Zweite Generation Sequenzierung

Zweite Generation SequenzierungEinführung:

Die Epigenetik ist einer der aktuellen Schwerpunkte der molekularen Biologie, und die DNA-Methylierungssequenzierung ist ein wichtiger Bestandteil der Epigenetik und eine der wichtigsten Formen der epigenetischen Modifikation der DNA des Genoms. Die DNA-Methylierung bezieht sich auf eine Modifizierungsmethode zur Übertragung von Methylgruppen auf eine Cytosilinbasis durch die Katalyse von DNA-Methyltransferasen (DNMTs). Es tritt hauptsächlich in Gebieten vor, die reich an doppelten Nukleotiden CpG-Inseln sind. Normalerweise gibt es CpG-Inseln in unmethylierter (aktiver) Form, und die DNA-Methylierung kann zum Schweigen der Genexpression führen. Anomalien in der Aktivität von DNMTs sind eng mit der Erkrankung verbunden. Sie spielen eine entscheidende Rolle für die Aufrechterhaltung der normalen Zellfunktion, die Übertragung der genetischen Abzeichnungen des Genoms, die Entwicklung des Embryos und die Erscheinung von Tumoren beim Menschen.

Shanghai-Flügel und Bio durch Bisulfit verarbeitet, die Zielfragmente mit Multiple-PCR vergrößert, Barcode und Sequenzierung Universal Connector in Illumina X10 hinzugefügtZweite Generation SequenzierungDie Plattform führt die Sequenzierung von PCR-Produkten mit hohem Durchsatz durch die Verwendung von bioinformatischen Methoden zur präzisen quantitativen Berechnung des Methylierungszustands der Methylierungsstellen im Zielbereich durch, was die Forschungskosten erheblich senkt, während die Zielregion-Tests abgeschlossen werden.

Hi-MethylSeq kombiniert Sulfat-Konvertierung, gezielte Amplifikator-High-Flow-Sequenzierungstechnik, um eine präzise quantitative Analyse der Methylierung mit mehreren Segmenten und mehreren Stellen zu ermöglichen. Diese Methode gilt für die Methylierungsstudien der Zielsegmente von Interesse, um die positiven Stellen der genomweiten Methylierungsstudien in einer großen Probe weiter zu bestätigen.

Schwere Sulfatbehandlung ist der Goldstandard für die DNA-Behandlung des Genoms in der DNA-Methylierungssequenzierung, ist ein chemischer Prozess, der Schäden an der DNA verursachen kann, und es ist schwierig, gleichzeitig eine 100-prozentige Konvertierungseffizienz zu erreichen und die Integrität der DNA aufrechtzuerhalten. 3 Nicht-CpG-Inselsequenzen außerhalb des Hi-MethylSeq-Zielbereichs wurden als interne Kontrolle ausgewählt, um die Umwandlungsrate der Probe genau zu bewerten.