Maus-Interleukin-1β

Maus Interleukin-1β ELISA Kit

Hintergrundvorstellung：

IL-1 ist unterteilt in IL-1a und IL-1β, das IL-1-Gen des Menschen und der Mäuse befindet sich auf Chromosom 2 und enthält beide sieben Exotrone. Der IL-1-Vorläufer (ProIL-1) beträgt 31 kDa und bildet durch Proteinhydrolyse-Lyse ein reifes IL-1-Molekül. IL-1 hat eine hohe Homogenität in verschiedenen Gattungen. Im Hinblick auf die Aminosäurenebene sind IL-1α und IL-1β in verschiedenen Gattungen 60-70% und 75-78% homogen. IL-1α und IL-1β haben Molekulargewichte von etwa 17,5 kDa, Isopunkte von 5 bzw. 7 und Homogenität von 28 %.IL-1β bei reifen Mäusen mit 17kDa war 90% identisch mit IL-1β bei Baumwollmäusen und Ratten und 65%-78% mit IL-1β bei Hunden, Pferden, Katzen, Menschen, Schweinen und Affen.

IL-1β wird hauptsächlich von Mononukleozyten und Makrophagen im Blut produziert, Asterozyten, Minoritäten, Nebennieren-Kortikozyten, NK-Zellen, Endothelizellen, Hornatozellen, Makronukleozyten, Thrombozyten, Neuronen, Neutrophilen, Knochenzellen, Xuwang-Zellen, Nährschichtzellen, T-Zellen und Fibrozellen können auch IL-1β produzieren. IL-1 hat eine umfangreiche immunmodulatorische Wirkung und hat eine hitzerregende und entzündlich vermittelnde Wirkung.。

Prüfprinzip：

Solarbio (Solarbio ®)ELISA-Kit mit enzymbundener Immunabsorptionsprüfung auf Basis der Dual Antibody Clamping Methode。Wird widerstehenMäuseIL-1βMonoklonale Antikörper Pakete werden auf enzymatischen Markierungsplatten; Hinzufügen von gradientenverdünnten Standardprodukten und vorverdünnten Proben, Standardprodukten und ProbenMäuseIL-1βWird Antikörper mit dem Paket auf dem Enzym-MarkerVollständigKombination;Nach dem WäschenBiochemie-Resistenz hinzufügenMäuseIL-1βAntikörperDer Antikörper wird mit der Platte verpackt, die von Antikörpern gefangen Standard und Proben von IL-1 in Mäusenβspezifische Kombinationen auftreten; Nach dem WäschenHinzufügen von Kettenschimmel-Homofine, gekennzeichnet mit Moringa Peroxidase (HRP), wird Biotin und Kettenschimmel-Homofine auftretenHohe Intensität der Nicht-KovalenzKombination;Nach dem WäschenZusatz des Farbstoffsubstrats TMB，Bei unterschiedlichen Konzentrationen in der ProbeMäuseIL-1βHRP wird farbloses TMB in eine andere tiefe (positive) blaue Substanz verwandeln, und das Reaktionsloch wird gelb, nachdem die Endflüssigkeit hinzugefügt wird; Bei λmax = 450 nm(OD = 450 nm)Messung der Absorptionsfähigkeit der Reaktionslochprobe vor Ort(OD)In der Probe.MäuseIL-1βKonzentration undODProportional, berechnbar durch Zeichnung von Standardkurven und VierparameteranpassungssoftwareAusgangIn der ProbeMäuseIL-1βKonzentration.

Grundsatzdiagramm:

Hinweis:※※※

• Die Kits sollten während der Gültigkeitsdauer verwendet werden, bitte verwenden Sie keine abgelaufenen Reagenzien.
• Wenn die Kit nicht verwendet wird, sollte sie in 2-8 aufbewahrt werden.Kühlschrank, wieder gelöstaberUngebrauchte Standardprodukte bitte wegwerfen.
• Vor dem Einsatz der KitBitteWiederherstellung bei Raumtemperatur 30 Min，Mischen Sie alle Inhaltsstoffe undVorbereitetProben.
• Standardprodukte und Proben werden während des Tests empfohlen, eine Komplexporenprüfung durchzuführen, wobei die Reihenfolge der Zugabe von Reagentien beibehalten wird*.
• Um Kreuzkontamination zu vermeiden, verwenden Sie bitte 1-mal-Prüfrohr, Pistolenkopf im Test，Dichtfilm（※）Reine Plastikbehälter..
• Konzentrierte biotinierte Antikörper und konzentrierte Enzymverbindungen haben ein geringeres Volumen, so dass Spuren von Flüssigkeiten während des Transports an die Rohrwande und die Flasche beflecken werden

Abdecken, vor dem Gebrauch zentrifugieren (5-10 S), so dass die Flüssigkeit auf der Rohrwand auf dem Rohrbund konzentriert wird, und beim Entnehmen mit dem Pipetten vorsichtig mehrmals geblasen werden.

• Außer konzentrierter Waschflüssigkeit im KitundEndflüssigkeit kann außerhalb der allgemeinen Anwendung, bitte verwenden Sie keine anderen Quellen Kitsenthaltene ReagenzienErsetzen Sie eine einzelne Komponente in diesem Kit.
• Um die Genauigkeit der Ergebnisse zu gewährleisten, werden bei jedem TestBedarfStandardkurven machen.

Sicherheitshinweise:Die Endflüssigkeit in der Kit ist eine saure Lösung,Der Betreiber ist inbei GebrauchBitteTragen Sie Handschuhe und achten Sie auf den Schutz;Auch während des BetriebsVermeiden Sie den Kontakt des Reagents mit Haut und Augen und waschen Sie es bei unbevorsichtigtem Kontakt mit viel Wasser; Bei der Prüfung von Blutproben und anderen körperlichen Flüssigkeitsproben sollten Sie die Verwaltungsvorschriften des nationalen Biolaboratoriums für Sicherheitsschutz einhalten.

Kit Zusammensetzung und Lagerung：

Eigene experimentelle Ausrüstung (nicht verfügbar, kann bestellt werden)

• Enzymmetrie (Hauptwellenlänge 450 nm, Referenzwellenlänge 630 nm)
• Hochpräzise Pipette und Einwegsaugkopf: 0,5-10,2-20,20-200,200-1000 μl
• Spülmaschine oder Flaschenwaschmaschine
• 37℃InkubierenErziehungSchachteln
• Doppeldampfwasser, deionisiertes Wasser, Zylinder usw.
• Polypropylen-Versuchsrohr für Verdünnung

Sampling und Lagerung:

• Zellkultur:

Verschieben Sie das Zellkulturmedium in eine sterile Zentrifuge unter 4 ° C 1000×g Zentrifugieren Sie 10 min, dann teilen Sie die gleiche Menge an Oberklarstoff in kleinen EP-Rohren und in -2Lagerung bei 0°C(Die Prüfung kann innerhalb von 24 Stunden bei 2-8 ° C gelagert werden)Vermeiden Sie wiederholtes Einfrieren.

• Serumproben:

Blut gerinnt natürlich nach 20 min bei 4 ° C 1000×g Zentrifugieren Sie 10 min und teilen Sie dann die gleiche Menge an HK in kleinen EP-Rohren und in -2Lagern Sie bei 0 ° C (die Detektion kann innerhalb von 24 Stunden in 2-8 ° C gelagert werden), wenn es Niederlage während der Lagerung gibt, zentrifizieren Sie bitte erneut, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

• Plasmaproben:

Sammeln Sie Vollblut in eine Röhre mit Antikoagulanten, wählen Sie EDTA, Natriumcitrat oder Hepatin als Antikoagulant nach den praktischen Anforderungen der Probe aus, mischen Sie 20 min und 1000 unter 4 ° C×g Zentrifugieren Sie 10 min und teilen Sie dann die gleiche Menge an HK in kleinen EP-Rohren und in -2Lagern Sie bei 0 ° C (die Detektion kann innerhalb von 24 Stunden bei 2-8 ° C gelagert werden), um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden。

※Hinweis:Vermeiden Sie die Verwendung von serumlösen, hyperlipidischen Proben, um das Testergebnis nicht zu beeinflussen；Wenn in der ProbeZielDie Erkennungskonzentration ist höher als der Standardwert, bitte testen Sie die Probe nach der geeigneten Verdünnung des Vielfachen, und es wird empfohlen, vor dem formellen Experiment ein Vorexperiment durchzuführen, um das Verdünnungsvermögen zu bestimmen.

Reagenzbereitung：

• Reagenz: 30 min vor dem ExperimentReagenzkist,Zu testenProbenPlatziert inRaumtemperaturuntenKonzentrierte Waschflüssigkeit, wenn es zu Kristallisation kommt, bitte in ein 37 ° C warmes Bad setzen, bis die Kristallisation vollständig gelöst ist。
• ZubereitungWaschmittel:Berechnen Sie das verwendete Volumen der verdünnten Waschflüssigkeit undMit doppeltem Dampf oder deionisiertem Wasser20 mal.Konzentrierte Waschflüssigkeit verdünnt1 malAnwendungslösung, ungenutzte konzentrierte Waschflüssigkeit4℃Kühlschrank aufbewahren.

3. StandardprodukteGradientverdünnung：Standard hinzufügen/ProbenVerdünnung (Svon R1)1 mlGefriertrocknet Standardprodukt, lassen Sie 15 Minuten, bis es * nach der Lösung leicht vermischen (Konzentration von2000pg/ml)， dannnachFolgende Konzentrationen:2000、1000, 500, 250, 125, 62,5, 31,25, 0 pg/ml verdünnt werden. Standardflüssigkeit (2von 000pg/ml)Nicht verbrauchte sollten entworfen oder nach Bedarf nach einer einzigen Dosis aufgeteilt werden und in einem -20 bis -80 ° C Kühlschrank gelagert werden.Konkret wie folgt:Bild。

4. Biotinisierte Antikörper-Arbeitsflüssigkeit:VorberechnenDie zur Prüfung erforderliche Menge, mit der Erkennungsverdünnung (Sund R2)100 Mal Antikörper KonzentrationVerdünnungDoppelte Anwendung der Arbeitsflüssigkeit (Vor Verdünnung vollständig vermischen），BitteIn 30 Minuten.In das Reaktionsloch hinzufügen.

Biotinisierte Antikörper Arbeitsflüssigkeit spezifischVerdünnungsmethodenFolgendes:

5. Enzymverbindungs-Arbeitsflüssigkeit: Zubereitung nach der erforderlichen Dosis für jeden Test mit einer Enzymverbindungsverdünnung (SR3) 100-fach die Enzymverbindung verdünnenDoppelte AnwendungArbeitsflüssigkeit（Vor der VerdünnungZentrifizierung)Bitte in 30 Minuten verwenden.。

Enzymverbindungen Arbeitsflüssigkeit spezifischVerdünnungsmethodenFolgendes:

6. Waschmethode:

• Automatisches Plattenwaschen: Entfernen Sie die Flüssigkeit im Enzym-Markierungsloch, trocknen Sie auf dickem Absorbierpapier und spritzen Sie die Waschflüssigkeit 300 µl/Loch, Injektion und Absaug in einem Intervall von 30 Sekunden, 5 Mal die Platte waschen.
• Handwaschen: Entfernen Sie die Flüssigkeit aus dem Enzym-Markierungsloch, trocknen Sie sie auf dickem Absorbierpapier und fügen Sie die Waschflüssigkeit in der Flasche hinzu300 µl / Loch, nach 30 Sekunden Stillstand die Flüssigkeit in das Loch der Enzym-Markierungsplatte reinigen, trocknen auf einer dicken Schicht von Wasser-Absorptionspapier, waschen Sie die Platte 5 Mal.

Testschritte:

Ergebnis Urteil：

1. Messung des OD-Wertes mit einem 450 nm Wellenlängenmeter. Wählen Sie eine doppelte Wellenlängendetektion, die Referenzwellenlänge ist 630 nm. Wenn Sie keine doppelte Wellenlängendetektion durchführen können, verwenden Sie bitte eine 450 nmODMesswerteAbziehenvon 630 nmODMesswerte.

Berechnen Sie den durchschnittlichen OD-Wert von Standardprodukten und Proben: Der OD-Wert von jedem Standardprodukt und Probe sollte den OD-Wert von Nullen abziehen

3. Standardkonzentration als horizontale Koordinate, Absorptionswert OD als longitudinale Koordinate, Zeichnung von Standardkurven mit Software, ProbenMitteIL-1βInhalt kann durchgeführt werdenEntsprechenDer OD-Wert wird von der Standardkurve zur entsprechenden Konzentration umgerechnet.

Ist der OD-Wert der Probe höher als die Obergrenze der Standardkurve,machenNach entsprechender VerdünnungWiederprüfenBei der Berechnung der Konzentration multipliziert。

Charakterisierung der Parameter：

1. Daten und Standardkurven

Diese Abbildung dient ausschließlich zur Informationszwecke und sollte auf der Grundlage der Standardkurve berechnet werden, die von den aktuellen Teststandards gezogen wurde.MäuseIL-1βProbengehalt

2. Empfindlichkeit:

Niedrig nachweisbarMäuseIL-1βKonzentration bis15von pg/ml,

Der Durchschnittswert von 20 Null-Standardkonzentrationen OD plus zwei Standardabweichungen berechnet die entsprechende nachweisbare Konzentration.

3. Besonderheit:

Nicht mitMäuseIL-2、3、4、6、7、10IL-1a und IL-1Rawarten auf Reaktion

4. Wiederholbarkeit:

Variationskoeffizient zwischen Platten < 10%

5. Recyclingquote:

AusgewähltGesundheitMäuseBlutplasmaZellkultur reinigen3 verschiedene Konzentrationsniveaus hinzugefügt.MäuseIL-1βBerechnen Sie die Recyclingquote.

6. Lineare Verdünnung：

jeweils ausgewählt.4 GesundheitPlasma und Zellkultur von MäusenHohe Konzentration hinzufügenMäuseIL-1βVerdünnung im Bereich der Standardkurvendynamik und Bewertung der Linearität.

Referenzen：

1Dinarello, C.A. (1994) Eur. Zytokin-Netzwerk.5:517.

2March, C.J. et al. (1985) Natur315:641.

3Sims, J. E. et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Wissenschaft. Vereinigte Staaten86:8946.

4Sims, J.E. et al. (1988) Wissenschaft241:585.

5Huang, J. et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Wissenschaft. Vereinigte Staaten94:12829.

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10Wewers, M.D. et al. (1997) J. Immunol.159:5964.

11Gonzales-Hernandez, J.A. et al. (1995) Clin. Exp. Immunol.99:137.

Häufige Fragen und Lösungen：

Maus Interleukin-1β ELISA KitBestellanweisung:

Die meisten Produkte sind auf Lager und können in der Regel am selben Tag bestellt werden.
Einige sehr gebrauchte Produkte müssen 1-2 Tage im Voraus gebucht werden, während ausländische Futures 3-6 Wochen im Voraus gebucht werden müssen.
Einige Produktpreise können sich aufgrund der Lieferzeit, der Menge und anderer Faktoren ändern, wenn Änderungen am neuen Preis am Bestelltag vorliegen.
4. Die tägliche Bestellfrist ist 16 Uhr, einige Städte können bis 17 Uhr sein, da die Frist überschritten ist, kann der Versand am nächsten Tag nicht erfolgen.
5. Bitte, nachdem Sie die Zahlung abgeschlossen haben, benachrichtigen Sie uns mit der Adresse des Empfängers, dem Namen usw. durch Fax, SMS usw.

Verkehrsanweisungen:

Extrem niedrige Temperaturprodukte: Trockeneis während des Transports von extrem niedrigen Temperaturprodukten. Verpacken Sie das Produkt mit Trockeneis, versiegeln Sie es mit Schaumstoffkasten, kleben Sie die Schaumstoffkasten auf einer Klebebandschicht, legen Sie sie in die Schachteln von Soleilbao und liefern Sie sie dann an den Kooperationscourier, sicheren, schnellen und effizienten Kunden, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Kryotemperaturprodukte: Solibao Eisbeutel werden während des Transports von Kryotemperaturprodukten aufgefüllt. Verpacken Sie das Produkt im Voraus mit einem Eisbeutel, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band und legen Sie sie in die Schachtel von Soleilbao (die Wärmedämmung kann eine Woche dauern), und liefern Sie sie an die Kooperationscourier, die sichere, schnelle und effiziente Hand des Kunden liefert, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Normale Temperaturprodukte: Kein Eis oder eine spezielle Verpackung sind während des Transports erforderlich. Die schnelle Lieferung von Produkten durch das Lagerpersonal des Unternehmens garantiert eine schnelle Lieferung in Ihre Hände.