Bindende Stärkesynthetase-Aktivität-Test-Kit Spurmethode

Bindende Stärkesynthetase-Aktivität-Test-Kit Spurmethode

Hinweis: Vor der offiziellen Prüfung notwendig2-3Eine Probe mit größeren erwarteten Unterschieden wird prognostiziert.

Warennummer：BC3295

Spezifikationen:100T/96S

Produktinhalt:

Extraktionsflüssigkeit：Flüssigkeit 100ml x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren;

Reagenz 1: 30 ml x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren;

Reagenz 2: Pulver x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren;

Reagenz 3: Pulver x 1 Flasche, -20 ° C aufbewahren;

Reagenz 4: Pulver x 2 Flaschen, 4 ° C aufbewahren; Fügen Sie vor der Anwendung 5 ml Reagenz zu einer vollständigen Mischung Reserve;

Reagenz fünf: Pulver x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren; Zu einer vollständigen Mischung von 10 ml Reagenz vor der Anwendung;

Reagenz sechs: Pulver x 1 Stück, -20 ° C aufbewahren; 500 μL Doppeldampf vor der klinischen Anwendung hinzufügen, um die Reserve vollständig aufzulösen;

Reagenz sieben: Flüssigkeit 250 μL x 2 Stück, -20 ° C aufbewahren;

Reagenz acht: Flüssigkeit 12,5 μL x 2 Stück; Fügen Sie vor jeder Anwendung 4 ml gelöstes Reagenz hinzu.

ReaktionsflüssigkeitⅠZubereitung:Vor der Anwendung fügen Sie 14 ml Reagenz I in das Reagenz II hinzu, langsam erhitzen, allmählich erwärmen, um es zu lösen, nachdem es gekühlt ist, um es in das Reagenz III zu mischen und zu lösen. Dies kann in zwei Partien zusammengestellt und gemessen werden.

Produktbeschreibung:

GBSS (EC 2.4.1.21) ist im Bindungszustand im Stärkekörper vorhanden und katalysiert die Verlängerungsreaktion der Stärkekette, die hauptsächlich für die Synthese von geradkettiger Stärke verantwortlich ist.

GBSS katalysiert die Reaktion von ADPG mit dem Stärkeprätier (Polysaccharide) und überträgt Glukosemoleküle auf den Stärkeprätier, während ADP erzeugt wird; Weitere Katalyse von NADP durch die Zugabe von Acetonsäure-Kinase, Hexaglyckinase und 6-Phosphat-Glucose-Dehydrogenase im Reaktionssystem⁺Reduziert zu NADPH, in dem die NADPH-Produktion positiv proportional zur Anzahl der ADP ist, die durch die vorherige Reaktion erzeugt wird, kann die GBSS-Aktivität berechnet werden, indem die erhöhte Menge an NADPH bei 340 nm gemessen wird.

Eigene Geräte und Zubehör:

UV-Spektrophotometer/Enzym-Calibrator, Wasserwanne, Tischzentrifuge, verstellbare Pipette, Spuren-Quarzbecher/96-Loch-Platte (UV-Platte), Grill, Eis und destilliertes Wasser.

Betriebsschritte:

1. Zubereitung der Rohenzymflüssigkeit

Ungefähr 0,1 g Gewebe gewogen, 1 ml Extrakt hinzugefügt und im Eisbad homogenisiert. 10000g ， 4 ℃ Zentrifugieren 10min, entfernen, 1 ml Extrakt in der Niederschlagung hinzufügen und vollständig vermischen, auf dem Eis zu testen.

II. Bestimmungsschritte

1, Spektrophotometer oder Enzym-Calibrator vorwärmt mehr als 30 min, reguliert Wellenlänge 340nm, destilliert Wasser Null.

2. In der EP-Röhre in der Reihenfolge die folgenden Reagenzien hinzufügen

Unmittelbar nach der Vermischung von 200 μL Spuren Quarzschicht oder 96-Loch-Platte übertragen, Aufzeichnung der ersten Absorption A1 und Absorption A2 nach 2 min unter 340 nm Wellenlänge, berechnet ΔA = A2-A1.

Hinweis:Wenn das Reagenz II abgefällt ist, muss es vor dem Zugabe vollständig gelöst werden.

Drei,GBSSAktive Berechnung

a.Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wurde, lautet wie folgt:

Berechnung nach Proteinkonzentration:

Definition der Einheit: 1 nmol NADPH pro Minute katalysiert pro mg Histoprotein in 1 ml Reaktionssystem definiert als eine Einheit der Enzymdynamik.

GBSS-Aktivität (U / mg prot) = [ΔA ÷ (ε × d) × V-Messung] ÷ (Cpr × V-Art ÷ V-Gegen-Total × V-Klarheit) ÷T = 432 × ΔA ÷ Cpr

Diese Methode erfordert die eigene Bestimmung der Proteinkonzentration der Probe.

2. Berechnung nach dem Gewicht der Probe

Definition der Einheit: 1 nmol NADPH pro g Gewebe in 1 ml Reaktionssystem pro Minute katalysiert wird definiert als eine Einheit der Enzymdynamik.

GBSS-Aktivität (U / g frisches Gewicht) = [ΔA ÷ (ε × d) × V-Messung × 10⁹]÷ (W÷V Extraktion × V wie ÷V Gegensumme × V oben klar) ÷T = 432 × ΔA÷W.

V-Messung: Messvolumen, 0,26 m L; V-Probe: Probenvolumen hinzufügen, 0,1 m L; V Anti-Summe: Reaktionsvolumen, 0,31 mL; V Oberklarung: Oberklarung Flüssigkeit Volumen, 0,15 mL hinzufügen; V Extraktion: Extraktion Flüssigkeit Volumen, 1 x 10 hinzufügen^-3L;ε: NADPH-molarer Dämpfungskoeffizient, 6,22 x 10^-3mL/nmoL/cm； d: Durchmesser der Scheibe, 1 cm; T: Reaktionszeit, 2 min; Cpr: Proteinkonzentration der Probe, mg/mL； W: Probenqualität, g。

b.verwenden96Die Berechnungsformel für die Bohrplattenmessung lautet wie folgt:

Berechnung nach Proteinkonzentration:

Definition der Einheit: 1 nmol NADPH pro Minute pro mg Histoprotein im Reaktionssystem katalysiert wird definiert als eine Einheit der Enzymdynamik.

GBSS-Aktivität (U / mg prot) = [ΔA ÷ (ε × d) × V Messung] ÷ (Cpr × V wie ÷ V gegen Total × V oben) ÷ T = 720 × ΔA ÷ Cpr.

Diese Methode erfordert die eigene Bestimmung der Proteinkonzentration der Probe.

2. Berechnung nach dem Gewicht der Probe

Definition der Einheit: 1 nmol NADPH pro g Gewebe katalysiert pro Minute im Reaktionssystem definiert als eine Einheit der Enzymdynamik.

GBSS-Aktivität (U / g frisches Gewicht) = [ΔA ÷ (ε × d) × V-Messung] ÷ (W ÷ V-Extraktion × V-Muster ÷ V-Gegensumme × V-Klarheit) ÷ T = 720 × ΔA ÷ W.

V-Messung: Messvolumen, 0,26 m L; V-Probe: Probenvolumen hinzufügen, 0,1 m L; V Anti-Summe: Reaktionsvolumen, 0,31 mL; V Oberklarung: Oberklarung Flüssigkeit Volumen, 0,15 mL hinzufügen; V Extraktion: Extraktion Flüssigkeit Volumen, 1 x 10 hinzufügen^-3L;ε: NADPH-molarer Dämpfungskoeffizient, 6,22 x 10^-3mL/nmoL/cm； d: Durchmesser der Scheibe, 1 cm; T: Reaktionszeit, 2 min; Cpr: Proteinkonzentration der Probe, mg/mL； W: Probenqualität, g。

Bindende Stärkesynthetase-Aktivität-Test-Kit SpurmethodeBestellanweisung:

Die meisten Produkte sind auf Lager und können in der Regel am selben Tag bestellt werden.
Einige sehr gebrauchte Produkte müssen 1-2 Tage im Voraus gebucht werden, während ausländische Futures 3-6 Wochen im Voraus gebucht werden müssen.
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5. Bitte, nachdem Sie die Zahlung abgeschlossen haben, benachrichtigen Sie uns mit der Adresse des Empfängers, dem Namen usw. durch Fax, SMS usw.

Verkehrsanweisungen:

Extrem niedrige Temperaturprodukte: Trockeneis während des Transports von extrem niedrigen Temperaturprodukten. Verpacken Sie das Produkt mit Trockeneis, versiegeln Sie es mit Schaumstoffkasten, kleben Sie die Schaumstoffkasten auf einer Klebebandschicht, legen Sie sie in die Schachteln von Soleilbao und liefern Sie sie dann an den Kooperationscourier, sicheren, schnellen und effizienten Kunden, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Kryotemperaturprodukte: Solibao Eisbeutel werden während des Transports von Kryotemperaturprodukten aufgefüllt. Verpacken Sie das Produkt im Voraus mit einem Eisbeutel, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band, versiegeln Sie die Schaumstoffkaste mit einem Band und legen Sie sie in die Schachtel von Soleilbao (die Wärmedämmung kann eine Woche dauern), und liefern Sie sie an die Kooperationscourier, die sichere, schnelle und effiziente Hand des Kunden liefert, um die Stabilität des Produkts zu gewährleisten und Ihr Experiment zu begleiten.
Normale Temperaturprodukte: Kein Eis oder eine spezielle Verpackung sind während des Transports erforderlich. Die schnelle Lieferung von Produkten durch das Lagerpersonal des Unternehmens garantiert eine schnelle Lieferung in Ihre Hände.