E14 Zellkulturmedium

Sterile Operation:Die Zellkultur muss in einer sterilen Umgebung durchgeführt werden, vor der Verwendung der ultravioletten Sterilisation des ultrareinen Arbeitstischs und regelmäßiger Reinigung der Kultivkammer. Die Experimentierenden müssen Arbeitskleidung, Schuhhüllen, Masken und Handschuhe austauschen.

Sterilisation der Ausrüstung:Glasgeräte, Metallgeräte usw. können mit Hochdruckdampf sterilisiert werden, Kunststoffprodukte wählen eher die Ethanoxidsterilisierung oder den Kauf sterilisierter Produkte.

Auswahl des Reagents:Die verwendeten Kulturflüssigkeiten, Seren, Puffer und andere Reagentien sollten steril und frei von Verschmutzung sein, vor der Verwendung müssen sterile Tests durchgeführt werden. Unterschiedliche Zellen haben unterschiedliche Anforderungen an die Zusammensetzung der Kulturflüssigkeit, die geeignete Kulturflüssigkeit sollte je nach Zelltyp ausgewählt werden.

Aufbaubedingungen:Die meisten Säugetierzellen sind geeignet, bei 37 ° C zu kultivieren, und die Abweichung sollte bei ± 0,5 ° C kontrolliert werden. Die Zellkultur sollte gut dicht bleiben, regelmäßig die Gaskonzentration und den Durchfluss überprüfen, und die Zellkultur benötigt in der Regel 5% CO2, um den pH-Wert der Kulturflüssigkeit stabil zu halten. Die Feuchtigkeit in der Anlage sollte bei etwa 95% bleiben.

‌Tägliche Beobachtung:Die Veränderungen der Zellmorm, des Wachstumszustands und der Farbe der Kulturflüssigkeit werden täglich unter dem Mikroskop beobachtet.

Regelmäßige Prüfung:Regelmäßig werden die Zellen von Branchen, Bakterien, Pilzen und anderen Verunreinigungen untersucht.

E14Zellspezifisches Kulturmedium

Produkteinführung

E14ZellkulturbasisDas Team ist sorgfältig optimiert und nach langfristigen Tests kann dieses ProduktE14-Zellen haben einen guten Wachstumszustand.

Dieses Produkt ist bereits enthalten Die verschiedenen Zutaten, die für das Wachstum von E14-Zellen erforderlich sind, können ohne Hinzufügen von Zutaten direkt für die Kultivierung von E14-Zellen verwendet werden.

Hauptbestandteile des Produktes

DMEM Basismedium 405mL

Serum für Rinder 75 ml

Transport und Lagerung

Transport: Tieftemperaturtransport in einer Isolierbox mit Bio-Eisbeutel

Aufbewahrungsmethode: 2 ° C bis 8 ° C, Lichtschutz, 2 Monate aufbewahren; ׏

Beachten Sie nur wissenschaftliche Zwecke.

Einige Komponenten des Kultursystems sind für die menschliche Gesundheit schädliche Substanzen, bitte berühren Sie nicht die Flüssigkeit des Kultursystems und das Innere des Behälters mit Flüssigkeitsresten des Kultursystems mit der exponierten Haut; Dieser Teil der gefährlichen Substanzen ist sowohl konzentriert als auch gefährlich und kann bei Kontakt sofort mit Leitungswasser gespült werden.

Wiederbelebung

1) das Wasser in der thermostatischen Badewanne auf 37 ° C vorwärmen;

2) Vorbereiten Sie ein 15 ml Zentrifugerrohr, fügen Sie 5 ml des Mediums, das 10% FBS enthält, und geben Sie es in eine 37 ° C Wasserwanne vorwärmt;

3) Tragen Sie eine Schutzbrille auf, nach dicken Haarhandschuhen, entfernen Sie die Zellen aus dem flüssigen Stickstoff-Tank, um sich zu erholen, so schnell wie möglich in den 37 ° C thermostatischen Wasserbad

Erhärmungsschütteln Gefrierrohr, um die Erhärmungsrate zu erhöhen;

4) Atmen Sie die Zellen aus dem geschmolzenen Gefrierrohr in das vorzubereitete Zentrifugerrohr ein und zentrifugieren Sie nach 1000 Umdrehungen pro Minute für 5 Minuten;

5) Vorbereiten Sie eine T-25-Flasche, schreiben Sie den Zellnamen und das Datum auf und fügen Sie 4 ml Medium hinzu;

6) Nach Abschluss der Zentrifugation entfernen Sie das Oberwasser, suspendieren Sie die Zellen mit 1 ml Medium, übertragen Sie sie in die T-25-Zellkultur und mischen Sie sie in

CO2-Kultivierung in einer Kultivierungskammer.

Übertragung (Zell-Übertragung empfohlen 1-2)

1) Wenn die zelluläre Konvergenz über 85% erreicht, kann die Vermehrung durchgeführt werden.

2) Öffnen Sie die Kultivflaschenmünde im Biosicherheitsschrank und sammeln Sie das Kultivmedium in der Flasche;

3) 3 ml sterile 1 x PBS in die Kulturflasche hinzugefügt, die Kulturflasche horizontal platziert, so dass PBS in den gesamten Bereich auf dem Boden der Kulturflasche eindringen und PBS absaugen kann;

4) Fügen Sie 1 ml Verdauungsflüssigkeit in die Flasche hinzu und inkubieren Sie 1 ~ 2 min in einer 37 ° C CO2-Kulturkammer, nachdem Sie den Boden eingedrungen haben;

5) beobachten, ob die Zellen nach Inkubation unter dem umgekehrten Mikroskop runden und schweben, wenn alle verdaut werden, fügen Sie 2 ml des Mediums mit 10% FBS direkt in die Kulturflasche hinzu und inhalieren Sie die Suspension in eine 15 ml Zentrifuge;

① Vorbereiten Sie eine sterile 15 ml Zentrifuge und fügen Sie 2 ml des Mediums mit 10% FBS hinzu;

② Neutralisieren Sie die verdauten Zellen in einem Zentrifugerrohr in ① (vermeiden Sie das Blasen ②②); Fügen Sie 1 ml in die zuvor verdaute Kulturflasche hinzu, um die Verdauung für etwa 2 min fortzusetzen, schlagen Sie auf die Kulturflasche, um etwa 95% der Zellen zu entfernen.

6) 1000rpm Zentrifuge 5min;

7) Bereiten Sie zwei neue T-25-Flaschen vor, die jeweils mit 4 ml Medium hinzugefügt werden.

8) Nach Abschluss der Zentrifugierung, die Reinigung zu entfernen, die Zentrifugierung Zellen mit 2 ml Medium wieder suspendieren, die Zellen nach der Wiedersuspension in 2 T-25-Kulturflaschen mit jeweils 1 ml übertragen;

9) Horizontal die Kulturflasche platzieren, nach der Erschütterung und Mischung, die Kulturflasche auf 37 ° C, 5% CO2 in einer Kulturkammer zu setzen.

Gefrieren (Zellfrieren empfiehlt eine Flasche T25 gefriert)

1) bis 6) Übertragungsschritte

7) nach Abschluss der Zentrifugation, die Reinigung abzugeben, die Zellen mit 1 ml Gefrierflüssigkeit wieder zu suspendieren und dann in 1,8 ml Gefrierrohr zu übertragen;

8) Übertragen Sie das Gefrierrohr in eine mit Isopropanol gefüllte Prozesskühlbox und übernachten Sie in einen -80 ° C-Kühlschrank;

9) Am nächsten Tag nehmen Sie das Gefrierrohr aus der Sequenzkühlbox ab, die abgekühlt ist, und übertragen Sie es so schnell wie möglich in einen flüssigen Stickstofftank.

Schweineblutgrombulierendes Protein(TM)ELISAReagenzkist

Humanes Myosin (Myosin) ELISA KitMenschliche Muskelglobuline(Myosin)Reagenzkist

Kaninchenprothrombinfragme1+2,F1+2ELISAKitKaninchenflügeF1+2(F1+2)Kit-Aufteilung

CLIAKitforAi-TMSchilddrüsenpartikel Antikörper(TM)Antikörper)

血小板因子4(PlättchenfaktorIV)Aktivfluoreszenz-Quantifizierungskit20Nächster

Schweinezelluläres Adhesionsmolekül2, ICAM-2ELISAKitZwischen Schweinezellen haftende Moleküle2 (ICAM-2/CD102)Reagenzkist

Glutamidsynthase bei Ratten(GLUL)Test-Kit, englischer Name:GLUL ELISA Kit

Kaninchenerleukin 8 (IL-8/CXCL8) ELISA-KitKaninchen Weiß8 (IL-8/CXCL8)Reagenzkist

E. coli(O157:H7)Nukleinsäure-Kit(PCR-Fluoreszenzsonde) 48T

CLIAKitforMIP-1Beta/CCL4(Humaner Makrophagentzündliches Protein-1Beta)ELISAkitMenschliches Makrophagenprotein1β

Flüssiges Kosaki-VirusB(Coxsackievirus B)QuantifizierungPCRVergrößerungs-Kit20Nächster

Elisattraktion 5-htHund5Serotonin

SchweinelipoproteinB（Apo-BReaktionskist Montage/Original

SchweinelipoproteinA1(apo-A1)Kit Montage/Original

Schwangerschaft (PROGReaktionskist Montage/Original

Schweinehormon (PReaktionskist Montage/Original

5-Triphosphatsterolrezeptoren1Antikörper

Periodische ElementeD2Antikörper

Der IL1R2Reorganisation der RatteIL1R2 / IL1RB / CD121bProtein(SeineEtikett(Protein)

GRP94 (gp96) 0,5mgGRP94 (gp96) 94kDaZuckerregulierendes Protein(Antigen)

ANP32AUmstrukturierenANP32A / PHAP1Protein(Seine & GSTEtikett(Protein)

BLOC1S2 Protein MenschUmstrukturierenBLOC1S2 / BLOS2Protein(GST)Etikett)

PGLYRP1 Protein MausReorganisation der MäusePGLYRP1 / PGRP-SProtein(Seinevon

E14Zellspezifisches KulturmediumGRP94 (gp96) 0,5mgGRP94 (gp96) 94kDaZuckerregulierendes Protein(Antigen)

BLOC1S2 Protein MenschUmstrukturierenBLOC1S2 / BLOS2Protein(GST)Etikett)

Der IL1R2Reorganisation der RatteIL1R2 / IL1RB / CD121bProtein(SeineEtikett(Protein)

PGLYRP1 Protein MausReorganisation der MäusePGLYRP1 / PGRP-SProtein(SeineEtikett)

ANP32AUmstrukturierenANP32A / PHAP1Protein(Seine & GSTEtikett(Protein)