Zebrafisch Acetylcholin (ACH) Elisa Test Kit OD Wert

Zebrafisch Acetylcholin (ACH) Elisa Test Kit OD WertVorbehandlungsverfahren der Probe und Hinweise nach Erhalt des Kits, für Referenz:

Vorbehandlungsverfahren für Proben

Unterschiedliche Probentypen können unterschiedlich behandelt werden und müssen strikt nach der Anleitung des Kits gehandelt werden. Hier sind die wichtigsten Behandlungspunkte für häufige Probentypen:

1. Serum/Plasma

• Sammlung: Sammeln Sie Blut mit EDTA oder Hepatin-Antikoagulanten, die keine Detektionsindikatoren enthalten, um Hemolyse zu vermeiden.
• Zentrifugieren: 2.000-3.000 × g, 4 ° C Zentrifugieren für 10-15 Minuten, Serum / Plasma trennen.
• Aufbewahrung: nach der Aufteilung bei -80 ° C gefriert (vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen), kann kurzfristig bei -20 ° C gelagert werden (muss so schnell wie möglich erkannt werden).

2. Organisationsanordnung

• Entnahme: frisches Gewebe, trockenes Wasser nach physiologischem Salzwasser spülen.
• Homogarisierung: Vorgekühltes PBS oder Lysate (mit Protease-Inhibitoren) nach Gewicht (g): Volumen (mL) = 1: 9-10 zugegeben und 30 Minuten auf Eis gelassen.
• Zentrifugieren: 12.000 × g, 4 ° C Zentrifugieren für 10-15 Minuten, nehmen Sie klar.
• Aufbewahrung: mit Serum / Plasma.

3. Zell-Lysate

• Sammeln Sie die Zellen: Wäschen Sie die Zellen 2-3 mal mit PBS und entfernen Sie sie zentrifugierend.
• Cracking: RIPA-Crack (mit Protease-Inhibitoren) hinzufügen, Ultraschallbrechen oder wiederholte Gefrierschmelze-Cracking.
• Zentrifugieren: 12.000 × g, 4 ° C Zentrifugieren für 20 Minuten, nehmen Sie klar.
• Aufbewahrung: ibid.

4. Stuhl/andere biologische Proben

• Vorbehandlung: Der Stuhl muss nach Absorption mit einem Lösungsmittel (wie Chlorform-Methanol-Mischung) extrahiert werden, um Lipide zu extrahieren und nach Zentrifugierung die organische Phase zu trocknen und wieder zu lösen.
• Aufbewahrung: Vermeiden Sie Oxidation, empfohlen wird, nach der Trennung -80 ° C zu bewahren.

Wichtige Hinweise:

• Vermeiden Sie eine Lipid-Kontamination (z. B. bei der Entfernung von Lösungsmittelrückständen mit Chlorform).
• Die Proben können endogene Bindeproteine enthalten und müssen dafür sorgen, dass sie ausreichend spaltet werden.
• Vermeiden Sie wiederholtes Gefrierschmelzen (es wird empfohlen, es in Teilen zu bewahren).

2. Behandlung nach Erhalt der Kit

1. Überprüfen Sie die Integrität des Kits:

   • Bestätigung von Reagenzien, Kalibrierungsprodukten, Qualitätskontrollen, Anleitungen usw.
   • Überprüfen Sie, ob die Flasche gut versiegelt ist und keine Leckagen oder Schichtungen auftreten.

2. Aufbewahrungsbedingungen:

   • Nicht geöffnete Kits: Lagern Sie nach den Anforderungen der Anleitung (in der Regel bei 2-8 ° C).
   • Geöffnetes Reagenz: kurzfristige Verwendung kann bei 2-8 ° C gelagert werden, langfristige Aufbewahrung bei -20 ° C (z. B. Enzym-Markierungsplatten müssen Aluminiumfoliebeutel versiegelt werden).

3. Aufteilung und Verwendung:

   • Kalibrierungsprodukte und Qualitätskontrollen sollten nach der Verteilung gefriert werden, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.
   • Zurück auf Raumtemperatur (15-30 Minuten) vor dem Einsatz des Reagents, um eine plötzliche Temperaturänderung zu vermeiden, die die Reaktion beeinflusst.

4. Kalibrierung und Qualitätskontrolle:

   • Bei der Herstellung von Standardkurven müssen Kalibrierungsprodukte streng nach Konzentrationsgradienten verdünnt werden.
   • Die Ergebnisse der Qualitätskontrolle sollten im zulässigen Umfang liegen, sonst müssen Betriebs- oder Reagenziprobleme behoben werden.

Häufige Fragen und Lösungen

1. Niedrige oder hohe OD-Werte nach der Probenbehandlung:

   • Überprüfen Sie, ob die Probe abgebaut ist (z. B. eine falsche Konservierung führt zu einer Oxidation).
   • Überprüfen Sie, ob das Verdünnungsvermögen der Probe angemessen ist (außerhalb des linearen Bereichs muss angepasst werden).

2. Farbabweichungen (z. B. hoher Hintergrund, ungleichmäßige Farben):

   • Überprüfen Sie, ob die Einbindung der Endflüssigkeit zu übermäßig oder unzureichend ist.
   • Bestätigen Sie, ob die Inkubationszeit und die Temperatur den Anforderungen entsprechen.

3. Die Kalibrierkurve ist nicht ideal:

   • Überprüfen Sie, ob die Standardprodukte richtig aufgelöst sind und ob Verschmutzung vorhanden ist.
   • Bestätigen Sie die Einstellung der enzymatischen Skalierwellenlänge (in der Regel 450 nm ± 10 nm).

4. Das Reagenz funktioniert nicht:

   • Wenn das Kit nicht ordnungsgemäß gelagert wird (z. B. wiederholtes Gefrierschmelzen oder hohe Temperaturen), kann dies zu einem Ausfall des Reagents führen, wird empfohlen, den Lieferanten zu ersetzen.

Weitere Empfehlungen

• Pre-Experiment Pre-Experiment zur Optimierung der Probenverarbeitungsschritte (z. B. verschiedene Gewebe können die Cracking-Bedingungen anpassen müssen).
• Kreuzverschmutzung streng vermeiden (mit speziellen Pipettenkopfen, Platten).
• Bei abweichenden Ergebnissen wird eine Überprüfung empfohlen oder der technische Support des Kit-Lieferanten kontaktiert.

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