Humanes Glykorin-ähnliches Peptid 1 (GLP-1) ELISA-Kit

　　Humanes Glykorin-ähnliches Peptid 1 (GLP-1) ELISA-KitGebrauchsanweisung

BS-0203-A Humanes Glykotin-ähnliches Peptid 1 (GLP-1) ELISA-Kit 96T

BS-0203-B Humanes Glykotin-ähnliches Peptid 1 (GLP-1) ELISA-Kit 48T

I. Experimentelle Prinzipien

Diese Kit untersucht den GLP-1-Spiegel in menschlichem Serum, Plasma oder Zellkultur-Oberserum mittels einer Dual-Antikörper-Klipsierung. Zu den wichtigsten Schritten gehören:

Festphasen-Antikörper-Paket: Mikroporen-Platte vorverpackt reinigen Anti-GLP-1 monoklonalen Antikörper.

Antigen-Antikörper-Bindung: GLP-1 in der Probe bindet sich an feste Phase-Antikörper und fügt einen binären Antibildungskomplex hinzu, der mit Moringa Peroxidase (HRP) gekennzeichnet ist.

Darstellungsreaktion: Fügen Sie TMB-Darstellung des Substrats hinzu, messen Sie die Absorption nach dem Ende der Säure bei einer Wellenlänge von 450 nm, die Konzentration ist proportional zur Darstellungstiefe.

II. Zusammensetzung der Kit

Komponenten Spezifikationen Anmerkungen

Vorverpackte Mikroporplatte 12 Löcher x 8 Anti-GLP-1 Antikörper

Standardprodukt 0,5 ml / Flasche Gefriertrocknetes Pulver, muss wieder gelöst werden

HRP-Marker 2nd Anti 6ml Lichtschutz speichern

TMB A-Flüssigkeit 6ml + B-Flüssigkeit 6ml

Endflüssigkeit 6ml 2M Schwefelsäure

20 ml konzentrierte Waschflüssigkeit wird 1:20 verdünnt

Probe xishi Flüssigkeit 6ml mit Stabilisator

Hinweis: Es können unterschiedliche Markenkomponenten geben, siehe die spezifischen Anleitungen.

3. Probenbehandlung

1. Probenart

Serum / Plasma: EDTA oder Hepatin Antikoagulation, Entfernung durch Zentrifuge.

Zellreinigung: 1000 x g Zentrifuge für 20 Minuten, um Verunreinigungen zu entfernen.

Homogenisierung des Gewebes: Nach dem Rissen entzentrifiziert.

2. Aufbewahrungsbedingungen

Kurzfristig: 2-8 ° C ≤ 48 Stunden aufbewahren.

Langfristig: Gefrieren nach -20 ° C oder -80 ° C, um wiederholtes Gefrierschmelzen zu vermeiden.

3. Verdünnungsempfehlungen

Regelmäßige Proben: Es wird empfohlen, 5-20 Mal zu verdünnen (z. B. 20 μL Probe + 180 μL Verdünnung).

Proben mit hoher Konzentration: Es ist erforderlich, das Verdünnungsvermögen vorexperimentell zu bestimmen, bis zu 100.000 Mal verdünnt (Drei-Schritt-Verdünnungsmethode).

4. Betriebsschritte

Standardzusammenstellung

Gefriertrocknete Standardprodukte mit 1 ml Verdünnungslösung und Mischung nach 10 Minuten lassen.

Serienverdünnung (z. B. 8pmol/L → 4pmol/L → 0,5pmol/L).

Zum Beispiel

Standardbohrung: 50 μL/Loch.

Probenloch: Zuerst 40 μL Verdünnung und dann 10 μL Probe (Gesamtverdünnung 5 mal).

Leere Löcher: Keine Proben und keine Abwehr.

Inkubierung

Inkubieren Sie bei 37 ° C für 120 Minuten und waschen Sie die Platte dreimal (1 Minute pro Einweichen).

Anzeige und Beendigung

Zu jedem Loch fügen Sie 100 µL TMB Display Flüssigkeit, 37 ° C Lichtschutz inkubieren für 15 Minuten.

Fügen Sie 50 µL Terminationsflüssigkeit zur Beendigung der Reaktion hinzu und messen Sie den OD-Wert innerhalb von 30 Minuten.

V. Hinweise

Proben zu vermeiden: Blutholyse, fettreiche Proben und NaN3-haltige Proben (Hemmung der HRP-Aktivität).

Reagenzgleichgewicht: 20 Minuten vor der Verwendung von Raumtemperatur-Gleichgewicht, konzentrierte Waschflüssigkeit 40 ° C Wasserbad Kristall lösen.

Qualitätskontrolle: Es wird empfohlen, eine Komplexbohrung einzustellen, die Standardkurve R² sollte ≥ 0,95 sein.

VI. Ergebnisanalyse

Standardkurve: Zeichnen Sie eine vierparametrische Gleichung für die Konzentration mit OD-Werten.

Konzentrationsberechnung: Der OD-Wert der Probe wird durch die Kurvengleichung ersetzt und dann mit dem Verdünnungsvervielfachen multipliziert.

Hinweis: Die oben genannten Informationen dienen nur zur Information und dienen nicht als tatsächliche Daten, und das Experiment muss den Anweisungen strikt folgen oder einen technischen Lehrer beraten.

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