Milchsäuredehydrogenase-Aktivität (WST-8-Methode)

Milchsäuredehydrogenase (LDHPrinzipien der aktiven SpurmessungDurch den Test.LDHKatalyse der Reduktion von Acetonsäure in MilchsäureNADHIndirekte Erzeugung bestimmtLDHAktivitäten.

Der konkrete Prozess ist wie folgt:

Reaktionsprinzip:inLDHunter der Rolle,NAD+Erzeugt wurde wiederhergestelltNADH。NADHundWST-8Die Wechselwirkung erzeugt eine Farbe, wodurch eine farbvergleichende Messung erfolgt (λ).max = 450 nm).

Reaktionsbedingungen:LDHgebenNADZurücksetzen alsNADH，NADHundWST-8Wechselwirkungen erzeugen Farben. Diese Reaktion wird auf Eis durchgeführt, wobei die Komponenten (z.B.Assay-Puffer、Lactat、NAD、WST-8、VerstärkerEs muss vor dem Experiment aus dem Kühlschrank entnommen und auf Raumtemperatur ausgeglichen werden, während der gesamte Prozess mit Lichtschutz betrieben wird.

Absorptionsmessung:in450 nmMessung der Absorption, Absorption undLDHDie Aktivität ist proportional und kann durch Farbvergleich bestimmt werdenLDHAktivitäten.

Experimentelle Schritte und notwendige Ausrüstung:

Experimentelle Schritte:Arbeitsflüssigkeit vorbereiten (1×Assay-Puffer、NAD、WST-8、VerstärkerundLactatGleichmäßig vermischen), Arbeitsflüssigkeit hinzufügen96Bohrplatten oder Spuren Glas Coloring Scheiben, fügen Sie Proben zu testen,37Die Absorption wird nach einer bestimmten Zeit gemessen.

Benötigte Ausrüstung:Enzymmetrie oder sichtbares Spektrophotometer450 nmAbsorption), Thermostat, Eismaschine, Tieftemperaturzentrifuge,96Bohrplatten oder Glasspüren, verstellbare Pipetten und Pistolenkopfe, deionisiertes Wasser, Homogenizer (wenn Gewebeprobe).

Experimentelle Hinweise‌：

Aufbewahrung des Reagents:Komponenten (z.B.Assay-Puffer、Lactat、NAD、WST-8、VerstärkerAuf dem Eis aufbewahren, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

Betriebsmaßnahmen:Der gesamte Versuchsprozess muss auf Eis durchgeführt werden, um zu vermeiden, dass das Licht das Ergebnis beeinflusst..