Zebrafisch Tyrosinase (TyR)elisa Test Kit

Zebrafisch Tyrosinase (TyR)elisa Test KitÜbersicht der Standard-Betriebsanweisungen zur Referenz. Die konkreten Schritte gelten bitte für die tatsächliche Test-Kit-Anleitung.

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Vorbereitung vor dem Experiment

1. Reagenzien und Materialien

   • Kit (mit Standardprodukten, Testantikörpern, Enzym-Markierungsplatten, Substrat A/B, Terminationsflüssigkeit, Waschflüssigkeit, Dichtmembran usw.).
   • Proben (Serum, Plasma, Gewebehomogen usw.).
   • 37°C Thermostat, Zentrifuge, Pipette, Plattenwaschmaschine (oder Handwäsche), Enzym-Calibrator (450 nm Wellenlänge).

2. Probenbehandlung

   • Serum / Plasma: Zentrifugieren (3000 x g, 10 min) und entnehmen Sie das Serum.
   • Gewebe Homogenisierung: Nach Homogenisierung zentrifugieren (5.000 x g, 10 Minuten) und entfernen.
   • Die Probe muss wiederholtes Gefrierschmelzen vermieden werden, kurzfristig bei 4 ° C oder langfristig bei -80 ° C aufbewahrt werden.

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II. Betriebsschritte

1. Standardzusammenstellung

• Das Standard-Gefriertrocknenpulver wird mit einer Verdünnungsflüssigkeit gelöst und nach dem Gradienten der Anleitung verdünnt.

2. Prüfung

• Zu jedem Loch werden 100 μL Proben oder Standardprodukte hinzugefügt und ein leeres Loch aufgestellt.
• Abdecken Sie die Folie und inkubieren Sie bei 37 ° C für 90 Minuten.

3. Waschen

• Entfernen Sie die Flüssigkeit im Loch, fügen Sie 350 μL Waschflüssigkeit pro Loch hinzu, lassen Sie nach 30 Sekunden wegwerfen und wiederholen Sie dies 3 Mal. Die restlichen Flüssigkeiten schütten.

4. Erkennung von Antikörper Inkubation

• Zu jedem Loch werden 100 µL biotinierte Antikörper-Arbeitsflüssigkeit hinzugefügt und 60 Minuten bei 37 ° C inkubiert.
• Waschen Sie dreimal (Schritt 3).

5. Farbreaktion

• Zu jedem Loch werden 100 µL Enzymverbindungen (HRP-Marker) hinzugefügt und 30 Minuten lang bei 37 ° C mit Lichtschutz inkubiert.
• Waschen Sie 5 Mal (Chedi Entfernung Waschmittel).

6. Beenden von Reaktionen und Lesungen

• Zu jedem Loch fügen Sie 50 µL Termination und messen Sie den OD-Wert mit einem Enzym-Calibrator in einer Wellenlänge von 450 nm innerhalb von 15 Minuten.

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III. Berechnung der Ergebnisse

1. Zeichnen einer Standardkurve
   • Die Standardkonzentration als horizontale Koordinate und der OD-Wert als longitudinale Koordinate passen an die Standardkurve (das häufig verwendete Vierparametermodell der Logistik).
2. Berechnung der Probenkonzentration
   • Berechnen Sie die LPA-Konzentration anhand der Standardkurvenformel durch den OD-Wert der Probe.

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IV. Hinweise

1. Kreuzverschmutzung streng vermeiden und den Pistolenkopf bei der Probenahme ersetzen.
2. Der Waschstritt erfordert Chedi, um verbleibende Auswirkungssignale zu vermeiden.
3. Standardprodukte und Reagenzien müssen nach der Verwendung auf Raumtemperatur zurückgesetzt werden.
4. Die Endflüssigkeit ist korrosiv und benötigt beim Betrieb Handschuhe.
5. Wenn der OD-Wert den Standardkurvenbereich übersteigt, muss das Verhältnis der Probenverdünnung angepasst werden.

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