Pflanzliche Algenzucker-6-Phosphorsäure (T6P) ELISA-Kit

　　Pflanzliche Algenzucker-6-Phosphorsäure (T6P) ELISA-KitGebrauchsanweisung

BS-8050-A Pflanzenalgen-6-Phosphorsäure (T6P) ELISA-Kit 96T

BS-8050-B Pflanzenalgen-6-Phosphorsäure (T6P) ELISA-Kit 48T

I. Experimentelle Prinzipien

Dieses Kit untersucht die T6P-Spiegel in pflanzlichem Gewebe oder Zellen mit einem Dual-Antikörper-Centrophase-kombinierten Immunabsorptionstest (ELISA). Die Mikroporenplatte verpackt Anti-T6P-Antikörper und nach der Bindung von T6P an feste Phase-Antikörper in der Probe, fügen Sie den Bi-Antiforming-Komplex mit Moringa Peroxidase (HRP) markiert. Hinzufügen des Substrats TMB-Darstellung, TMB wird unter HRP-Katalyse in Blau, nach dem Ende der Säure gelb, die Darstellungstiefe ist positiv mit der T6P-Konzentration in der Probe korreliert, die Absorptionsberechnung der Konzentration bei 450 nm Wellenlänge bestimmt.

II. Zusammensetzung der Kit

Komponenten Spezifikationen Speicherbedingungen

Vorverpackt mit 12 Löcher x 8 2-8 ° C dicht getrocknet

Standard Gefriertrocknetes Pulver nach -20 ° C Auflösung

HRP-Markierungsdetektion von Antikörpern Flüssigkeit Lichtschutz 2-8 ℃

TMB Flüssigkeit A+B Jetzt verfügbar, Lichtschutz

Endflüssigkeit 2M Schwefelsäure Raumtemperatur

Konzentrierte Waschflüssigkeit Flüssigkeit 40 ° C Wasserbad gelöste Kristalle

Probe xishi Flüssigkeit Flüssigkeit mit Stabilisator

Hinweis: Es können unterschiedliche Markenkomponenten geben, siehe die spezifischen Anleitungen.

3. Probenbehandlung

1. Probenart

Pflanzengewebe: 0,1 g Gewebe wiegen, 1 ml extrahiertes flüssiges Eisbad hinzufügen und zentrifugieren.

Zellen / Bakterien: Nach der Sammlung der Zentrifuge entsorgt, Ultraschall zerstörte Zellen extrahieren die Klare.

2. Aufbewahrungsbedingungen

Kurzfristig: 2-8 ° C ≤ 48 Stunden aufbewahren.

Langfristig: Gefrieren nach -20 ° C, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

3. Verdünnungsempfehlungen

Regelmäßige Proben: Es wird empfohlen, 5-20 Mal zu verdünnen (z. B. 20 μL Probe + 180 μL Verdünnung).

Proben mit hoher Konzentration: Es ist erforderlich, das Verdünnungsvermögen vorexperimentell zu bestimmen, bis zu 100.000 Mal verdünnt (Drei-Schritt-Verdünnungsmethode).

4. Betriebsschritte

Standardzusammenstellung

Gefriertrocknete Standardprodukte mit 1 ml Verdünnungslösung und Mischung nach 10 Minuten lassen.

Serienverdünnung (z. B. 8pmol/L → 4pmol/L → 0,5pmol/L).

Zum Beispiel

Standardbohrung: 50 μL/Loch.

Probenloch: Zuerst 40 μL Verdünnung und dann 10 μL Probe (Gesamtverdünnung 5 mal).

Leere Löcher: Keine Proben und keine Abwehr.

Inkubierung

Inkubieren Sie bei 37 ° C für 120 Minuten und waschen Sie die Platte dreimal (1 Minute pro Einweichen).

Anzeige und Beendigung

Zu jedem Loch fügen Sie 100 µL TMB Display Flüssigkeit, 37 ° C Lichtschutz inkubieren für 15 Minuten.

Fügen Sie 50 µL Terminationsflüssigkeit zur Beendigung der Reaktion hinzu und messen Sie den OD-Wert innerhalb von 30 Minuten.

V. Hinweise

Proben zu vermeiden: Proben, die Stickstoff-Natrium (NaN3) enthalten (die HRP-Aktivität hemmen).

Reagenzgleichgewicht: 20 Minuten vor der Verwendung von Raumtemperatur-Gleichgewicht, konzentrierte Waschflüssigkeit 40 ° C Wasserbad Kristall lösen.

Qualitätskontrolle: Es wird empfohlen, eine Komplexbohrung einzustellen, die Standardkurve R² sollte ≥ 0,95 sein.

VI. Ergebnisanalyse

Standardkurve: Zeichnen Sie eine vierparametrische Gleichung für die Konzentration mit OD-Werten.

Konzentrationsberechnung: Der OD-Wert der Probe wird durch die Kurvengleichung ersetzt und dann mit dem Verdünnungsvervielfachen multipliziert.

Hinweis: Die oben genannten Informationen dienen nur zur Information und dienen nicht als tatsächliche Daten, und das Experiment muss den Anweisungen strikt folgen oder einen technischen Lehrer beraten.

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