T0P10感受态细胞*

T0P10 empfindliche Zellen*
Produktname: 0 Chemisch Kompetente Zelle
Produktnummer: G6015-20 (20 100ul), G6015-100 (100 100ul)
Spezifikationen / Einführung: G6015-20 (20 100ul), G6015-100 (100 100ul)

GeneTyp

F-mcrA△(mrr-hsdRMS--mcrBC) φ80 lacZ△M15△lacX74 recAl ara△139△(ara-leu)7697 galU galK rpsL (StrR) endA1 nupG

Kurze Beschreibung：

Der Stamm T0P10 stammt vom Stamm MC1061 und ist eine der derzeit im Labor verwendeten empfindlichen Zellen mit einem Genotyp, der DH10B sehr ähnlich ist (DH10B ist galE15 und T0P10 galU). CLBio * 0 wachsen schnell (schneller als DH5a, aber langsamer als Mach1-T1), 10 Stunden sichtbares Klonen, Mutationen in recA1 und endA1 fördern die Stabilität der insertierten DNA und die Extraktion von hochreiner Plasmid-DNA. Kann für den Aufbau von Experimenten wie Klonen, blauen und weißen Flecken Screening verwendet werden, mit Kettenresistenz ***. Die CLBio-Serie T0P10-empfindliche Zellen werden durch ein spezielles Verfahren hergestellt und haben eine Transformationseffizienz von > 108cfu / μg durch den pUC19-Plasmod-Test.

Betriebsanweisung:

1. Die CLBio *0-Sensorzellen werden geschmolzen in Eis gelegt (oder für einen Moment auf der Hand oder bei Raumtemperatur gelassen, bis die Bakterien schnell in das Eis eingefügt werden, wenn sie sich in einem Eiswassermischungszustand befinden), die ZielDNA (Plasmide oder Verbindungsprodukte) hinzugefügt und mit der Hand auf den Grund der EP-Röhre sanft vermischt und 25 Minuten auf Eis gelassen.

2,42 ° C Wasserbad heiß für 45 Sekunden, schnell auf das Eis zurückgelegt und für 2 Minuten ruhen, Schütteln wird die Umwandlungseffizienz verringern.

3. 700 µl steriles 2YT- oder LB-Medium ohne Antibiotika in ein Zentrifugerrohr hinzufügen und 60 Minuten nach Mischung bei 37 ° C bei 200 rpm erholen.

4.5000rpm Zentrifugieren Sie für eine Minute für die Aufnahme von Bakterien, lassen Sie auf etwa 100μ1 sanft blasen, um die Wiedersuspension zu schlagen und auf ein 2YT- oder LB-Medium mit entsprechenden Antibiotika zu beschichten.

5. Legen Sie die Platte umgekehrt in einem 37 ° C-Koffer über Nacht kultivieren. Bei einer blauen-weißen Flecken-Siebung wird die Platte mindestens 13 h bei 37 ° C kultiviert.

Hinweise：

1. CLBio-Sensorzellen schmelzen auf Eis. Auf Eis für ca. 5 Minuten platziert, schmelzen, und Plasmide innerhalb von 8 Minuten nach dem Schmelzen hinzugefügt, sonst beeinträchtigt die Umwandlungseffizienz.

2. Bei der Mischung von Plasmiden oder Verbindungsprodukten sollte sanft bedient werden.

3. Die Umwandlung von hohen Konzentrationen von Plasmiden oder hocheffizienten Verbindungsprodukten kann die Menge an Bakterien, die am Ende für die Beschichtung verwendet werden, entsprechend reduzieren.

T0P10 empfindliche Zellen*