ZETA LIFE Zellprogramm und Toxizitätstest - CCK Kit

ZETA LIFE Zellprogramm und Toxizitätstest - CCK Kit

Preis: ¥615 - 2800

Marken:ZETA Leben.

Warennummer:K009

Herkunftsort:Vereinigte Staaten

Lieferant:ShanghaiLeitongBiotechnologie GmbH

Menge:1000

Englischer Namevon:cck8

Haltbarkeitsdauer24 Monate

Speicherbedingungen4°C Lichtschutz

Spezifikation:500T-3000T

ZETA LIFE Zellprogramm und Toxizitätstest - CCK Kit

Das CellCounting Kit, kurz CCK-Kit, ist ein schnelles, hochempfindliches Testkit auf Basis von WST (wasserlösliches Tetrazol-Salz, chemischer Name: 2- (2-Methoxy-4-Nitrophenyl) -3- (4-Nitrophenyl) -5- (2,4-Disulfobenzyl) -2H Tetrazol-Mononatriumsalz), das weit verbreitet wird, um Zellprogramm und Zytotoxicität zu erkennen.

CCK ist eine Upgrade-Alternative zu MTT und hat offensichtliche Vorteile gegenüber MTT oder anderen MTT-ähnlichen Produkten wie XTT.

Formazan, das durch Dehydrogenase in den Mitochondrien reduziert wird, ist wasserlöslich und braucht keine spezifische Lösung, um sich zu lösen, während WST und XTT, MTS durch Formazan nicht wasserlöslich sind, so dass nachfolgende Lösungsschritte gespart werden können.

CCK ist stabiler als XTT und MTS und macht die Ergebnisse stabiler.

CCK und MTT, XTT etc. haben einen breiteren Bereich und eine höhere Empfindlichkeit als linear.

Vergleich zwischen CCK und anderen Testmethoden:

Betriebsanweisung:

Erstellen von Standardkurven (bei der Bestimmung der spezifischen Anzahl von Zellen)

1. Zählen Sie zuerst die Anzahl der Zellen in der hergestellten Zellsuspension mit der Zellzählplatte und impfen Sie die Zellen.

2, im Verhältnis (zum Beispiel: 1/2 Verhältnis) in der Folge mit dem Medium-Gleichgewicht verdünnt in - eine Zellkonzentrationsgradient, in der Regel 3-5 Zellkonzentrationsgradiente, jede Gruppe von 3-6 Komplexporen.

3, nach der Impfung Kultur 2-4 Stunden, um die Zellen zu kleben, dann CCK-Reagenz-Kultur hinzufügen - nach der Bestimmung der Zeit, um den OD-Wert zu bestimmen, um eine Zellzahl als Querkoordinaten (X-Achse) zu erstellen,

Der OD-Wert ist die Standardkurve der longitudinalen Koordinaten (Y-Achse). Auf der Grundlage dieser Standardkurve kann die Anzahl der Zellen in unbekannten Proben bestimmt werden (diese Standardkurve wird unter den Bedingungen des Experiments getestet).

Es erleichtert die Bestimmung der Anzahl der Impfungen der Zellen und der Kultivzeiten nach dem Zugang zu CCK).

II. Testen der zellulären Aktivität

Impfen Sie die Zellsuspension in 96-Loch-Platten (100 µl-Loch). Die Platte wird in einem Kühlraum vorkultiviert (bei 379C, 5% CO2).

Fügen Sie 110ul CCK-Lösung zu jedem Loch hinzu (achten Sie darauf, dass keine Blasen im Loch erzeugt werden, sie können die OD-Werte beeinflussen).

3. Inkubieren Sie die Platte 14 Stunden in der Kultivkammer.

4. Messung der Absorption bei 450 nm mit einem Enzym-Skalierer.

Wenn die OD-Werte vorübergehend nicht bestimmt werden, können 10 µl 0,1 M HCL-Lösung oder 1% wIv SDS-Lösung in jedes Loch hinzugefügt werden und die Kultur bedeckt werden.

Die Platte bleibt bei Raumtemperatur geschützt. Die Absorption ändert sich innerhalb von 24 Stunden nicht.

3. Zellverwertung - Toxizitätstest

Konfigurieren Sie 100 µ Zellsuspension in einer 96-Loch-Platte. Die Platte wird 24 Stunden (bei 379 ° C, 5% CO2) in der Kühlkammer vorkultiviert.

2. Fügen Sie der Kultivplatte 10 ul unterschiedliche Konzentrationen der zu testenden Substanz hinzu.

Inkubieren Sie die Platte für eine angemessene Zeit (z. B. 6, 12, 24 oder 48 Stunden) in der Schacht.

4, möchte jedes Loch 10ul CCK-Lösung hinzufügen (Achten Sie darauf, dass keine Blasen in dem Loch erzeugt werden, sie beeinflussen die OD-Werte).

Inkubieren Sie die Platte für 1-4 Stunden in der Kultivkammer.

6. Messung der Absorption bei 450 nm mit einem Enzym-Skalierer.

Wenn die OD-Werte vorübergehend nicht bestimmt werden, können 10 µl 0,1 M HCL-Lösung oder 1% wIv SDS-Lösung in jedes Loch hinzugefügt werden und die Kultivplatte unter Raumtemperatur abdecken. Die Absorption ändert sich innerhalb von 24 Stunden nicht.

Hinweis: Wenn die zu testende Substanz oxidativ oder reduktiv ist, kann ein frisches Medium ersetzt werden, bevor CCK hinzugefügt wird (das Medium entfernt und die Zellen zweimal mit dem Medium gewaschen und dann ein neues Medium hinzugefügt), um die Wirkung des Arzneimittels zu entfernen. Natürlich kann in Fällen, in denen die Wirkung des Arzneimittels relativ gering ist, das Medium nicht ersetzt werden und die Absorption von Leeren nach dem Hinzufügen des Arzneimittels direkt in das Medium abgezogen werden.

Vorbereitung:

①Es wird empfohlen, zuerst einige Löcher zu tun, um die Anzahl der impften Zellen und die Kultivzeit nach dem Hinzufügen des CCK-Reagents zu probieren.

②Unter bedingten Umständen wird ein Mehrkanalpipett empfohlen, der den Unterschied in der Parallelporrelaufnahme verringern kann. beitreten

CCK-Reagenz wird empfohlen, schräg auf die Kulturplatte Wand hinzufügen, nicht in die Mediumseite hinzufügen, leicht Blasen zu erzeugen, wird die OD-Wert-Lesungen stören.

③Weiße Blutkörperchen können länger kultiviert werden.

④Bei der Verwendung einer Standard-96-Loch-Platte beträgt die kleine Impfmenge der klebenden Zellen mindestens 1.000 Stück / Loch L (100u Medium). Die Empfindlichkeit bei der Erkennung von weißen Blutkörperchen ist relativ gering, daher

Die empfohlene Impfmenge ist nicht weniger als 2500/F-Bohren (100ul Medium). Wenn Sie ein 24-Loch-Platten- oder 6-Loch-Platten-Experiment verwenden möchten, berechnen Sie zuerst die entsprechende Impfmenge pro Loch und fügen Sie eine CCK-Lösung nach 10% des Gesamtvolumens des Mediums pro Loch hinzu.

⑤Wenn es keinen 450nm-Filter gibt, können Filter mit einer Absorptionsgrad zwischen 430 und 490 nm verwendet werden, aber die Erkennungsempfindlichkeit des 450nm-Filters ist höher.。

⑥Die Absorption von Phenol-Rot im Medium kann bei der Berechnung durch Abzug der Absorption des Bodens im leeren Loch entfernt werden, so dass es keine Auswirkungen auf die Detektion hat.

Berechnung:

Zellvitalität* (%) =[A(Addition)-A(Blank)]/[A(0 Addition)-A(Blank)]x100

A (Dosierung): Absorptionsgrad von Löchern mit Zellen, CCK-Lösungen und Medikamentlösungen

A (Leere): Absorption von Löchern mit Medium und CCK-Lösung ohne Zellen

A (0-Dosierung): Absorptionsgrad von Löchern mit Zellen, CCK-Lösung ohne Medikamentlösung

* Zellstärke: Zellprogrammstärke oder zytotoxische Wirksamkeit

Speicherbedingungen:

49C Lichtschutz für ein Jahr.

Hinweis: Kann nicht zur klinischen Behandlung verwendet werden.