Schablonenbasierte Biologische Dünndarm-Organ-Kulturmedium-Kit

Menschliche Darm Organoid Kit

Menschliche Dünndarm-Organ-Kulturmedium-Kit

1、 Produktbeschreibung

Modellbasierte Biologische Dünndarm Organkultur Kit (Menschliche Darm Organoid Kit) ist ein Medium-Kit für den Aufbau und die Aufrechterhaltung der Quelle von erwachsenen Stammzellen des menschlichen Darms, das eine komplette Reihe von Reagentien aus der zellulären Isolation des Dünndarms, der zellulären Recycling, der zellulären Aktivitätsanalyse und der Kultivierung bietet. Das menschliche Dünndarm-Organ besteht hauptsächlich aus Dünndarmstammzellen, schnell expandierenden Zellen, Darmabsorptionszellen, Pan-Zellen, Becherzellen und einer kleinen Anzahl von endokrinen Darmzellen, in Bezug auf die Fähigkeit zur Selbsterneuerung, die Gewebestruktur, die Zelltype und die Funktion, kann das menschliche Dünndarm-Organ die Merkmale des menschlichen Epithels teilweise reproduzieren, so dass es ein ideales in vitro-Modell für die Studie des Darmstands und des Krankheitsmechanismus ist.

2、 Produktinformation

3、 Andere eigene Materialien und Reagenzien

4、 Vorbereitung von Medien für menschliche Dünndarm-Organe

Herstellung des menschlichen Dünndarm-Organkulturmediums in sterilen ultrareinen Arbeitstischen. Zur Herstellung10mlMenschliches Dünndarm-Organkulturmedium zum Beispiel, wenn die erforderliche Menge unterschiedlich ist, kann die Dosis entsprechend angepasst werden.

1、 Auf Eis aufgefrorener Mensch Dünndarm OrgankulturfaktorB(50x)Menschliche Dünndarm OrgankulturfaktorC(250x)Menschliche Dünndarm OrgankulturfaktorD(250x)。

Hinweis: Nach dem Auffrieren wird empfohlen, die menschliche Dünndarm-OrgankulturfaktorB(50x)Menschliche Dünndarm OrgankulturfaktorenC(250x). Aufbewahrung nach der einzelnen Aufteilung, um wiederholtes Einfrieren zu vermeiden.

2、 Nachdem das Medium aufgefroren ist, wird es vollständig umgekehrt und nach dem täglichen Bedarf in einem Biosicherheitsschrank oder einem sauberen Arbeitstisch aufgeteilt. Es wird empfohlen, es in10 ml/Rohr.

3、 Das aufgeteilte Medium ist bitte verschlossen und gelagert in-20℃Bei der Verwendung kann das aufgeteilte Medium nach der Platzierung der Raumtemperatur ausgeglichen verwendet werden.

Hinweis: nach der Formulierung des menschlichen Dünndarm Organkulturmedium kann in2-8°CLagerung, empfohlen innerhalb von zwei Wochen zu verwenden. Darüber hinaus ist die menschliche Dünndarm OrgankulturfaktorB(50x)Enthält Bakterien und Pilz Antibiotika(50x)。

5、 Aufbau und Kultur der Dünndarm-Organe

Hinweis: Studien mit wichtigen menschlichen Gewebematerialien müssen allen einschlägigen institutionellen und staatlichen Vorschriften entsprechen. Bevor das primäre menschliche Gewebematerial gesammelt wird, muss die informierte Zustimmung aller Probanden eingeholt werden.

a) Erstellung der Dünndarm-Organe des Ursprungsmenschens

1、 Probenahme: Verwenden Sie eine Zentrifuge, um das ursprüngliche Dünndarmgewebe in einer eiskalten ursprünglichen Gewebeschutzflüssigkeit zu sammeln und die Gewebeprobe in4°CBis die Trennung beginnt.

2、 Reinigung: Übertragen der Gewebeprobe zur VorkühlungDPBSPuffer-Petri-Schalen, Darm-Gesicht nach oben, eine Hand verwendet, um ein Ende des Darmgewebes zu halten, die andere Hand verwendet, um die Oberfläche der Darm-Flüssigkeit sanft zu kratzen, bis die Darm-Flüssigkeit gekratzt wird, platziert das Darmgewebe in den neuen enthaltenDPBSPetri-Schalen reinigen und wiederholen2Zweimal. Der Dünndarm nach der Reinigung in2mmBreite, in eine neue Petrischale übertragen, mitDPBSReinigung2Wieder.

3、 Verdauung: Verschieben des gereinigten Darmsegments in das enthaltende5mM / L EDTAVorkühlungDPBSVerdauen, in4℃Oder im gebrochenen Eis inkubieren20 bis 30 MinutenVerdauung20 MinutenLinks und rechts können Sie mit dem Pipetten sanft den Darmsegment blasen, unter dem klaren Mikroskop beobachten und die Verdauung beenden, wenn es keine Geheimnis gibt, kann die Verdauungszeit angemessen verlängert werden.

4、 Reinigung: Nach Abschluss der Verdauung werden die Gewebeabfälle in die neuen Inhalte übertragenDPBSPetri-Schalen reinigen, wiederholen2Zum EntfernenEDTA。

5、 Wiederholung: Verwenden5 mlPipette im vorgekühlten0,1 % BSAderDPBSPetrischalen oder50 mlBlasen und Wiedersuspension von Gewebefragmenten in Zentrifugerrohren, so dass das Gewebe wiederholt durch die Spitze der Pipette geht, um eine mechanische Schärkraft zu erzeugen, um das Geheimnis von der Substration zu trennen, nehmen Sie einen Teil der Suspensionsspektur, wenn eine große Anzahl von Geheimnisstrukturen zu sehen ist, stoppen Sie das Blasen und führen Sie die Gewebesuspension nach dem Blasen durch70 μmFilternetzfilter.

6、 Sammlung: Sammlung der Gewebesuspension durch den Filter,300gZentrifugalkraft4℃Zentrifugieren3 Minuten。

7、 Zählen: Entfernen, Gebrauchen1mL0,1% BSAderDPBSWiedersuspendieren des Gewebes, nehmen20 μLDie Suspension wird durch die Spekulation und die Zellenzählung durchgeführt. Nach der Zählung wird die Suspension, die die gewünschte Zellenmenge enthält, aufgezogen.300gZentrifugalkraft4℃Zentrifugieren3 MinutenHinterher auf Eis gelegt.

8、 Mit einer angemessenen Menge an Matrix-Glum resuspendieren Sie das Gewebe, die empfohlene resuspendierte Dichte ist pro10μLSubstrationssuspension enthält70bis100Ein verstecktes Nest, wieder auf dem Eis aufgehängt, nicht länger als30er JahreUm eine vorzeitige Kondensation zu vermeiden.

Hinweis: Das Verhältnis der Verdünnung sollte70%Dies dient zur Gewährleistung der strukturellen Stabilität des Matrix-Klebstoffs während des Kultivierungsprozesses.

9、 Eine gemischte Suspension von Matrix- und Gewebezellen in24Boden der Platte, jedes Loch30 μLVermeiden Sie, dass die Suspension die Seitenwand der Bohrplatte berührt.10.Nachdem die Impfung abgeschlossen ist,37℃Kohlendioxid-Thermostat in der Inkubation30 MinutenLinks und rechts wird die Substration gefestigt.

10、 Nach der Kondensation des Matrix-Gels, langsam entlang der Wand, das bereits vorbereitete menschliche Dünndarm-Organ-Kulturmedium hinzufügen,24Platte pro Loch500 μLVermeiden Sie die Beschädigung der befestigten Struktur.

11、 geben24Löcherplatte in37℃In einem Kohlendioxid-Kühlraum kultiviert.

12、 Jeder2~3Wechseln Sie das Medium einmal am Tag, das Medium sollte beim Wechsel vermieden werden, den Matrixkleber zu zerstören. Der Wachstumszustand der Organoide wird genau überwacht, idealerweise sollten die menschlichen Dünndarm-Organe5bis7innerhalb eines Tages gebaut.

b) Übertragungskultur menschlicher Dünndarm-Organe

1、 Menschliche Dünndarm Organe kultiviert bis zum Durchmesser von200 bis 500μmWenn die Größe (oder wenn die Schwarzung nicht mehr erhöht wird), kann die Übertragung des menschlichen Dünndarm-Organs durchgeführt werden (pro Generation ca.5um den Tag). Blasen Sie die Krabsorgane mit einem geschmierten Pistolenkopf und übertragen Sie die Dünndarm- und Mediumsuspension auf die geschmierte Pistole.1,5mLEPIn der Röhre.

2、 Mit einem geschmierten Pistolenkopf, der mit einer Schmierflüssigkeit geschmiert wurde, wird die schwere Organsuspension stark geblasen, mehrmals geblasen (5~102) die Dünndarm-Organe vom Matrix-Glum trennen lassen,300gZentrifugieren3 Minuten。

3、 Verzicht, Beitritt1 mlBasismedium schlägt wieder Organoide5~10Zweitens nehmen Sie eine kleine Menge Suspensionskopie, um den Zustand der Organe zu beobachten:

1) Wenn das Organoid in Stücke zerstreut ist, kann man das Organoid direkt nach dem mechanischen Blasen auswählen.300gZentrifugieren3 MinutenNach der ZentrifizierungPBSoder Basis-Medium-Reinigung2Zweimal.

2) Wenn das Organ vollständiger ist300gZentrifugieren3 MinutenAnschließend aufheben, sich anschließen.5Verdauungsflüssigkeit, verdoppelt als das Volumen von Matrix-Glum und menschlichen Dünndarm-Organgemisch, geblasen und vermischt nach37℃Verdauung im Ausbaukasten2 MinutenBeitritt5Verdauungsmittel verdoppelt das Volumen der Verdauungsflüssigkeit beendet die Verdauung. Nach der ZentrifugePBSoder Basis-Medium-Reinigung2Zweimal.

4、 Die Organoide nach der Reinigung mit einer angemessenen Menge an Matrix-Kleber resuspendieren und nach der resuspendieren auf Eis setzen, nicht länger als30er JahreUm eine vorzeitige Kondensation zu vermeiden.

Hinweis: Das Verhältnis der Verdünnung sollte70%Dies dient zur Gewährleistung der strukturellen Stabilität des Matrix-Klebstoffs während des Kultivierungsprozesses.

5、 Gemischte Suspension aus Matrix-Kleber und Organoiden in24Loch Platte Boden ist positiv, vermeiden Sie Suspension Kontakt Loch Platte Seitenwand, jedes Loch30 μL左右。

Hinweis: Um eine Kondensation bei Raumtemperatur zu verhindern, sollte dieser Schritt so schnell wie möglich durchgeführt werden.

6、 Nachdem die Impfung abgeschlossen ist,37℃Kohlendioxid-Thermostat in der Inkubation15 MinutenLinks und rechts nach der Kongelation entfernen.

7、 Herstellung menschlicher Dünndarm Organkulturmedien.

8、 Nach der Kogulation des Matrix-Gels, entlang der Löcherwand vorwärmte menschliche Dünndarm-Organ-Kulturmedium hinzufügen,24Platte pro Loch500 μL。

9、 Zellkulturplatten in37℃Die Kultivierung erfolgt in einer Kultivierungskammer, um den Wachstumszustand der menschlichen Dünndarm-Organe genau zu beobachten.3Unter dem umgekehrten Mikroskop fotografierte er die Form und Verteilung der Dünndarm-Organe in mehreren Sichtfeldern.

V2.0Ausgabe

Aktualisierung:2025/6/17