Universal SYBR Grün qPCR Mix

Lagerbedingungen

Langfristige Aufbewahrung Bitte bei -20 ° C vor Licht aufbewahren, kann Mix nach dem Schmelzen einen Monat unter 4 ° C vor Licht gelagert werden, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

Produktkomponenten

Universal SYBR Grün qPCR Mix

Produktbeschreibung

Universal SYBR Grün qPCR MixDas ist SYBR. ® Das spezielle qPCR-Reagenz für die Green I-Chimerische Farbstoff-Methode, eine 2-fache Vormischung, enthält alle qPCR-Komponenten mit Ausnahme von Prototypen und DNA-Proben und reduziert die Betriebsschritte, die Probezeiten und die Verunreinigungsmöglichkeiten. Die Kernkomponente ist die thermisch gestartete Taq-DNA-Polymerase, die durch Antikörper modifiziert wurde, in Kombination mit einem sorgfältig optimierten Puffersystem und einem PCR-Reaktionsförderer, so dass das Produkt spezifisch ist und eine hohe Amplifikationseffizienz aufweist, die nicht-spezifische Amplifikation effektiv hemmt und eine breite Konzentrationsreihe von Schablonen genau quantifiziert und stabile und zuverlässige qPCR-Ergebnisse erzielt. Die Vormischung enthält universelle Korrekturfärbstoffe, die mit den meisten qPCR-Geräten kompatibel sind, einschließlich Instrumenten, die eine ROX-Korrektur erfordern, wobei im Allgemeinen keine zusätzlichen Korrekturfärbstoffe während des Experiments hinzugefügt werden müssen.

Gebrauchsanweisung

1. Aufmerksamkeit verwenden

① Aufgrund der vorgemischten Farbstoffe in der Mischung sollte der Aufbewahrungs- oder Reaktionssystemzubereitungsprozess starke Lichtbelichtung vermeiden;

② Vor der Verwendung auf und nach unten rückgängig und sanft mischen Mix, nicht wirbeln Oszillierung Mischen, um zu vermeiden, dass zu viele Blasen zu erzeugen;

② Mix enthält Universal Korrektur Farbstoff, geeignet für alle Modelle, ohne zusätzliche Farbstoffe hinzuzufügen.

2. Empfohlene qPCR-Reaktionssysteme

a. Die empfohlene Endkonzentration des Primärs beträgt in der Regel 0,2 μM und kann im Bereich von 0,1 bis 1 μM angepasst werden, wenn die Reaktion schlecht ist;

Die empfohlene Probenmenge beträgt 1 bis 2 μl, wenn der Typ der Schablone unverdünnte cDNA ist, sollte die Menge der Schablone nicht mehr als 10% des gesamten Reaktionssystems überschreiten. Die Anzahl der Kopien des Zielgens, die in verschiedenen Arten von DNA-Vorlagen enthalten sind, variiert und kann bei Bedarf gradientiell verdünnt werden, um die optimale Menge an DNA-Vorlagen zu bestimmen.

qPCR-Reaktionsverfahren (entsprechend dem Modell anpassbar)Universal SYBR Grün qPCR Mix

Zwei Schritte

Drei Schritte

a. Einstellung der Ausbrenntemperatur nach dem Tm-Wert des Vorgangs; Wenn die Strecke innerhalb von 200 bps vergrößert wird, kann die Ausbrennzeit auf 15 sec eingestellt werden. Darüber hinaus müssen sich die Einstellungen für die Aushärtung und Verlängerung (Verlängerung) der Zeit auf die minimale Datenerfassungszeit anpassen, die Sie für das verwendete qPCR-Gerät benötigen;

b. Verschiedene qPCR-Geräte haben unterschiedliche Schmelzkurvenaufnahmeverfahren, in der Regel kann das Standard-Schmelzkurvenaufnahmeverfahren des Instruments verwendet werden.

4. Experimentale Optimierung

Bei schlechten Reaktionsleistungen unter Verwendung von Standardreaktionsbedingungen ist eine Optimierung der Reaktionsbedingungen erforderlich, die sowohl in Bezug auf die Primärkonzentration als auch auf das Verstärkungsverfahren durchgeführt werden kann:

Einrichtung der Konzentration

Wenn die Endkonzentration des Primärs im Bereich von 0,1 bis 1,0 μM variiert, ist je niedriger die Primärkonzentration, desto höher die Verstärkungsspezifizität, aber die Verstärkungseffizienz sinkt.

Erweiterungsprogrammoptimierung

Verbesserte Verstärkungsspezifizität, Zweischrittsverfahren oder Erhöhung der Brenntemperatur; Erhöhung der Vergrößerungseffizienz durch die Verwendung eines Drei-Schritt-Verfahrens oder Verlängerungszeiten.

5. Grundsätze des Designs

① Verstärkte Produktlänge wird empfohlen, bei 80 bis 200 bp zu kontrollieren;

Länge von 18 bis 25 bp;

3. Der Unterschied zwischen dem Tm-Wert des positiven und rückwärts liegenden Primiers ist nicht größer als 1 ° C, der Tm-Wert wird bei 58 ~ 62 ° C kontrolliert.

Der GC-Gehalt des Grundstoffs wird zwischen 40% und 60% kontrolliert;

5. Die gesamte Verteilung der Vorläufer A, G, C und T sollte möglichst gleichmäßig sein, um die kontinuierliche Struktur von T / C oder A / G (insbesondere das 3'-Ende) zu vermeiden;

Vorzugsweise ist die letzte Basis am 3'-Ende G oder C;

Vermeiden Sie eine komplementäre Sequenz innerhalb oder zwischen zwei Vorläufern;

Verwenden Sie die NCBI BLAST-Funktion, um die Spezifizität eines bestätigten Vorläufers abzurufen.

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