NCI-H522 (menschliche nicht-kleinzellige Lungenkrebszellen)

NCI-H522 (menschliche nicht-kleinzellige Lungenkrebszellen)

Marke: Shanghai Bio
Anzahl der Zellen: 1x10^6 Zellen
Lebensfähigkeit: 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Name der Zelle:NCI-H522 (menschliche nicht-kleinzellige Lungenkrebszellen)

Herkunft: Mensch
Geschlecht: Männlich, 58 Jahre
Organisationsquelle: Lunge
Wachstumsmerkmale: Wandwachstum
Zellmorm: Epidermis
Zell-Spezifikationen: 1 x 106 cells / T25 oder 1 ml Gefrierrohr
RPMI-1640 + 10% fetales Rinderserum (FBS)
37 ℃, 5 % CO2
Gefrierbedingungen: 90% FBS + 10% DMSO
Übertragungsmethode: 1: 3 bis 1: 6 Übertragung, 1-2 Tage 1 Generation

Zellkultur Operationen
Trockeneis Transport: Sofort nach Empfang der Zellen in flüssigen Stickstoff übertragen, oder kurzfristige Gefrierung im Kühlschrank bei -80 ° C oder direkte Erholung
Transport bei Normaltemperatur: Nehmen Sie die Zellkulturflasche sofort aus der Verpackung ab, nachdem Sie die Zellen erhalten haben, und befolgen Sie die folgenden Schritte zur Kulturübertragung.
Zelltransplantation: Zelldichte von 80% - 90%, kann eine Zelltransplantation durchgeführt werden
Zellbetrieb Schritte in der Kultivflasche
Für klebende Zellen füllen wir vor dem Versand das Medium mit der gesamten Kulturflasche, um den Abfall der klebenden Zellen während des Produkttransports zu reduzieren.
Nachdem Sie die Zellen erhalten haben, beachten Sie bitte, ob es eine Verschmutzung gibt. Legen Sie die Kulturflasche unter dem Umkehrmikroskop und prüfen Sie sorgfältig, ob sie trüb oder bakteriell kontaminiert ist. Weil es beim Transport Stoße gibt und einige Zellen auch sehr empfindlich für Temperaturänderungen sind, kann es einige Zellen geben, die schweben, diese Zellen sind immer noch lebende Zellen, bitte nicht wegwerfen, können nach der Generation von Zentrifugarreicherung verwendet werden.
2. für die Wandzelle, in der biologischen Sicherheits-Schrank-Umgebung, mit der Vakuumpumpe entfernen Sie das überschüssige Medium in der Flasche, um die verbleibenden 5-8 mL oder so, dann wählen Sie den entsprechenden CO2-Gehalt des Mediums in der 37 ° C thermostatischen Kultivkammer, um den Flaschendeckel zu lockern. Wenn die Zellen die Kulturflasche voller sind, übertragen Sie sie sofort.
3. Für die suspendierten Zellen, die Zellen in der Biosicherheits-Schrank-Umgebung in eine Zentrifugerrohr übertragen, 150 g für 5 Minuten zentrifugieren, nach der Entfernung der Oberklärung die Zellen mit 5 ml Medium aufblasen, in eine neue Flasche übertragen und anschließend in eine 37 ° C thermostatische Kultivkammer mit einem geeigneten CO2-Gehalt kultiviert werden.
Operationsschritte zur Einfrierung von Rohrzellen
Hinweis: Um eine hohe Zelllenlebensrate zu gewährleisten, entfroren Sie die Kultur sofort nach Erhalt des Produkts.
1. Legen Sie das Gefrierrohr in einem 37 ° C Wasserbad hin und her zu schütteln und schnell aufzufrieren. Um Verschmutzung zu vermeiden, stellen Sie sicher, dass die Gefrierröhre über der Wasseroberfläche platziert werden. Das Auffrieren dauert schnell, etwa eine Minute.
2. Sobald die Flüssigkeit im Gefrierrohr geschmolzen ist, wird sie sofort entfernt und die Oberfläche des Gefrierrohrs mit Alkohol gesprüht. Ab diesem Schritt muss der Nachlauf im Biosicherheitsschrank durchgeführt werden.
3. Übertragen Sie die Flüssigkeit aus dem Gefrierrohr in ein Zentrifugerrohr mit 5 ml vollem Medium und zentrifizieren Sie 150 g für 5 Minuten und entfernen Sie das Oberwasser mit einer Vakuumpumpe.
4. Die Zellen mit dem Medium wieder suspendieren und in eine neue Kulturflasche übertragen. Um die Überlebensrate der Zellresultation zu gewährleisten, verwenden Sie das Medium nach 37 ° C Wasserbad vorwärmt.
Die Zellen werden in einem 37 ° C thermostatischen Kühlraum mit geeignetem CO2 kultiviert.
Klemmende Zelltransmissionskultur
1. Absaugen und Entfernen des Mediums in der Kulturflasche, fügen Sie PBS zu schmieren einmal.
2. Fügen Sie 1 ml 0,25 (w / v) Trypsin-EDTA-Lösung hinzu und legen Sie sie in einer 37 ° C-Kultivkammer zu inkubieren, bis die Zellen von der Wand abfallen und isoliert werden. Dieser Prozess dauert etwa 3-5 Minuten.
3. Fügen Sie 2mL fertiges Medium und Panprotease hinzu und blasen Sie die Zellen sanft von der Fläschenoberfläche ab und lassen Sie die Zellen verteilen.
4. Sammeln Sie die Zellsuspension in einem 15 ml Zentrifugerrohr, 150 g für 5 Minuten zentrifugieren und mit einer Vakuumpumpe entfernen. Nehmen Sie die richtige Menge an Medium, um die Zellen wieder zu suspendieren und in eine neue Kulturflasche zu kultivieren.
Suspendierte Zelltransmission kann auf folgende Methoden verweisen:
1. Direkte Übertragung
1. bis die suspendierte Zelle auf 80% ~ 90% ausgewachsen ist (die Zellsuspension wird gelb), kann sie übertragen werden;
2. Absaugen Sie die Zellsuspension 1 / 2 ~ 1 / 3;
3. Fügen Sie eine angemessene Menge an frischem Medium hinzu und pflegen Sie weiter.
2. Zentrifugaltransmissionsmethode (bei Entdeckung von Zellstücken)
1. Übertragen der Zellsuspension in ein Zentrifugerrohr;
2,150 g 5 min zentrifugieren und die Oberschicht entfernen;
3. mit frischem Medium Zellen wieder suspendieren;
4. Sucht die angemessene Menge an Zellsuspension, füllt eine neue Kulturflasche und fügt die angemessene Menge an frischem Medium hinzu, um die Kultur fortzusetzen.
Zellfriervorgänge
1.1.000 rpm Zentrifuge für 5 Minuten entfernen Sie die Oberfläche. 1 ml Serum resuspendierte Zellen hinzufügen, Serum und DMSO entsprechend der Zellzahl hinzufügen, vorsichtig vermischen, die endgültige Konzentration von DMSO beträgt 10%, die Zelldichte ist nicht weniger als 1 x 106 / ml, jedes Gefrierrohr gefriert 1 ml Zellsuspension, beachten Sie, dass das Gefrierrohr gut gekennzeichnet ist;
Das Gefrierrohr in eine Programmkühlbox, in einen Kühlschrank bei -80 °C und nach mindestens 2 Stunden in eine Flüssigstickstoffaufbewahrung übertragen

Einige der verwandten Zellen sind wie folgt: