Spektraloptik-Testkits

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　Spektrophotometrie Test Kit Einführung：

PDC ist hauptsächlich in Hefe vorhanden und ist eines der Schlüsselenzyme für die Ethanolfermentation, die Acetonsäure zur Herstellung von Acetaldehyde katalysiert.

Bestimmungsprinzip:

PDC katalysiert Acetonsäuredecarboxylierung zur Erzeugung von Acetaldehyde und fügt Ethanoldehydrogenase (ADH) hinzu, um NADH zur Erzeugung von Ethanol und NAD + zu katalysieren; NADH hat einen Absorptionsspitze bei 340 nm, NAD + nicht; Berechnen Sie die PDC-Aktivität durch die Messung der Absorptionsrate von 340 nm.

Eigene Geräte und Zubehör:

Grinder, Eis, Tischzentrifuge, UV-Spektrophotometer, 1 ml Quarzbecher, verstellbare Pipette und Doppeldampfwasser.

Dosierungszusammensetzung und Zubereitung:

Extraktion: Flüssigkeit 100 ml x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren.

Reagenz 1: Flüssigkeit 20 ml x 1 Flasche, 4 ° C aufbewahren.

Reagenz 2: Pulver x 1 Flasche, 4 ° C Lichtschutz aufbewahren. 1 ml destilliertes Wasser vor der Anwendung; Aufbewahrung bei -20 ° C nach der unvollständigen Verteilung des Reagents, wiederholtes Gefrierschmelzen ist verboten.

Reagenz 3: Pulver x 1 Flasche, 4 ° C Lichtschutz aufbewahren. 1 ml destilliertes Wasser vor der Anwendung; Aufbewahrung bei -20 ° C nach der unvollständigen Verteilung des Reagents, wiederholtes Gefrierschmelzen ist verboten.

Reagenz 4: Pulver x 1 Flasche, 4 ° C Lichtschutz aufbewahren. 1 ml destilliertes Wasser vor der Anwendung; Aufbewahrung bei -20 ° C nach der unvollständigen Verteilung des Reagents, wiederholtes Gefrierschmelzen ist verboten.

Messtabellen:

Formel zur Berechnung der Enzymaktivität:

a. Die Berechnungsformel, die mit Spuren-Quarzschalen gemessen wird, ist wie folgt:

(1) Berechnung nach Proteinkonzentration:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C ist die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro Milligramm Tistoprotein zu katalysieren, eine Enzymaktivitätseinheit (U).

DAO-Aktivität (nmol/min/mg prot) = ×V gegen Total ÷ (V-Probe ×Cpr) ÷T = 18 × A460 ÷Cpr

(2) Berechnung nach Probenqualität:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C wird die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro Gramm Gewebe zu katalysieren, als eine Einheit der Enzymaktivität definiert.

DAO-Aktivität (nmol / min / g frisches Gewicht) = × V gegen Gesamt ÷ (V-Art ÷ V-Art Gesamt ÷ W) ÷ T = 18 × A460 ÷ W

(3) Berechnung nach Zellzahl:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C wird die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro 104 Zellen zu katalysieren, als eine Einheit der Enzymaktivität definiert.

DAO-Aktivität (nmol / min / 104 Zellen) = × V-Gegen-Total ÷ (V-Sample ÷ V-Sample Total ÷ Zellenzahl) ÷ T = 18 × A460 ÷ Zellenzahl

(4) Berechnung nach Flüssigkeitsvolumen

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C wird die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro ml Serum zu katalysieren, als eine Einheit der Enzymaktivität definiert.

DAO-Aktivität (nmol / min / mL) = × V gegen Total ÷ V Probe ÷ T = 18 × A460

ε: Millimoldämpfungskoeffizient von oxidativen benachbarten Fenisaminen: 7,5 L/mmol/cm; d: Biseric-Scheiben-Durchmesser, 1 cm; V-Gegensumme: Gesamtvolumen der Reaktion, 0,2 mL; V-Probe: Probenvolumen in der Reaktion, 0,05 mL; V-Probe-Summe: Extraktionsflüssigkeitsvolumen hinzugefügt, 1 mL; Cpr: Probenproteinkonzentration, mg/mL； W: Probenmasse, g; T: Reaktionszeit, 30min

b. Die Berechnungsformel, die mit einer 96-Loch-Platte gemessen wurde, ist wie folgt:

(1) Berechnung nach Proteinkonzentration:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C ist die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro Milligramm Tistoprotein zu katalysieren, eine Enzymaktivitätseinheit (U).

DAO-Aktivität (nmol/min/mg prot) = ×V gegen Total ÷ (V-Probe ×Cpr) ÷T = 36 × A460 ÷Cpr

(2) Berechnung nach Probenqualität:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C wird die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro Gramm Gewebe zu katalysieren, als eine Einheit der Enzymaktivität definiert.

DAO-Aktivität (nmol / min / g frisches Gewicht) = × V gegen Gesamt ÷ (V-Art ÷ V-Art Gesamt ÷ W) ÷ T = 36 × A460 ÷ W

(3) Berechnung nach Zellzahl:

Definition der Enzymaktivität: Bei pH 7,2 und einer Temperatur von 37 ° C wird die Menge des Enzyms, die erforderlich ist, um 1 nmol H2O2 pro Minute pro 104 Zellen zu katalysieren, als eine Einheit der Enzymaktivität definiert.

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