Zebrafisch Transformation Wachstumsfaktor β(TGF-β)elisa Testkit Wissenschaftliche Forschung

Shanghai Enzyme Australia Biotechnology Co., Ltd. (Markenname: MEIAOBIO) ist ein Hightech-Unternehmen, das sich auf den Bereich der Biowissenschaften konzentriert und sich auf die Bereitstellung hochwertiger, innovativer Bioreagenzien und Lösungen für wissenschaftliche Einrichtungen, medizinische Einrichtungen und industrielle Anwender weltweit widmet. Auf Grundlage der Stärken von Shanghai als internationales Zentrum für wissenschaftliche und technologische Innovationen vereint das Unternehmen führende technische Teams und Forschungs- und Entwicklungsressourcen der Branche, um die Forschung und industrielle Entwicklung in den Life Sciences mit einem professionellen, präzisen und zuverlässigen Servicekonzept zu unterstützen. MEIAOBIOs Hauptprodukte umfassen vier Bereiche: Molekularbiologie, Zellbiologie, Immundetection und Bioprobenbank, hauptsächlich: ELISA Kits: Hochempfindliche, hochspezifische Testwerkzeuge, die weit verbreitet für die Analyse von Krankheitsmarkern, Zytokinen und Hormonen verwendet werden. Biochemische Kits: Abdeckung von Stoffwechselwegen, Enzymaktivitätstests und anderen Bereichen zur Unterstützung der Grundlagenforschung und der Anforderungen der industriellen Qualitätskontrolle. PCR-Kit: bietet eine schnelle und präzise Nukleinsäure-Amplifikationslösung für Genklonung, Pathogen-Detektion und Expressionsanalyse. Biologische Probenbibliothekenprodukte: einschließlich Zellstämme, standardisiertes Serum, mikrobielle Arten und biochemische Reagentien, die die Wiederholbarkeit und Zuverlässigkeit der Daten gewährleisten. Technische Stärke und Qualitätssicherung Das Unternehmen hat ein strenges Qualitätskontrollsystem mit technologischer Innovation als Kerntraibkraft etabliert. Gleichzeitig arbeitet MEIAOBIO eng mit in- und ausländischen Forschungseinrichtungen und Universitäten zusammen, um die Produktleistung kontinuierlich zu optimieren, die technologische Iteration zu fördern und den Benutzern modernste und stabile experimentelle Werkzeuge zu bieten. MEIAOBIO bietet kundenorientierte Lösungen für die Verbesserung der Forschungseffizienz und die Transformation der Ergebnisse, von der Produktauswahl bis zur Nachverfolgung. Vision und Mission Markenpositionierung: Professioneller, zuverlässiger und innovativer Anbieter von Biotechnologie-Lösungen. Markenversprechen: Qualitätsorientiert, Service-basiert, Unterstützung für jede wissenschaftliche Entdeckung!
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1. Kernkomposition des ELISA-Kits

ELISA-Kits enthalten in der Regel die folgenden Schlüsselkomponenten, wobei sich die unterschiedlichen Typen von Kits (z. B. Klemmmethoden, indirekte Methoden usw.) leicht unterscheiden können:

1. Verpackte Platte: Die Oberfläche wird mit 96 Löchern (meist Polystyren) mit spezifischen Antikörpern (oder Antigenen) versehen, um Zielmoleküle in der Probe zu erfassen.
2. Standardprodukte/Kalibrierungsprodukte: Zielmoleküle mit bekannten Konzentrationen (z. B. Rekombinationsantigene, gereinigte Antikörper) werden verwendet, um Standardkurven zu zeichnen, um die Konzentration von Zielmolekülen in einer Probe zu quantifizieren.
3. Detektion von Antikörpern: Spezifische Antikörper gegen Zielmoleküle (häufig mit Enzymen wie HRP Moringa Peroxidase, AP alkalische Phosphatase gekennzeichnet).
4. Enzymverbindungsverdünnung: Puffer zum Verdünnen von enzym-markierten Antikörpern.
5. Substratlösung: Enzymkatalysierte Substrate (wie HRP-entsprechende TMB-Färbungsflüssigkeit, OPD-Färbungsflüssigkeit); AP entspricht der PNPP-Palette), die nach der Reaktion ein farbiges Produkt erzeugt.
6. Endflüssigkeit: Beenden Sie die enzymatische Reaktion und fixieren Sie das Ergebnis.
7. Waschflüssigkeit (PBST oder TBST): zum Waschen von nicht gebundenen, nicht spezifischen Stoffen und zur Verringerung von Hintergrundstörungen.
8. Verschlossene Flüssigkeit: Die Packung ist nach dem verschlossenen Mikroporenplatte nicht an der Bindungsstelle, um eine nicht spezifische Adsorption zu verhindern.
9. Probenverdünnung: Verwendet zur Verdünnung von Proben (z. B. Serum, Plasma, Gewebehomogeneität usw.) und zur Übereinstimmung mit dem Reaktionssystem.

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Prinzipien der ELISA-Prüfung

Der Kern der ELISA ist die spezifische Bindung von Antigen-Antikörper an eine enzymatische Färbungsreaktion gekoppelt, wobei die wichtigsten Schritte wie folgt sind (zum Beispiel mit der "Klampe-Methode"):

1. Verpackung: Spezifische Antikörper (Capture Antibody) werden auf die Oberfläche der Mikroporenplatte verpackt, um einen festen Antikörper zu bilden.
2. Schließen: Füllen Sie eine geschlossene Flüssigkeit hinzu, um die nicht gebundenen Stellen des Antikörpers zu füllen, um die nicht spezifische Adsorption von Heteroproteinen in der Probe zu vermeiden.
3. Probenaufnahme: Fügen Sie eine zu prüfende Probe (mit Zielantigen) oder ein Standardprodukt hinzu, und das Antigen in der Probe bindet sich an feste Antikörper.
4. Inkubierung mit Waschen: Inkubierung bei Raumtemperatur oder 37 ° C, so dass Antigen-Antikörper vollständig gebunden werden; Waschen entfernt nicht gebundene Substanzen.
5. Hinzufügen von Detektions-Antikörpern: Hinzufügen von enzym-markierten Detektions-Antikörpern (die an einen anderen Epitopen des Zielantigens binden), um einen "Festphase-Antikörper-Antigen-Enzym-markierten Antikörper"-Komplex zu bilden (Klemmenstruktur).
6. Wieder waschen: Entfernen Sie die nicht gebundenen enzym-markierten Antikörper.
7. Substrat-Darstellung: Die Substratlösung wird hinzugefügt und das Enzym (wie HRP) katalysiert das Substrat, um ein farbiges Produkt zu erzeugen (die Farbe ist positiv mit der Zielantigenkonzentration korreliert).
8. Beenden der Reaktion: Fügen Sie eine Endflüssigkeit (z. B. Schwefelsäure) hinzu, um die Färbungsreaktion zu stoppen.
9. Leseanalyse: Messung der Absorptionsfähigkeit (OD-Wert) in einer bestimmten Wellenlänge mit einem Enzymskalarer (z. B. HRP entspricht 450 nm) und Berechnung der Konzentration des Zielantigens in der Probe durch eine Standardkurve.

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Haupttypen von ELISA

Je nach Testziel (Antigen/Antikörper) und Reaktionsprinzip können ELISAs in folgende Kategorien unterteilt werden:

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4. Betriebsmaßnahmen

Um die Genauigkeit und Wiederholbarkeit der Testergebnisse zu gewährleisten, sollten folgende Schlüsselpunkte beachtet werden:

1. Probenbehandlung: Vermeidung von Blütolyse, Lipidblut oder Lysenzymstörungen; Die Probe muss nach den Anforderungen der Anleitung verdünnt werden.
2. Temperaturbedingungen: Temperatur (normalerweise 37 ° C) und Zeit (30 Minuten - 2 Stunden) streng kontrollieren, um Temperaturschwankungen oder unzureichende / zu lange Zeit zu vermeiden.
3. Waschvorgang: unzureichendes Waschen kann zu einem hohen Hintergrund führen und übermäßiges Waschen kann die Verbindung abwaschen; Es wird empfohlen, eine Spülmaschine zu verwenden (5 Wäsche je 30 Sekunden einstellen).
4. Farbkontrolle: Der Untergrund muss vor Licht geschützt werden und die Farbkonzentration muss angepasst werden.
5. Kontrolleinstellungen: Leere Kontrollen, negative Kontrollen, positive Kontrollen und Standardprodukte müssen festgelegt werden, um die Gültigkeit des Experiments zu überprüfen.

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Qualitätskontrolle und Interpretation der Ergebnisse

1. Standardkurve: Nehmen Sie die Konzentration des Standardproduktes als horizontale Koordinate, den OD-Wert als longitudinale Koordinate, zeichnen Sie eine Standardkurve (normalerweise eine S-Kurve), berechnen Sie die entsprechende Konzentration des OD-Wertes der Probe (beachten Sie den linearen Bereich, außerhalb des Bereichs müssen Sie die Probe verdünnen oder konzentrieren).
2. Empfindlichkeit und Spezifizität: Empfindlichkeit (zui niedrige Detektionsgrenzen) und Spezifizität (Kreuzreaktionsraten mit Analogen) sind Kernindikatoren zur Bewertung der Leistung der Kits, die auf eine Referenzhandbuch oder durch eine Vorexperimentelle Validierung zurückzuführen sind.
3. Validität der Daten: Wenn die Standardkurve R² < 0,99, die negative Kontrolle OD-Werte zu hoch (> 0,1) oder die positive Kontrolle nicht erreicht ist, müssen Sie erneut experimentieren.

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6. Anwendungsbereiche

• Forschungsbereich: Nur für wissenschaftliche Forschung.

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Empfehlungen zur Auswahl eines ELISA-Kits

• Definitives Testziel: Antigen (z. B. Virenprotein) oder Antikörper (z. B. IgG/IgM)? Kleine Moleküle (wie Medikamente) müssen eine Wettbewerbsmethode-Kit wählen.
• Probentyp: Serum, Plasma, Gewebehomoplasma oder Zellserum? Die passende Probenverdünnung muss ausgewählt werden.
• Leistungsanforderungen: Quantitative Untersuchungen müssen sich auf linearen Bereich und Wiederholbarkeit konzentrieren; Die qualitative Prüfung kann sich auf die Einstellung von Schwellenwerten (Cut-off) konzentrieren.

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