Transfektionsgrade lineares Polyethylenamin (MW25000)

Transfektionsgrade lineares Polyethylenamin (MW25000(1) ist ein Produkt auf der Basis von Polyethylenamin sofortige Transfektion Reagenz mit einer hohen Transfektionswirkung. Polyethylamid ist ein organisches Makromolekularpolymer mit hoher cation-ionischer Ladung, das sich leicht an negativ geladene Nukleinsäuremoleküle bindet und einen positiv geladenen Komplex bildet. Der Komplex bindet sich an die Anionen der Zelloberfläche und gelangt durch Intralusion in die Zelle. Das Transfektionsreagens hat eine geringe Zytotoxizität und eignet sich für eine Vielzahl von Zelllinien und ist weit verbreitet in recombinanten Proteinen,AAVProduktion usw.

1. Reagenzkonfiguration

Benötigte Materialien:

deionisiertes Wasser oder höheres biologisches Wasser,12 Mol/LSalzsäure (HCl）、10 Mol/L*（NaOH(Einmal)0.1~0.2μm PESVakuum sterile Filter, sterilHDPEoder Polypropylen Lagerflaschen.

Speicherflüssigkeitskonfiguration:

⑴ geben1 gTransfektionsgrade lineares Polyethylenamin25,000gelöst in900 mlEntionieren Sie das Wasser und rühren Sie (kann bis60-80C) Hinzufügen12 MSalzsäure, angepasst anpH-Wert＜2.0Rühren.3mehr als eine Stunde bis zur Auflösung;

⑵ Verwenden10 M* AnpassungpH-Wertbis6.9~7.1；

⑶ Die Lösung in den Zylinder (oder in die Tasse) übertragenInnerhalb, Wasser hinzufügenAnpassung an1 L；

⑷ Einmal verwenden0.2 µmFilter Vakuumfilterung Desterialisierung, die1 mg/mlLagerflüssigkeit;

⑸ Lagerflüssigkeit kann nach Bedarf aufgeteilt und in-20℃ aufbewahrbar1Jahr; Die Speicherflüssigkeit darf nach der Rückschmelzung nicht neu gefriert werden.

2. Transfektionsprozess

Impfung von Zellen: Um die Effizienz der Transfektion zu verbessern, wird empfohlen, die Zellen einen Tag vor der Transfektion zu impfen, um die Zelldichte bei der Transfektion zu erhöhen.in70~80%Für geeignet；

vorbereitenDie DNA- TransfektionsreagensKomplexe:

⑴ gebenDie DNATransfektionsmittel und Verdünnungsmittel werden zuerst auf Raumtemperatur zurückgekehrt;

⑵ Verdünnen Sie die angemessene Menge mit einem geeigneten proteinfreien MediumDie DNA；

⑶ In einem gewissen Verhältnis(Jeder1 μg DNABenötigt1 bis 5 μLTransfektionsreagens, empfehlen Sie, das Verhältnis selbst zu finden)Das verdünnte Transfektionsreagens wird in die Befüllung getropft.Die DNAPrüfrohre für Lösungen(Keine umgekehrte Reihenfolge hinzufügen)Auf der Seite.LeichtWirbeln, vollständig gemischtRaumtemperatur ruhig.10~25MinuteInkubieren。

Transfektierte Zellen:

⑴ Entfernen Sie das Zellkulturmedium bei Transfektion unter serolosen Bedingungen und ersetzen es durch seroloses Medium;

⑵ Zugabe ausreichender Mengen an ZellenDie DNA- TransfektionsreagensKomplexeLeicht vermischen.Transfektion.6-8Nach einer Stunde das frisch vorerhitzte Medium ersetzen；

⑶ in37℃、5 % CO₂AusbildungskastenMitteKultur nach Transfektion24StundenSo kann die Expression des transferierten Gens nachgewiesen werden (die geeignete Testzeit kann selbst festgelegt werden).

Transport- und Lagerbedingungen

Transportbedingungen: Raumtemperatur

Lagerbedingungen: Pulver bei Raumtemperatur oder4℃ Aufbewahrung, Gültigkeitsdauer2Jahr.

Hinweise

1. Für die meisten Zellen1 μg DNAverwenden3 μLTransfektionsreagenz kann eine höhere Transfektionseffizienz erzielen, kann auch versucht werden1 μg DNAverwenden1,5 bis 4 μLTransfektionsreagenzien optimiert werden.

2. Aus Gründen Ihrer Sicherheit und Gesundheit tragen Sie bitte experimentelle Anzüge und Einweg-Handschuhe.

3. Dieses Produkt dient ausschließlich wissenschaftlichen Zwecken.