Telomerlängenprüfung

Telomerlängendetektion (Telomer) ist eine spezielle Struktur des Endes der DNA des linearen Genoms der Eukarien, ein Komplex aus einer DNA-Sequenz und einer Proteinbildung, die keine Fusion zwischen den normalen Chromosomenden ermöglicht, die Integrität jedes Chromosoms gewährleistet, das Zellwachstum und den Teilungszyklus kontrolliert und eng mit Apoptose, Zelltransformation und Immortalisierung verbunden ist.

　　Telomerlängenprüfung(Telomere) ist eine spezielle Struktur des Endes der DNA des eukaryobiologischen linearen Genoms, ein Komplex aus einer DNA-Sequenz und einer Proteinbildung, die keine Fusion zwischen den normalen Enden des Chromosoms ermöglicht, die Integrität jedes Chromosoms gewährleistet, das Zellwachstum und den Teilungszyklus kontrolliert und eng mit der Apoptose, der Zelltransformation und der Immortalität verbunden ist. Die DNA eines menschlichen Telomers besteht aus wiederholten TTAGGG-Sequenzen (siehe Abbildung rechts).

Bei der Teilung einer normalen menschlichen Zelle ist die DNA-Replikation nicht in der Lage, einen kleinen Teil ihrer Sequenz am Ende zu replizieren, was dazu führt, dass sich die DNA nach jeder Teilung etwas verkürzt, was die "Chromosomende verschleiert". Da das Ende der DNA durch die Telomersequenz geschützt ist, verliert die DNA-Replikation nur einen Teil der Telomersequenz, ohne die normale DNA-Sequenz zu gefährden. Wenn sich die Zellen mehrmals replizieren und die Telomere bis zu einem gewissen Grad verkürzen, wird die normale DNA-Sequenz instabil und die Zelle beginnt zu altern und zu sterben. Studien haben gezeigt, dass menschliche Zellen unter normalen Umständen an Autotoxinen sterben, nachdem sie sich durchschnittlich etwa 50 Mal verteilt haben, die "Heflick-Grenze".

Diese Kit untersucht die relative Länge der Telomere mit zweifarbiger qPCR-Fluoreszenz (SYRBgreen + VIC) auf Blut, Mundswabs oder Zell-DNA. Diese Kit hat folgende Merkmale.

1. Stabil: Ganz geschlossener Betrieb, keine Kreuzverschmutzung.

2. Zuverlässig: Detektion von Telomeren und Innenrohren, um Interferenzen zwischen den Löchern zu reduzieren.

Die Unterschiede zwischen den Binnenbasen und den Telomeren reduzieren sich aufgrund der Mehrkopie.

3. Bequem: Einfache Bedienung, keine Elektrophorese-Schritte erforderlich.

Quantitativ: CT-Wert, kann die relative Länge der Telomere quantitativ erkennen.

　　TelomerlängenprüfungEs ist ein relativ einfacher Test, der keine großen Mengen an Ausgangs-DNA (etwa 50 ng) erfordert. Durch die Messung des Telomer-Signals (T) und des Referenz-Single-Kopie-Gen-Signals (S) wird das T / S-Verhältnis berechnet, das positiv proportional zum durchschnittlichen TL (Telomer-Länge, Telomer-Länge) ist und daher zur Bestimmung des relativen TL verwendet werden kann. Da die Natur dieser Technik auf die Erkennung von hohen Durchflussen angewendet werden kann, wird sie weit verbreitet in großen Bevölkerungsstudien verwendet. Da Q-PCR jedoch nur relativ quantitativ liefert, werden die Daten in der Regel nicht als absolute Telomerlänge in kb dargestellt, es sei denn, sie werden mit Referenzzelllinien mit durchschnittlichen TL verglichen, die durch eine andere Methode bestimmt werden. Es gibt Studien, die zeigen, dass der Variationskoeffizient der Ergebnisse dieser Methode höher als 10% sein kann. Und aufgrund der Verwendung verschiedener Single-Kopie-Gene können die Ergebnisse zwischen den verschiedenen Laboren stark variieren. Darüber hinaus liefert Q-PCR keine Informationen über das kürzeste Telomer. Schließlich ist Q-PCR für TL-Messungen möglicherweise nicht für Krebsstudien geeignet, in denen die Kopien der Gene in der Binnenliste aufgrund der Nicht-Integer-Multiplizierung repliziert oder verloren gehen können. Daher beschränkt sich die Anwendbarkeit der Q-PCR auf Proben mit normalem Duplex- und Nukleotypstabilität.

Telomere sind nicht-kodierende sequenzielle Wiederholbarkeit (TTAGGG) n-Sequenzen an den Enden der linearen Chromosomen aller Wirbeltiere. Einkettige Suspension am 3'-Ende des Telomers dringt in die doppelkettige DNA ein und bildet einen T-Ring, der auch zu einer Kettenverschiebung führt, die einen einkettigen Telomer-D-Ring erzeugt. Der T-Ring ist eine spezielle Struktur des Telomers, die direkt oder indirekt an den Telomer-Protein-Komplex Shelterin gebunden ist, um das Chromosomende nicht als DNA-Doppelkettenfruch zu schützen.

Telomere sind eine spezielle Struktur, die aus wiederholten DNA-Sequenzen und speziellen Telomer-Bindungsproteinen besteht, bei denen die Telomere von Wirbeltieren aus einer g-reichen, kurzen, doppelkettigen, wiederholten Sequenz ttaggg-Sequenzen bestehen. Telomere verhindern den Abbau, die Fusion und die Umordnung von Chromosomenden, wodurch die Unabhängigkeit, Integrität und Stabilität des Chromosoms erhalten werden. Obwohl Telomere keine kodierende Funktion haben, werden sie von Wissenschaftlern als "Uhr des Lebens" bezeichnet, da die Länge und Stabilität der Telomere die Lebensdauer der Zelle steuern und eng mit der Krebsentwicklung und dem Altern der Zelle verbunden sind.

In normalen menschlichen Körperzellen wird die Länge des Telomers allmählich mit der Zellteilung verkürzt, jede Zellteilung verkürzt die Telomerlänge um einen Abschnitt, Verlust von 20 bis 30 Nukleotiden, wenn das Telomer auf ein gewisses Maß verkürzt wird, wird der Fehler der Nukleoproteinstruktur induziert, das replizierende Altern auslöst, die Zellprogramm verlangsamt, das Wachstum stagniert, trockene Abnahme, den Verlust der Differenzierungsfähigkeit und andere Phänomene. Gleichzeitig kann der Verlust bestimmter telomerenspezifischer Bindeproteine auf den verkürzten Telomeren dazu führen, dass die Zellen das Endteil des Telomers falsch als DNA-Bruchstelle erkennen, wodurch die DNA-Reparaturfunktion gestartet wird, was zu einer Endfusion zwischen den kurzen Telomer-Chromosomen führt, die Chromosomenfusion verursacht eine Anomalie der Zellmitose, der Zellzyklus stagniert und somit die Apoptose auslöst, die durch das p53-Protein induziert wird.

Darüber hinaus können Zellen mit Genmutationen wie p53, die zu einem defekten Zellzyklus-Detektionspunkt führen, über das replizierende Altern springen und sich kontinuierlich teilen und schließlich in eine Krisenphase eintreten, in der sehr wenige Zellen Telomerase ausdrücken, die Telomerase-Aktivität aktivieren, die Zelltelomerlänge reparieren und aufrechterhalten, so dass die Zellen zu Krebszellen lebendig werden. Überkürzung der Telomere und Telomeraseaktivität wurden in 90% der Krebszellen wie Rektalkrebs, Brustkrebs, Lungenkrebs und Prostatakrebs gefunden. Zu den Erkrankungen, die durch Telomeranormalien verursacht werden, zählen Leukämie, regenerative Anämie, Knochenmarksproliferation und angeborene Hornität. Telomere spielen eine äußerst wichtige Rolle im Prozess des menschlichen Alterns und der Entstehung von Krankheiten, und die Änderung der Länge der sich wiederholenden Telomersequenzen bestimmt das Schicksal der Zelle.TelomerlängenprüfungEs ist eine wichtige experimentelle Methode in der Telomerbiologie.

AußerdemTelomerlängenprüfungEs hat auch einen wichtigen diagnostischen Wert bei Alterserkrankungen und Tumoren. Aufgrund der Artenunterschiede ist die Telomerlänge des menschlichen Chromosoms (die Länge der Doppelkette liegt in der Regel zwischen 0,5 und 20 kb) deutlich kleiner als die meisten Labormodellen. Und der Grad der Telomerverkürzung in verschiedenen Zellen verschiedener Individuen ist unterschiedlich, und der Grad der Telomerverkürzung in verschiedenen Chromosomen in der Zelle ist unterschiedlich; Während Telomere mit einer Länge von weniger als 3 kb als kurze Telomere definiert werden, spielen die kürzesten Telomere statt der durchschnittlichen Telomerlänge eine wichtige Rolle beim Verlust der Telomerfunktion, der induzierung von DNA-Schäden und der Einschränkung des Zellallebens. Daher ist dringend eine Methode erforderlich, die menschliche Telomerlängen und kurze Telomerverhältnisse auf einzelner Chromosomenebene genau, einfach, schnell und mit hohem Durchsatz erkennen kann.

Während der Entwicklung von Telomer-bezogenen genetischen Erkrankungen führen Telomere, wenn sie kürzer sind, zu einem frühen Auftreten der Erkrankung. Mit der vertiefenden Forschung wird auch zunehmend erkannt, dass Lebensstilfaktoren wie Fettleibigkeit, Rauchen, Mangel an Bewegung und chronischer Stress die Länge der Telomere in den zirkulierenden peripheren weißen Blutkörperchen beeinflussen können. Darüber hinaus ist die Telomerkürzung, die zu Telomer-Dysfunktion führt, mit vielen altersbedingten Erkrankungen wie Unfruchtbarkeit, Arthritis, Diabetes, Krebs, Herz-Kreislauf- und neurodegenerativen Erkrankungen verbunden. Daher ist eine stabile und wiederholbare Methode zur Telomerlängenmessung wichtig, die das Auftreten dieser Erkrankungen vorhersagen kann.

Grundsätzlich sind jedoch alle veröffentlichten Massenpopulationsstudien zu telomerenbezogenen Erkrankungen im Wesentlichen Korrelationsstudien, die nur Informationen über die durchschnittliche oder relative Länge der Telomere liefern. Es gibt viele Hinweise darauf, dass die kürzesten Telomere die DNA-Schädigungsreaktion auslösen, was zu einem replizierenden Altern der Säugetiere führt. Die Länge der kürzesten Telomere ist ein entscheidender Biomarker, der das Schicksal der Zelle und den Beginn des Alterns bestimmt, aber die Methoden, die kurze Telomere erkennen können, sind zeitaufwendig und können keine hohen Durchflussanforderungen erfüllen. Daher sind die bestehenden Methoden zur Messung der Telomerlänge nicht schlecht, jede hat Tausende Herbste.

Unregelmäßige Veränderungen der Telomerlänge können bereits in den frühen Stadien der Erkrankung auftreten, und die Telomerlänge kann nach Jahrzehnten zu einem frühen Screening-Indikator für bestimmte Erkrankungen oder sogar zu einer Hilfsdiagnostik oder einer prognostischen Bewertung werden. Einfache, einfach zu handhaben, hohe Durchfluss-Testmethoden können für epidemiologische Studien in großen Bevölkerungsgruppen verwendet werden, um telomerenbezogene Erkrankungen zu finden, und präzisere Testmethoden für verschiedene Telomerlängenverteilungen können verwendet werden, um mögliche Mechanismen zwischen Telomerlängen und verwandten Erkrankungen zu finden; Selbstverständlich sollten Telomer-Detektionsmethoden, die hohen Durchsatz und genaue und vielseitige Informationen liefern, das Ziel unserer Forschung sein.