten Produkte sind auf Lager und können in der Regel am selben Tag bestellt werden.
Einige sehr gebrauchte Produkte müssen 1-2 Tage im Voraus gebucht werden, während ausländische Futures 3-6 Wochen im Voraus gebucht werden müssen.
Einige Produktpreise können sich aufgrund der Lieferzeit, der Menge und anderer Faktoren ändern, wenn Änderungen am neuen Preis am Bestelltag vorliegen.
4. Die tägliche Bestellfrist ist 16 Uhr, einige Städte können bis 17 Uhr sein, da die Frist überschritten ist, kann der Versand am nächsten Tag nicht erfolgen.
5. Bitte, nachdem Sie die Zahlung abgeschlossen haben, benachrichtigen Sie uns mit der Adresse des Empfängers, dem Namen usw. durch Fax, SMS usw.

Verkehrsanweisungen:

Extrem niedrige Temperaturprodukte: Trockeneis während des Transports von extrem niedrigen Temperaturprodukten. Verpacken Sie das Produkt mit Trockeneis, versiegeln Sie es mit Schaumstoffkasten, kleben Sie die Schaumstoffkasten auf einer Klebebandschicht, legen Sie sie in die Schachteln von Soleilbao und liefern Sie sie dann an den Kooperationscourier, sicheren, schnellen und effizienten Kunden, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Kryotemperaturprodukte: Solibao Eisbeutel werden während des Transports von Kryotemperaturprodukten aufgefüllt. Verpacken Sie das Produkt im Voraus mit einem Eisbeutel, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band und legen Sie sie in die Schachtel von Soleilbao (die Wärmedämmung kann eine Woche dauern), und liefern Sie sie an die Kooperationscourier, die sichere, schnelle und effiziente Hand des Kunden liefert, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Normale Temperaturprodukte: Kein Eis oder eine spezielle Verpackung sind während des Transports erforderlich. Die schnelle Lieferung von Produkten durch das Lagerpersonal des Unternehmens garantiert eine schnelle Lieferung in Ihre Hände.