HEC-1-B-Krebszellen

Produktname:HEC-1-B-Krebszellen

Marke: Shanghai Bio
Anzahl der Zellen: 1x10^6 Zellen
Lebensfähigkeit: 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Zellvertragung: 1:4 bis 1:6; Wechseln Sie Flüssigkeit 2-3 Mal pro Woche
Wachstumsbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 %; Temperatur: 37°C
Zelltest: Zellen enthalten keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze
Kultivierungsbedingungen: DMEM (hoher Zucker) + 10% FBS + 1% P / S; 37℃，5% CO2
Übertragungsmethode: Empfehlung 1: 2-1: 3 Zweitägiger Wechsel
Gefrierbedingungen: keine Serumzellenfrierflüssigkeit
Gefrierbedingungen: 90% FBS + 10% DMSO
Zellfrieren: Flüssiger Stickstoff Gefrieren

Zellen nach der Behandlung

Die Füllung der Kulturflüssigkeit und das Verschließen der Flaschenmünde, nachdem die Zellen in einer Kulturflasche in einem guten Zustand kultiviert wurden, ist eine Methode des Zelltransports. Wenn die Zellen in ihr Labor zurückkehren, öffnen Sie zuerst die äußere Verpackung.75% Alkohol Spray der gesamten Flasche nach der Desinfektion in den ultrareinen Tisch, streng sterile BetriebAufbaukasten stehen2-4 StundenBetrachtung unter dem Spiegel: nicht überschrittenAbfüllte Kulturflüssigkeit kann bei 80% Konvergenz abgefüllt werdenIn das Zentrifugerrohr sammeln und hinzufügen6ml Medium, eingegeben37 ° C, 5% CO2 Inkubationskastenkultur; Über 80% Konvergenz, je nach Umstand übertragen oder eingefroren, spezifische Operationen siehe Zellkultur Schritte.（Beachten Sie, dass die Lieferung ist versiegelte Kulturflasche, in die Kulturbox Kultur erinnern Sie sich an die Kulturflasche Deckel entspannt, nach der Übertragung empfehlen eine Flasche mit dem Medium in der Originalflasche, eine andere Flasche mit dem eigenen Medium）

HEC-1-B-KrebszellenAusbildungsschritte

Einer,Erholungszellen: wird enthaltenDas Gefrierrohr von 1 ml Zellsuspension wurde in einem 37 ° C Wasserbad schnell geschüttelt und aufgefroren, wobei 5 ml Medium gleichmäßig vermischt wurde. 5 Minuten unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und hinzufügenNach 4-6 ml Medium blasen. Dann fügen Sie alle Zellsuspension in die Kulturflasche für die Kultivierung über Nacht (oder fügen Sie die Zellsuspension6 cm GeschirrÜber Nacht kultiviert. Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

Zwei,ZellenübertragungWenn die Zelldichte80%-90% können kultiviert werden.

a）、 Für klebende Zellen kann sich die Übertragung auf folgende Methoden beziehen:

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. Fügen Sie 1-2 ml Verdauungsflüssigkeit (0,25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in die Kultivflasche, in 37 ° C in der Kultivkammer verdauen 1-2 min, dann beobachten Sie die Zellverau unter dem Mikroskop, wenn die meisten Zellen runden und fallen, schnell wieder auf den Arbeitstisch, ein paar Klicks auf die Kultivflasche hinzufügenÜber 5mlenthält10 % SerumDas Kulturmedium beendet die Verdauung.

3. Blasen Sie die Zellen sanft, nach dem Abfall aussaugen, 8-10 Minuten unter 1000 RPM zentrifizieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 mL Kulturflüssigkeit nach dem Zusatz blasen.

Die Zellsuspension wird in einem Verhältnis von 1: 2 in neue Schalen oder Flaschen mit 5-6 ml Kultur aufgeteilt.

b）、 Für suspendierte Zellen kann die Übertragung auf die folgenden Methoden verweisen:

Methode 1: Sammeln Sie die Zellen, Zentrifugieren Sie 8-10 Minuten unter 1000 RPM-Bedingungen, werfen Sie die Klärung ab, fügen Sie 1-2 ml Kultur hinzu und blasen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.

Methode 2: Sie können die Hälfte des Austauschs wählen, nachdem Sie die Hälfte des Mediums abgegeben haben, suspendieren Sie die verbleibenden Zellen und teilen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 3 in eine neue Schale oder Flasche mit 8 ml Medium.

PS:Wenn der Kunde erhalten2 ml kleine Röhrenzellen, nach Erhalt der Zellen, Sprühen Sie das ganze Röhrchen mit 75% Alkohol und desinfizieren Sie es nach dem Super-Net-Tisch oder in einen Sicherheitsschrank, streng sterilen Betrieb; Kleine Röhrenzellen in eine T25-Kulturflasche zu übertragen oder6 cm Petrischale, fügen Sie etwa 5 ml Medium, um zu mischen, legen Sie die Zelldichte nach der Kultivierung über Nacht: Wenn die Dichte nicht mehr als 80%, die Flüssigkeit zu wechseln weiterhin zu kultivieren, je nach Umstand zu übertragen oder einzufrieren. Wenn die Dichte über 80% ist, kann die Generation direkt durchgeführt werden (gleiche Methode).

Drei,Gefrierte Zellen:(Hinweis: Die Methode zur Gefrierung von Zellen ohne Blut-Serum-Lagerung siehe bitte unsere Abteilung)

1. Zellen wachsen, um die Kulturflasche zu bedeckenBei 80% Fläche, werfen Sie die Kulturflüssigkeit in einer 25cm2-Flasche und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS;

2. Hinzufügen0,25% Verdauungsflüssigkeit ungefähr 1 ml in die Kulturflasche, beobachtet unter dem umgekehrten Mikroskop, bis die Zelle zurückkehrt und die Kulturflüssigkeit hinzufügt, um die Verdauung zu beenden, sanft die Zellen zu blasen, um sie zu entfernen, und dann die Suspension in ein 15ml Zentrifugerrohr zu übertragen, 1000rpm Zentrifuge 5min;

3. Suspendieren Sie die Zellen mit einer angemessenen Menge an Gefrierflüssigkeit und legen Sie sie in ein Gefrierrohr;

4. Stellen Sie zunächst das Zellfrierrohr in-20 ° C 1,5 h, dann auf -80 ° C verschieben

Einige der verwandten Zellen sind wie folgt: