Humane Typ II Lungenfollikuläre Epithelzellen Marke

Popular Tubal Epithelzellen

Grundeigenschaften der Zelle

Kulturmedium: Enthält FBS, Wachstumsadditive, Penicillin, Streptomycin usw.

Frequenz des Wechsels: alle 2-3 Tage

Eigenschaften: 2-3 Generationen übertragen

Verdauungsflüssigkeit: 0,25% Bauchspeicheldrüse

Kulturbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; CO2，5%

Zellprofil: Foliotherale Epithelizellen trennen sich aus dem aerotrophen Gewebe; Trachea, ein Teil des Atemorgans; Für die hintere Wand leicht flache zylindrische Rohre. Der obere Ende ist der untere Rand der sechsten Halswirbelsäule, der mit dem ringförmigen Knorpel verbunden ist; Abwärts zur Kreuzung des vierten und fünften Brustwirbelkörpers (entsprechend der Oberfläche der Brustknoche), teilen Sie die linke und die rechte Hauptbronche, die Gabel wird als Luftrohr bezeichnet. Das Atemrohr besteht hauptsächlich aus 14-16 halbringigen Knorpeln, die elastisch sind, der Knorpel ist der Knorpelring mit dem Buchstaben "C", der Spalt rückwärts ist, jeder Knorpelring ist mit einem Band verbunden, der Spalt hinter dem Ring ist durch glatte Muskeln und dichtes Bindegewebe verbunden und bleibt kontinuierlich geöffnet. Die Röhre ist mit Schleimhaut ausgekleidet, die Oberfläche bedeckt die Fibre Epithelium, der Schleimhaut sekretiert Schleim kann in die Luft eingeatmeten Staubpartikel haften, und die Fibre schwankt ständig in Richtung der Kehle, um den Schleim und den Staub zu entfernen, um das eingeatmete Gas zu reinigen. Der Atemwegs-Epithelium ist die erste Verteidigungslinie für den Kontakt mit der äußeren Umgebung, nicht nur die Zielzellen, die verschiedene Pathogene und entzündliche Medien wirken, sondern auch als Wirkung auf die Zellsynthese, die Freisetzung einer Vielzahl von entzündlichen Medien und Zytofaktoren, die an Atemwegentzündungen und Immunreaktionen beteiligt sind. In vitro kultivierte primäre air管epitheliale Zytokine haben eine große Ähnlichkeit mit in vitro Geweben in Bezug auf morphologische Struktur und funktionelle Aktivität und sind daher in der Grundlagenforschung und in der klinischen Studie von großer Bedeutung.

Ideen der primitiven Zelltrennung Kultur:

Abholung - Trennung - Kultivierung - Identifizierung

Zunächst wird das Gewebe aus dem Körper entnommen, nach der Behandlung mit Pankreas-Leutase / Kollagen in einzelne Zellen verteilt und dann in einem geeigneten Kulturmedium kultiviert, um die Zellen auf einen bestimmten Koeffizienten zu vermehren.

Experimentelle Schritte:

1. Nehmen Sie 7-10d männliche SD-Ratten, die Halswirbelsäule dislociert und sterilisiert in 75% Ethanol für 3-5 min.

Im ultrareinen Arbeitstisch wird die Ratte in eine Glasplatte abgeschnitten, das gesamte Gehirn nach dem Öffnen der Schädelhöhle entfernt und in eine vorgekühlte PBS-Glasplatte gelegt, um das Kleinhirn und das Zwischenhirn zu entfernen.

Rollen Sie die Gehirnhalbkugel langsam auf trockenem Filterpapier, um die weiche Gehirnhaut und die megavaskulären Gehirnhaut zu entfernen, und legen Sie sie in eine neue, vorgekühlte PBS-Glas-Petrischale.

4. Entfernen Sie das weiße Gehirn, die restlichen großen Blutgefäße und die weiche Gehirnhaut mit einer feinen Anatomie, um die Gehirnbarkeit zu erhalten.

5. Gehirnbarkeit in DMEM, schneiden in etwa 1 mm 3 Größe, in 50 ml Zentrifugerrohr, Mixase Flüssigkeit I (0,05-0,1% Typ II Kollagen, 0,025-0,05% Typ IV Kollagen, 200-400U DNase I) hinzufügen, nach Mischung 37 ° C Wasserbad verdauen 1-1,5 h.

6. Raumtemperatur 1 000 x g Zentrifuge 8 min, auf die reine Flüssigkeit.

7, 20% BSA schwere Suspension in der Niederschlagung hinzufügen, vollständig vermischen, 1 000 x g, 20 min, 4 ° C zentrifugieren, gehen Sie auf die Reinigung.

8. Fällung mit 4 ml Hybridase II (0,05-0,1% Kollagen / Dispersionsenzyme, 0,05-0,1% Kollagen Typ I, 100-300U DNase I) schwer suspendiert, gemischt, 37 ° C Wasserbad verdauen 0,5-1 h, 700 x g Raumtemperatur Zentrifuge 6 min, auf die reine Flüssigkeit.

9. Fällung mit 2 ml DMEM-Kultursuspension gemischt, auf 12 ml 50% Percoll (25 000 x g, 60 min, 4 ° C), 1000 x g, 4 ° C, 10 min zentrifugiert, um kontinuierliche Gradienten zu bilden.

10. Die weiß-gelbe Schicht über der roten Blutkörperchen-Schicht in der Nähe des Bodens ist der gereinigte Mikrogefäßsegment, nach dem Aussaugen des DMEM zweimal gespült wird (Zentrifuge 1000 x rpm, 6 min, Raumtemperatur), auf die Reinigung.

Zugabe von DMEM-Kultur (20% FBS, 4 µg/ml Lin) resuspendiert, in einer Zellpetrieschale mit 5% Serum von Ratten, die über Nacht bei 37 ° C inkubiert wurde, in einer 37 ° C, 5% CO2-Kammer, um die Kultur 24 h nach dem Austausch des nicht-enthaltenen Mischmediums in einer Kultur zu setzen und am nächsten Tag zu wechseln.

Hinweis:

1. Kultivierung basierend auf 4 ° C kann 3-6 Monate aufbewahrt werden.

2. Achten Sie während der Zellkultur darauf, dass Sie steril arbeiten.

3. Im Verlauf der Generationskultur sollte die Verdauungszeit des Yi-Enzyms nicht zu lang sein, sonst wird es die Zellwand und ihren Wachstumszustand beeinflussen.

4. empfiehlt dem Kunden, in den ersten 3 Tagen nach Erhalt der Zelle mehrere Zellfotos zu machen, um den Zellstand aufzuzeichnen und die Kommunikation mit der Technik zu erleichtern; Aufgrund des Transports können einzelne empfindliche Zellen instabil sein, kontaktieren Sie uns bitte rechtzeitig und informieren Sie uns über die spezifische Situation der Zelle, damit unsere Techniker nachverfolgen und zurückkehren können, bis das Problem gelöst ist.

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