Vorbereitung von monoklonalen Antikörpern

Monoklonale Antikörper (MAb) sind Antikörper, die durch Nadelspezifische Antigen-Determination-Cluster erzeugt werden, und die Monoklonatechnologie, auch bekannt als Hybridomattechnologie, wurde 1975 von G. KOhler und Milstein gegründet. Das Hauptprinzip besteht darin, die B-Zellen, die Antikörper erzeugen, zu Hybriden mit Tumorzellen zu Hybridozellen zu verwenden, um Antikörper zu produzieren.

Die wichtigsten Schritte der Hybridom-Technik zur Vorbereitung von Monoclonal Antibody, die auf den Körper gerichtet sind, umfassen:

1) Antigen-Vorbereitung,

2. Immune Tiere,

(3) Vorbereitung von Immunmliezzellen und Myelomzellen,

(4) Zellfusion;

(5) selektive Kultur von Hybridozellen,

(6) Screening von Hybridtumorzellen;

(7) Klonierung von Hybridtumorzellen;

(8) Prüfung von monoklonalen Antikörpern;

(9) Erzeugung der Sekretion monoklonaler Antikörper-Hybridom-Zelllinien:

(10) Große Vorbereitung von monoklonalen Antikörpern.

Vorbereitungsverfahren für monoklonale Antikörper:

1, Immunität von Tieren Immunität von Tieren ist ein Prozess, der verwendet wird, um Mäuse mit Antigen zu immunisieren, um allergische B-Lymphozyten zu produzieren. In der Regel werden weibliche Balb/c-Mäuse im Alter von 6 bis 8 Wochen eingesetzt, um nach einem vorgefertigten Immunschema zu injizieren. Das Antigen gelangt durch den Blutkreislauf oder die Lymphkreislauf in periphere Immunorgane und stimuliert die entsprechenden B-Lymphozytenklone, um sie zu aktivieren, zu vermehren und zu differenzieren, um allergische B-Lymphozyten zu sein.

2, Zellfusion mit Augenbollentfernung Blutverfüllung zu Tode Mäuse, sterile Operation entfernen Milz, in flachen Scheiben pressen und schleifen, Milz Zellsuspension vorzubereiten. Die vorbereiteten Homogene Myelomzellen werden in einem gewissen Verhältnis mit Mausmitzenzellen vermischt und das Schmelzstoff Polyethyldiol hinzugefügt. Unter Polyethyldiol können verschiedene Lymphozyten mit Myelomzellen fusionieren und Hybridozellen bilden.

Das Ziel der selektiven Kultur ist das Screening der fusionierten Hybridozellen, die in der Regel HAT-selektives Medium verwenden. In HAT-Medien sterben nicht-fusionierte Myelomzellen aufgrund eines Mangels an Sub-Yellowpurine-Birpurine-Phosphoribosetransferase, die keine Heilmittel zur DNA-Synthese nutzen können. Nicht-fusionierte Lymphozyten besitzen zwar eine Sub-Yellowpurine-Phosphoribusotransferase, können aber nicht selbst langfristig in vitro überleben und sterben allmählich. Nur fusionierte Hybridozellen können im HAT-Medium überleben und sich vermehren, da sie Sub-Yellowpurin-Phosphoribosetransferase aus Milzzellen erhalten haben und die Eigenschaften besitzen, dass sich Osteomyelomzellen unendlich vermehren können.

Screening und Klonieren von Hybridozellen, die im HAT-Medium wachsen, sind nur einige Zellen, die vorbestimmte spezifische monoklonale Antikörper sekretieren, daher muss Screening und Klonierung durchgeführt werden. Normalerweise wird eine begrenzte Verdünnung zur Klonierung von Hybridozellen verwendet. Mit einer empfindlichen, schnellen und spezifischen immunologischen Methode werden positive Hybridozellen gescreent, die den gewünschten monoklonalen Antikörper erzeugen können, und die Klonaufliederung durchgeführt.

Nach der vollständigen Identifizierung des Typs, der Unterklasse, der Spezifizität, der Affinität und der Identifizierung des Epitops des Antigens und seiner Moleküle des Immunglobulins, den sie sekretieren, werden sie rechtzeitig eingefroren.

5、Große Vorbereitung von monoklonalen Antikörpern Große Vorbereitung von monoklonalen Antikörpern ist wichtig, in vitro-inductive Methoden und Körper zu verwenden

Auswärtsgesetz.

(1) In vitro inductive Methode, um Balb / c-Mäuse zu nehmen, zunächst die Injektion in die Abdominal 0. 5 ml flüssiges Glitter oder Deplantan zur Vorbehandlung. Nach 1-2 Wochen werden Hybridozellen in der Bauchhöhle geimpft. Hybridozellen vermehren sich im Bauchraum der Maus und produzieren und sekretieren monoklonale Antikörper. Nach etwa 1-2 Wochen wurde der Bauch der Maus erweitert. Durch Pumpen von Bauchwasser mit einer Spritze erhalten Sie eine große Menge monoklonaler Antikörper.

(2) Die in vitro-Kultivierung setzt die Hybridozellen in eine Kulturflasche zur Kultivierung. Während des Kultivierungsprozesses produzieren und sekretieren die Hybridozellen monoklonale Antikörper, sammeln die Kultivierungsflüssigkeit und entfernen die Zellen und ihre Fragmente zentrifugierend, um den erforderlichen monoklonalen Antikörper zu erhalten. Die Menge an Antikörpern, die durch diese Methode erzeugt werden, ist jedoch begrenzt. In den letzten Jahren sind verschiedene neue Kulturtechnologien und Geräte entstanden, die die Produktion von Antikörpern erheblich erhöht haben. Nach der Fusion der Hybridozellen muss ein Screening durchgeführt werden, bevor sie verwendet werden können. Die Hybridozellen werden zweimal unterteilt: 1. Screening der Hybridozellen; Zweitens werden Hybridozellen, die spezifische Antikörper erzeugen können, in den primären Hybridozellen gescreent, wobei die Methoden und Prinzipien der beiden Screenings unterschiedlich sind.

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