HEK-293 (293) menschliche embryonale Nierenzellen

Produktname:HEK-293 (293) menschliche embryonale Nierenzellen

Anzahl der Zellen: 1x10^6 Zellen
Lebensfähigkeit: 95% (Viability by Trypan Blue Exclusion)
Zellvertragung: 1:4 bis 1:6; Wechseln Sie Flüssigkeit 2-3 Mal pro Woche
Wachstumsbedingungen: Gasphase: Luft, 95%; Kohlendioxid, 5 %; Temperatur: 37°C
Zelltest: Zellen enthalten keine HIV-1, HBV, HCV, Branchen, Bakterien, Hefen und Pilze
Kultivierungsbedingungen: DMEM (hoher Zucker) + 10% FBS + 1% P / S; 37℃，5% CO2
Übertragungsmethode: Empfehlung 1: 2-1: 3 Zweitägiger Wechsel
Gefrierbedingungen: keine Serumzellenfrierflüssigkeit
Gefrierbedingungen: 90% FBS + 10% DMSO
Zellfrieren: Flüssiger Stickstoff Gefrieren

Nachbearbeitung

Die Füllung der Kulturflüssigkeit und das Verschließen der Flaschenmünde, nachdem die Zellen in einer Kulturflasche in einem guten Zustand kultiviert wurden, ist eine Methode des Zelltransports. Wenn die Zellen in ihr Labor zurückkehren, öffnen Sie zuerst die äußere Verpackung.75% Alkohol Spray der gesamten Flasche nach der Desinfektion in den ultrareinen Tisch, streng sterile Betrieb，Aufbereitungskammer2-4 StundenBetrachtung unter dem Spiegel: nicht überschrittenAbfüllte Kulturflüssigkeit kann bei 80% Konvergenz abgefüllt werdenSammlung zum ZentrifugerrohrMitte, Beitritt6ml Medium, eingegeben37℃, 5% CO2 Inkubation; Über 80% Konvergenz, je nach Umstand übertragen oder eingefroren, spezifische Operationen siehe Zellkultur Schritte.（Beachten Sie, dass die Lieferung ist versiegelte Kulturflasche, in die Kulturbox Kultur erinnern Sie sich an die Kulturflasche Deckel entspannt, nach der Übertragung empfehlen eine Flasche mit dem Medium in der Originalflasche, eine andere Flasche mit dem eigenen Medium）

Ausbildungsschritte

Einer,Erholungszellen: wird enthaltenDas Gefrierrohr von 1 ml Zellsuspension wurde in einem 37 ° C Wasserbad schnell geschüttelt und aufgefroren, wobei 5 ml Medium gleichmäßig vermischt wurde. 5 Minuten unter 1000 RPM zentrifugieren, die Oberflüssigkeit entfernen und hinzufügen4-6mLNach dem Kulturmedium gut blasen. Dann fügen Sie alle Zellsuspension in die Kulturflasche für die Kultivierung über Nacht (oder fügen Sie die Zellsuspension6 cm Geschirr）Über Nacht kultivieren. Am nächsten Tag wechseln und die Zelldichte prüfen.

Zwei,ZellenübertragungWenn die Zelldichte80%-90% können kultiviert werden.

a)Für klebende Zellen kann sich die Übertragung auf folgende Methoden beziehen:

1. Entfernen Sie die Kultur und waschen Sie die Zellen 1-2 mal mit PBS ohne Kalzium- und Magnesiumionen.

2. Hinzufügen1-2 ml Verdauungsflüssigkeit (0.25% Trypsin-0,53 mM EDTA) in einer Kultivflasche und in einer Kultivkammer bei 37 ° C verdauen1-2 MinutenAnschließend beobachten Sie die Verdauung der Zellen unter dem Mikroskop, wenn sich die Zellen zum größten Teil runden und ausfallen, nehmen Sie schnell den Operationstisch zurück und tippen Sie ein paar Mal auf die Kulturflasche.Über 5mlenthält10 % SerumDas Kulturmedium beendet die Verdauung.

3. Blasen Sie die Zellen sanft, nach dem Abfall aussaugen, 8-10 Minuten unter 1000 RPM zentrifizieren, die Oberflüssigkeit entfernen und 1-2 mL Kulturflüssigkeit nach dem Zusatz blasen.

4. Drücken5-6ml / Flasche zusätzliche Kulturflüssigkeit, die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 in neue Inhalte aufteilen5-6ml Kulturflüssigkeit in einer neuen Schale oder Flasche.

b）、fürschwebenZellen, die sich auf folgende Methoden beziehen können:

Methode 1: Sammeln von ZellenZentrifugieren Sie unter 1000 RPM-Bedingungen für 8-10 Minuten, werfen Sie die Klärung auf, fügen Sie 1-2 ml Kultur hinzu und blasen Sie die Zellsuspension im Verhältnis von 1: 2 bis 1: 5 in neue Schalen oder Flaschen mit 8 ml Medium.

Methode 2: Sie können die Hälfte des Austauschs wählen, nach der Abgabe der Hälfte des Mediums, die restlichen Zellen suspendieren und die Zellsuspension drückenDas Verhältnis von 1:2 bis 1:3 wird in neue Schalen oder Flaschen mit 8 ml Medium aufgeteilt.

PS:Wenn der Kunde erhalten2 ml kleine Röhrenzellen, nach Erhalt der Zellen, Sprühen Sie das ganze Röhrchen mit 75% Alkohol und desinfizieren Sie es nach dem Super-Net-Tisch oder in einen Sicherheitsschrank, streng sterilen Betrieb; Kleine Röhrenzellen in eine T25-Kulturflasche zu übertragen oder6cm Petrischale, hinzugefügt5ml Medium vermischt, in die Kühlkammer über Nacht nach der Kultivierung, um die Zelldichte zu überprüfen: wenn die Dichte nicht überschritten wird80%, Austausch der Flüssigkeit weiter zu kultivieren, je nach Umstand zu übertragen oder einzufrieren. Wenn die Dichte übersteigt80% kann direkt übertragen werden (gleiche Methode).

Drei,Gefrierte Zellen:（Hinweis: Die Methode zur Einfrierung von Zellen ohne Blutfriermittel finden Sie in unserer Abteilung）

1、Zellen wachsen, um die Kulturflasche zu bedeckenBei 80% Fläche, werfen Sie die Kulturflüssigkeit in einer 25cm2-Flasche und waschen Sie die Zellen einmal mit PBS;

2、hinzufügen0,25% Verdauungsflüssigkeit ungefähr 1 ml in die Kulturflasche, beobachtet unter dem umgekehrten Mikroskop, bis die Zelle zurückkehrt und die Kulturflüssigkeit hinzufügt, um die Verdauung zu beenden, sanft die Zellen zu blasen, um sie zu entfernen, und dann die Suspension in ein 15ml Zentrifugerrohr zu übertragen, 1000rpm Zentrifuge 5min;

3、Suspendieren Sie die Zellen mit einer angemessenen Menge an Gefrierflüssigkeit und legen Sie sie in ein Gefrierrohr;

4、Stellen Sie zunächst das Zellfrierrohr in-20 ° C 1,5 h, dann auf -80 ° C verschieben

HEK-293 (293) menschliche embryonale NierenzellenEinige der verwandten Zellen sind wie folgt: